1、維拉帕米對(duì)大鼠肝臟低溫保存再灌注損傷的防護(hù)機(jī)制             作者：高昌俊，李開宗 ，管文賢 【關(guān)鍵詞】  肝移植關(guān)鍵詞: 肝移植;維拉帕米;器官保存;再灌注損傷 摘 要:目的  在自制的器官保存液XJ-1液已取得較好結(jié)果的基礎(chǔ)上，探討維拉帕米對(duì)大鼠肝臟低溫保存再灌注損傷的防護(hù)作用及其機(jī)制. 方法  XJ-1液與XJ-1+維拉帕米液保存大鼠肝臟18h后施行肝臟移植，檢測術(shù)后血清轉(zhuǎn)氨酶水平、肝組織鈣離子及丙二醛含量等指標(biāo)，觀察大鼠術(shù)后1w

2、k存活率及移植肝臟的組織病理學(xué)改變. 結(jié)果  XJ-1+維液保存的大鼠肝臟移植后4h，血清ALT，AST水平、肝組織鈣離子含量、丙二醛含量均顯著低于XJ-1液組（P<0.01，P<0.05），光鏡與電鏡下肝組織形態(tài)學(xué)改變較XJ-1液組好，同時(shí)術(shù)后生存狀況及1wk存活率也優(yōu)于XJ-1液（71%vs57%）. 結(jié)論  維拉帕米能夠減輕肝臟體外保存再灌注損傷，明顯增強(qiáng)了XJ-1液對(duì)大鼠肝臟的保存效果，原因在于其阻滯鈣通道的鈣離子拮抗作用.     Protective mechanism of verapamil on rat

3、liver grafts under cold preservation and reperfusion     GAO Chang-Jun ，LI Kai-Zong，GUAN Wen-Xian    1 Department of Anesthesiology，Tangdu Hospital，F(xiàn)ourth Military Medical University，Xi'an710038，China，2 Department of Hepatobiliary Surgery，Xi-jing Hospital，F(xiàn)ourt

4、h Military Medical University      Keywords:liver transplantation;verapamil;organ preserva-tion;reperfusion injury     Abstract:AIM To investigate the protective effect of vera-pamil on rat liver grafts under cold preservation and reperfu-sion and its mec

5、hanism on the basis that we had achieved good effects on rat liver preservation using self-designed XJ-1solution.METHODS Rat orthotopic liver transplants were performed with livers preserved for18h in XJ-1solution and XJ-1+V solution.Serum ALT，AST levels and liver tissue  concentrations of calc

6、ium and malondialdehyde（MDA）were measured.Histological changes of liver were studied.The rats status and1-week survival rates after transplantation were observed.RESULTS The levels of serum ALT，AST，concentrations of Ca2+ and MDA were significantly lower in XJ-1+V solution group than those in XJ-1sol

7、ution group at4h after transplantation（P<0.01，P<0.05）.Histological-ly，livers of XJ-1+V solution group showed less damage，and1-week survival rate was higher compared with that of XJ-1solution group（71%vs57%）.CONCLUSION Vera-pamil can reduce preservation and reperfusion injury，and im-prove the e

8、ffects of XJ-1solution on rat liver preservation due to its Ca2+ channel blocking effects.     0 引言     肝移植術(shù)后原發(fā)性無功能（PNF）是肝移植的主要死亡原因之一，與肝移植體保存-再灌注損傷密切相關(guān)1 .我們?cè)孕信渲埔环N新的器官保存液XJ-1液，已成功地用于大鼠心臟的保存，但在保存大鼠肝臟方面遜于UW液2 .由于肝臟缺血冷保存過程中鈣超載是導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷的首要途徑，我們將鈣拮抗劑維拉帕米加入XJ-1液，在大鼠原

9、位肝移植模型中，探討維拉帕米的防護(hù)作用及其機(jī)制.     1 材料和方法     1.1 材料  健康雄性Wistar大鼠84只，體質(zhì)量200300g，由北京市衛(wèi)生部生物制品監(jiān)督局動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，隨機(jī)分為3組:即XJ-1液保存組、XJ-1+維液保存組和未保存對(duì)照組，每組供、受體各14只，7只用來采取標(biāo)本，7只用來觀察移植術(shù)后生存狀況及1wk存活率.根據(jù)經(jīng)典的Kamada雙袖套法并加以改進(jìn)3 ，施行原位肝移植.液體配制用天平精確稱取乳糖酸鈉（若干）、棉子糖（若干）、組氨酸（若干）、磷酸二氫鉀3.4g，還原

10、型谷光甘肽0.9g，別嘌呤醇0.14g，硫酸鎂1.23g，以雙蒸水稀釋至1000mL，配制成XJ-1液2 ;1000mL XJ-1液中加入維拉帕米注射液25mg，即配制成XJ-1+維液.以上液體均經(jīng)1mol L-1 KOH調(diào)定pH值至7.4，2.5m孔徑的濾膜抽濾除菌，置于4冰箱保存，1wk內(nèi)用完，其中肝素鈉4000u在保存器官時(shí)臨時(shí)加入.     1.2 方法  供肝切取時(shí)以4保存液10mL經(jīng)腹主動(dòng)脈灌洗肝臟，切取供肝后立即置入盛有04保存液30mL的小燒杯中行供肝修整，修整完畢加蓋置入4冰箱保存18h再行肝臟移植，保存時(shí)間從切斷供肝血供開始

11、計(jì)算.檢測:保存18h后肝組織含水質(zhì)量分?jǐn)?shù):（濕質(zhì)量-干質(zhì)量）/濕質(zhì)量×100%，保存液中LDH，AST，ALT等酶學(xué)指標(biāo)的含量;術(shù)后4h重新開腹，從肝靜脈抽血2mL，自動(dòng)血液生化分析儀檢測AST，ALT，ALB及膽紅素，同時(shí)取肝組織標(biāo)本;硝酸法測定肝組織中Ca2+ 含量，以g g-1 （濕質(zhì)量肝組織）表示.硫代巴比妥酸法（TBA）測定肝組織氧自由基代謝產(chǎn)物丙二醛（MDA）含量，以nmol g-1 表示;光鏡及電鏡下觀察肝臟組織病理學(xué)的改變;觀察動(dòng)物術(shù)后1wk存活率及一般生活狀況.    統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:數(shù)據(jù)資料以x ±s表示，用SPLM軟件作方差

12、分析及均數(shù)檢驗(yàn)，P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異. 2 結(jié)果     2.1 保存18h后肝組織含水質(zhì)量分?jǐn)?shù)  正常鼠肝含水質(zhì)量分?jǐn)?shù)（66.6±0.7）%，XJ-1液與XJ-1+維液保存18h后的肝組織含水（64.7±0.4）%，（65.2±0.9）%，均低于正常（P<0.01），但二者之間無差別（P>0.05）;各組保存液保存鼠肝18h后，均可檢測出ALT等酶學(xué)指標(biāo)，但二者之間各項(xiàng)酶學(xué)指標(biāo)的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）.     2.2 再灌注后肝功能指標(biāo)的變化  肝臟保存18h移植后4h，ALT，AST血清水平明顯增高，肝組織損傷加重.其中，XJ-1+維液組血清ALT，AST明顯低于XJ-1液組（P<0.05），各組血清Alb水平無顯著差異，膽紅素水平普遍偏高，但無明顯規(guī)律（Tab1）.表1 移植術(shù)后4h肝功能指標(biāo)（略）2.3 肝臟組織中Ca2+ 質(zhì)量分?jǐn)?shù)  單純保存的肝臟Ca2+ 質(zhì)量分?jǐn)?shù)顯著低于移植術(shù)后的肝臟（P<0.01）;而術(shù)后XJ-1+維液組Ca2+ 質(zhì)量分?jǐn)?shù)明顯低于不含鈣拮抗劑的XJ-1液組（P<0.01，Tab2）.表2 單純