1、MS培養基母液的配制、培養基制備及滅菌一、實踐目的通過本實訓，學會配制大量元素、微量元素、鐵鹽、維生素、生長調節劑等培養基母液。通過MS固體培養基的配制，掌握配制培養基的基本技能。通過對培養基和培養用具的滅菌，掌握高壓蒸汽滅菌和干熱滅菌的一般操作技術。二、實踐用具與材料移液管、電爐、PH試紙、培養瓶、標簽、鉛筆、量筒、燒杯、容量瓶、廣口瓶、玻棒、電子天平、托盤天平、棉花、報紙等用具。硝酸銨、硝酸鉀、EDTA、硫酸亞鐵、甘氨酸、鹽酸硫胺素、鹽酸吡哆醇、IAA、BA等藥品、瓊脂、蔗糖、蒸餾水、0.1mol/L的NaOH、0.1mol/L的HCL、95%酒精三、實踐學時與場地10學時，植物組培實驗室

2、。四、實踐內容（一）三角瓶棉塞的制作棉塞的作用有：一是防止雜菌污染，二是保證通氣良好。要求： 形狀，大小，松緊適度制作：（1）取一大小適當的紗布，將其中心鋪于三角瓶口，任其自然下垂至外壁，用玻璃杯將紗布向瓶內推進，至棉塞所需長度，握住瓶壁及紗布，取適量棉花向內填塞并壓緊（2）將棉塞尾部加適量棉花并壓緊，使其略大于瓶口，收緊尾部紗布，并用棉線扎進，剪去多余線頭和紗布，棉塞制作完畢（3）使用時，再用牛皮紙或二層報紙包扎好（二）培養基母液的配制母液是欲配制培養基的濃縮液，一般配成比所需濃度高10100倍的溶液。 優點：（1）保證各物質成分的準確性。 （2）便于配置時快速移取。 （3）便于低溫保藏。1

3、、步驟測定各類母液保存容器容量，記錄。根據記錄設計各種母液所配濃度倍數和制培養基時取用量計算各種藥品所需用量稱量藥品大量元素等大于0.1g用托盤天平稱量，微量元素等小于0.1g用電子天平稱量。溶解定容寫上標簽裝瓶 將配制好的母液分別裝入試劑瓶中，貼好標簽，注明各培養基母液的名稱、濃縮倍數、日期。注意將易分解、氧化的溶液，放入棕色瓶中保存。（9）冰箱保存。2、母液配方MS培養基配方=見教材MS大量元素母液（10X）稱10升量溶解在1升蒸餾水中。配1升培養基取母液100ml。MS微量元素母液（100X） 稱10升量溶解在100ml蒸餾水中。配1升培養基取母液10ml。注意：CoCl2·6

4、H2O和CuSO4·5H2O可按10倍量，即025 mgX10=25 mg（100倍量25 mg）稱取后，定容于100ml水中，每次取1ml（0.1ml，即含025 mg的量）加入到母液中。MS鐵鹽母液（100X） 稱10升量溶解在100ml蒸餾水中。配1升培養基取母液10ml。注意配制時，應將兩種成分分別溶解在少量蒸餾水中，其中EDTA鹽較難完全溶解，可適當加熱，并將pH調至5.5。混合時，先取一種置容量瓶（燒杯）中，然后將另一種成分逐加逐劇烈震蕩，至產生深黃色溶液，最后定容，保存在棕色試劑瓶中。MS有機物母液（100X） 稱10升量溶解在100ml蒸餾水中。配1升培養基取母液10

5、ml。生長調節劑 單獨配制，濃度為1-5 mg/ml（書中為0.5-1mg/ml），一般配成4 mg/ml 。溶解生長素時，可用少量05 1N的NaOH (6-BA)或1ML95%酒精(2，4-D和NAA)溶解，溶解分裂素類用05 1N的HCl加熱溶解。 配制培養基母液時注意事項： 某些離子易發生沉淀，可先用少量蒸餾水溶解，在按配方順序依次混合； 配制母液時必須用蒸餾水或重蒸餾水； 藥品應用化學純或分析純；（三）培養基的制備1.步驟本次實驗要求制作培養基數量1L培養基成分用量10X大量元素母液100ml100X微量元素母液10ml1000XCoCl2·6H2O 母液1ml1000XC

6、uSO4·5H2O母液1ml100X鐵鹽母液10ml100X有機物母液10ml蔗糖30g瓊脂10g根據制作要求計算培養基各種母液的用量。3、按下列母液的順序，用量筒或移液管提取母液，放入有一定蒸餾水的燒杯中。4、加入固化劑：稱量10g瓊脂，溶解，在電爐上不斷加溫溶液，并不斷攪拌，使瓊脂熔化。5、加糖：放入30g已稱量蔗糖，稍加攪拌。6、加入生長調節物質，激素類型和用量視培養物不同而不同。7、定容：定容至所需升數。8、調整PH值：迅速用PH試紙測試PH，應該在5.8-6.0之間，如過高，則滴加0.1mol/L的HCL調整，過低滴加0.1mol/L的NaOH調整。9、培養基分注：趁熱將配

7、制好的培養基分注到培養瓶中，每瓶裝入20-35ML左右的培養基。分注后立即加蓋，貼上標簽，注明培養基的名稱和配制時間。（四）、滅菌1、高壓蒸汽滅菌包扎  用牛皮紙、紗布把玻璃器皿和金屬器械包扎好。裝水  先在高壓滅菌鍋內裝入一定量的水，需淹沒電熱絲。滅菌  將裝好培養基的培養皿、包扎好的玻璃器皿和金屬器械、放入高壓滅菌鍋。壓力升至49kPa時，打開排氣閥排冷氣，關閉排氣閥繼續加壓至108kPa, 鍋內溫度為12-10C時，保持15-20min，關斷電源，自然冷卻。貯藏  將培養基、器械取出置于30下備用。

8、附：組培的其他滅菌方式u 干熱滅菌洗滌  將組織培養的培養皿、三角瓶、試管等玻璃器皿進行徹底清洗。滅菌  把洗滌干凈的玻璃器皿放到烘箱中，在150溫度下，干熱滅菌1小時，或120下2小時。放置  滅菌完畢，待冷卻后取出。u 紫外線消毒用于空氣、操作臺表面和一些不能使用其它方法進行消毒的培養器皿（如塑料培養皿、培養板等）的滅菌，方便，效果好，是目前各實驗室常用的消毒法。缺點是（1）產生臭氧，污染空氣，對身體有害；（2）射線照射不到的部位起不到消毒作用，故消毒時，物品不宜相互遮擋。u 濾過消毒用于大多數培養用液，如人工合成培養液、血清、酶溶液等（這些在高溫下會發生變性，失去其功能，必須采用濾過法除菌。一般用液常用孔徑0.22um濾膜過濾即可。注意：（1）濾膜用后丟棄，濾器清洗也比較方便，先用毛刷蘸洗滌劑刷洗干凈，用自來水沖洗后，再用蒸餾水沖洗，涼干即可；（2）用前再裝上一