1、第 34 講 微生物技術1.培養基最新考綱全國卷考情1.微生物的分離和培養2.培養基對微生物的選擇作用3.某種微生物數量的測定4.微生物在其他方面的應用2018·全國卷 (37)、2018·全國卷 (37)、2018·全國卷 (37)、2017·全國卷 (37)、2016·全國卷 (39)、2016·全國卷 (39)考點一 微生物的實驗室培養(1) 概念：人們按照微生物對營養物質的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養基質。(2) 營養組成：一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽。此外，還需要滿足微生物生 長對 pH、氧氣以及特殊營養物質的要求

2、。(3) 種類 按照物理性質可分為液體培養基、固體培養基、半固體培養基。 按照成分的來源可分為天然培養基和合成培養基。 按照功能用途可分為選擇培養基、鑒別培養基等。2.無菌技術(1) 含義：在培養微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。(2) 常用方法3.大腸桿菌的純化培養(1) 制備牛肉膏蛋白胨固體培養基計算稱量 溶化 滅菌 倒平板(2) 純化大腸桿菌的方法純化培養原理：想方設法在培養基上得到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的菌 落，即可獲得較純的菌種。純化大腸桿菌的關鍵步驟：接種。 常用的微生物接種方法有兩種 a.平板劃線法：是通過接種環在瓊脂固體培養基表面連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋

3、分散到培養基的表面。如圖所示：b.稀釋涂布平板法：是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液 分別涂布到瓊脂固體培養基的表面，進行培養。(3) 菌種的保存方法對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法。對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。點悟 (1)用稀釋涂布平板法統計樣品中菌落的數目往往比實際數目 “ 低”。這是 因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。而顯微計數 法由于不能區分死菌與活菌，故所得數值可能比實際值 “偏高” 。(2) 平板劃線法只適用于微生物的提純，不適用于微生物的計數，并且在最后一次 劃線的末端處的菌種最純。下圖中圖 1 為“倒平板

4、”相關操作，圖 2 為微生物接種方法。請思考：(1)請用文字和箭頭寫出圖 1 中正確的倒平板操作流程。提示 CBA D(2)圖示 B 為何需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為何需進行 D 操作？提示 B 操作是通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養基。 D 操作是平板冷 凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后的培養基表面的濕度也比較高，將平板倒置， 既可以使培養基表面的水分更好地揮發，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養基， 造成污染。(3) 圖 2 中 E、F 依次利用何種方法進行接種？其接種工具依次是什么？其接種后 效果圖解應如下圖中 a 還是 b？提示 平板劃線法 稀釋涂布平板法 接種環 涂布器Ea、Fb微

5、生物實驗室培養及無菌操作技術(2018 ·全國卷 ，37)生物選修1：生物技術實踐 在生產、生活和科研實踐中，經常通過消毒和滅菌來避免雜菌的污染。回答下列 問題：(1) 在實驗室中，玻璃和金屬材質的實驗器具(填“可以”或“不可以” )放入干熱滅菌箱中進行干熱滅菌。(2) 牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高溫瞬時消毒法，與煮沸消毒法相比，這兩種 方法的優點是 (3) 密閉空間內的空氣可采用紫外線照射消毒，其原因是紫外線能 。在照 射前，適量噴灑 ，可強化消毒效果。(4) 水廠供應的自來水通常是經過(填“氯氣”“乙醇”或“高錳酸鉀” )消毒的。(5) 某同學在使用高壓蒸汽滅菌鍋時，若壓力達到

6、設定要求，而鍋內并沒有達到相 應溫度，最可能的原因是 。解析 (1)在實驗室中，能耐高溫的、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金屬材 質的實驗器具等可以放入干熱滅菌箱中進行干熱滅菌。 (2)巴氏消毒法或高溫瞬時 消毒法與煮沸消毒法相比，其優點表現為在達到消毒目的的同時，營養物質損失 較少。 (3)紫外線照射能消毒的原因是其能夠破壞微生物細胞中的DNA 分子。在利用紫外線照射前，適量噴灑石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可強化消毒效果。(4) 自來水通常采用氯氣消毒。 (5)采用高壓蒸汽滅菌時，若壓力達到設定要求，而 溫度未達到相應要求，最可能的原因是沒有排盡高壓蒸汽滅菌鍋內的冷空氣。答案 (1)可以

7、(2)在達到消毒目的的同時， 營養物質損失較少 (3)破壞 DNA 結 構 消毒液 (4)氯氣 (5) 未將鍋內冷空氣排盡1.無菌技術條件結果常用方法應用范圍消毒較為溫 和的物 理或化 學方法僅殺死物體 表面或內部 的部分微生 物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高溫的液體化學藥劑消毒法用酒精擦拭雙 手，用氯氣消毒 水源滅菌強烈理 化 因素殺死物體內外所有的微 生物，包括 芽孢和孢子灼燒滅菌法接種工具干熱滅菌法玻璃器皿、金屬 用具高壓蒸汽滅菌法培養基及容器2.兩種純化細菌的方法的比較比較項目平板劃線法稀釋涂布平板法關鍵操作接種環在固體平板培養基表面連續劃線一系列的梯度稀釋涂布平板法操作注意事項每

8、次劃線前后均需灼燒接種環稀釋度要足夠高， 為確保實驗 成功可以增加稀釋度的范圍菌體獲取在具有顯著菌落特征的區域的菌落中挑取菌體從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體優點可以根據菌落的特點獲得某種微生物的單細胞菌落既可以獲得單細胞菌落， 又能 對微生物進行計數缺點不能對微生物計數操作復雜，需要涂布多個平板考點二 微生物的篩選和計數1.土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(1) 原理與流程(2) 統計菌落數目時，培養基表面生長的 1 個菌落，來源于樣品稀釋液中 1個活菌。 為了保證結果準確，一般選擇菌落數在 30300 的平板進行計數。(3) 從平板上的菌落數推測出每克樣品中的菌落數的計算方法是 (平均

9、菌落數 C÷涂 布的稀釋液體積 V) ×稀釋倍數 M點悟 利用稀釋涂布平板法成功統計菌落數目的關鍵是恰當的稀釋度(4) 實驗結果分析與評價2.分解纖維素的微生物的分離(1) 纖維素酶及纖維素分解菌篩選原理、方法(2) 實驗流程(3) 分離纖維素分解菌所用的兩種培養基比較 分離纖維素分解菌的實驗中先用選擇培養基，再用鑒別培養基。 選擇培養基為液體培養基，以纖維素作為碳源和能源的微生物可以正常生長， 而其他絕大多數微生物不能正常生長。鑒別培養基含瓊脂，為固體培養基，細菌可在培養基上形成肉眼可見的菌落。 剛果紅染色法應用于鑒別 (選擇、鑒別 )培養基。3.菌株篩選原理的比較土壤中

10、分解尿素的細菌分解纖維素的微生物選擇培養基的成分：纖維素作為唯一選擇培養基的成分：尿素作為唯一的的碳源氮源鑒定方法：剛果紅染色法，即剛果紅鑒定方法：在培養基中加入酚紅指示劑，若 pH 升高，指示劑變紅，說明細與纖維素形成紅色復合物，當纖維素被分解后，培養基出現以纖維素分解菌為菌能分解尿素中心的透明圈1.(2018全·國卷 ，37)生物選修 1：生物技術實踐 將馬鈴薯去皮切塊，加水煮沸一定時間，過濾得到馬鈴薯浸出液。在馬鈴薯浸出 液中加入一定量蔗糖和瓊脂，用水定容后滅菌，得到 M 培養基。 回答下列問題：(1) M 培養基若用于真菌的篩選，則培養基中應加入鏈霉素以抑制 的生 長，加入了

11、鏈霉素的培養基屬于 培養基。(2) M 培養基中的馬鈴薯浸出液為微生物生長提供了多種營養物質， 營養物質類型 除氮源外還有(答出兩點即可 )。氮源進入細胞后，可參與合成的生物大分子有(答出兩點即可 )。(3) 若在 M 培養基中用淀粉取代蔗糖，接種土壤濾液并培養，平板上長出菌落后 可通過加入顯色劑篩選出能產淀粉酶的微生物。加入的顯色劑是 ，該方 法能篩選出產生淀粉酶微生物的原理是 (4) 甲、乙兩位同學用稀釋涂布平板法測定某一土壤樣品中微生物的數量，在同一 稀釋倍數下得到以下結果：甲同學涂布了 3個平板，統計的菌落數分別是 110、140和 149，取平均值 133； 乙同學涂布了 3 個平板

12、，統計的菌落數分別是 27、169和 176，取平均值 124。有 人認為這兩位同學的結果中，乙同學的結果可信度低，其原因是 解析 (1)在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養基， 稱做選擇培養基。 若 M 培養基是用于真菌的篩選， 則應 加入鏈霉素以抑制細菌的生長， 其屬于選擇培養基。 (2)馬鈴薯浸出液中含有淀粉、 蛋白質、脂質、無機鹽、水等多種物質，因此，除氮源外其中還有微生物生長所 需要的碳源、無機鹽等營養要素。 進入細胞的氮源可參與合成蛋白質、 核酸(DNA 、 RNA) 等含氮的生物大分子。 (3)加入顯色劑碘液后，淀粉遇碘變藍，而淀粉的水

13、 解產物則不發生這種反應。 若在 M 培養基中用淀粉取代蔗糖， 接種土壤濾液并培 養，土壤中能產生淀粉酶的微生物可將淀粉分解，菌落周圍就會出現透明圈，這 樣，我們就可以通過是否產生透明圈來篩選能產生淀粉酶的微生物了。 (4)乙同學 的結果中， 1 個平板的計數結果與另 2 個相差太遠，說明在操作過程中可能出現 了錯誤，結果的重復性太差，不能簡單地將 3 個平板的計數值用來求平均值。 答案 (1)細菌 選擇 (2)碳源、無機鹽 蛋白質、核酸 (3)碘液 淀粉遇碘液顯 藍色，產生淀粉酶的菌落周圍淀粉被水解，形成透明圈(4)乙同學的結果中， 1個平板的計數結果與另 2 個相差懸殊，結果的重復性差 2

14、.(2019 山·東湖北部分重點中學聯考 )從土壤中分離尿素分解菌和纖維素分解菌， 具有下列類似的操作過程：制備 培養基獲取土 壤樣品梯度稀釋 并接種選擇培養鑒別尿素分解 菌，挑取單菌落制備 培養基獲取土 壤樣品選擇培養梯度稀釋 并接種鑒別纖維素分解 菌， 挑取單菌落(1) 在過程的選擇培 養基是培養基， 過程的選擇培 養基是培養基。(填“固體”或“液體” )。的具體措施是 ；_的選擇措施是 。_(2) 在過程樣品梯度稀釋后， 一般只將稀釋度為 104106分別接種到 3 個平板培 養基上。接種的常用方法為 ，(3) 過程采用的鑒別方法較簡單。周圍出現透明圈但不能 100%確定為纖維

15、素分解菌的菌落， 原因是： 。_解析 (1)將微生物接種在固體培養基上培養，才能形成菌落，可見，過程 的選 擇培養基是固體培養基。進行梯度稀釋并接種前要進行過程 所示的選擇培養， 因此過程 的選擇培養基是液體培養基。 選擇培養的目的是篩選尿素分解菌，所以具體的措施是應以尿素為唯一氮源； 選擇培養的目的是篩選纖維素分解菌， 所以的選擇措施是以纖維素為唯一碳源。 (2)常采用稀釋涂布平板 (或平板劃線 ) 法，將稀釋度為 104106倍的菌液分別接種到 3 個平板培養基上。 (3)剛果紅可與 纖維素形成紅色復合物，但并不和纖維素水解后的纖維二糖和葡萄糖發生顏色反 應。當纖維素被纖維素酶水解后，剛果

16、紅 纖維素復合物就無法形成，培養基中 會出現以纖維素分解菌為中心的透明圈。可見，過程 采用倒平板時加入剛果紅 染液的鑒別方法較簡單。由于不分解纖維素 ( 或分解剛果紅或淀粉 )的微生物菌落 也可能出現透明圈，所以周圍出現透明圈的菌落，不能100%確定為纖維素分解菌。答案 (1)固體 液體 以尿素為唯一氮源 以纖維素為主要碳源 (2)稀釋涂布 平板法 (或平板劃線法 ) (3)倒平板時加入剛果紅染液不分解纖維素 (或分解剛果紅或淀粉 )的微生物菌落也可能出現透明圈選擇培養基與鑒別培養基的比較種類制備方法原理用途舉例選擇培養基培養基中加入某些化學物質依據某些微生 物對某些物質 或環境條件的 嗜好、

17、抗性而 設計從眾多微生物 中“分離”所 需的微生物， 淘汰不需要的 微生物加入青霉素分 離得到酵母菌 和霉菌鑒別培養基培養基中加入依據微生物產“鑒別”不同伊紅 美藍培某種指示劑或化學藥品生的某種代謝 產物與培養基 中的特定試劑 或化學藥品反 應，產生明顯 的特征變化而 設計種類的微生物 （注：未淘汰其 他微生物 ）養基可以鑒別大腸桿菌澄清易錯易混 ·強化科學思維易錯易混 易錯點 1 “生長因子 ”是否為所有微生物所必需？其是否在所有培養基中均需 加入？點撥 碳源、氮源、水分、無機鹽、 生長因子是微生物生長必需的五大營養成分， 但大多數培養基中都含碳源、氮源、水分、無機鹽四類物質，可能

18、不需額外添加 “生長因子 （如維生素 ）”，這是因為許多微生物可自行合成這些生長因子，而對 那些合成能力有限或不能合成生長因子的微生物 （如乳酸菌 ），則需在培養基中添 加諸如維生素等生長因子。易錯點 2 進行微生物分離或計數時如何設計 “三組” （兩種對照組與重復組 ）？ 其作用是什么？點撥 （1）兩種對照組作用比較 判斷培養基的制備是否合格即 “是否有雜菌污染 ”，需將 “未接種 ”的培養基 同時進行培養。 （此培養基若無菌落生長則合格 ） 判斷選擇培養基 “是否具有篩選作用 ”，需設立牛肉膏蛋白胨培養基進行接種 后培養，觀察兩種培養基上菌落數目，進行對比得出結論。 （若選擇培養基上菌落

19、種類遠少于對照組，則其可具 “篩選 ”作用 ）（2）重復組的設置及作用為排除“偶然因素 ”對實驗結果的干擾，在每一稀釋度下宜設置 3個平板作重復 組，選擇菌落數均在 30300 且數目相差不大的三個平板，用 “平均值 ”代入計 數公式予以計算菌落數。易錯點 3 進行平板劃線時，劃線前、劃線結束及中間各區劃線時是否均需灼燒 接種環？其目的是否相同？點撥 平板劃線法純化大腸桿菌時不同階段均需灼燒接種環但其目的有所差異。 第一次操作：殺死接種環上原有的微生物。每次劃線之前：殺死上次劃線后接種環上殘留的菌種，使下次劃線的菌種直接 來源于上次劃線的末端。 劃線結束后：殺死接種環上殘存的菌種，避免菌種污染

20、環境和感染操作者。 易錯點 4 不明確 “自養”與“異養”型微生物其培養基成分的顯著差異 點撥 (1) 自養型微生物所需的主要營養物質是無機鹽，碳源可來自大氣中的 CO2，氮源可由含氮無機鹽提供。(2) 異養型微生物所需的營養物質主要是有機物，即碳源必須由含碳有機物提供， 氮源也主要是由含氮有機物提供，部分異養型微生物也可以利用無機氮源。規范答題 甲醛是一種來源廣泛的揮發性有機污染物，具有強烈的致癌和致畸作用，利用微 生物降解甲醛來治理甲醛污染，具有高效、環保、無二次污染等優點。如圖甲為 采集活性污泥作為優良菌源，通過篩選分離出能以甲醛為唯一碳源的高效降解菌 的實驗過程。請分析回答下列問題：(

21、1) 上述實驗材料中，不需要進行滅菌處理的是，培養基滅菌的常用方法為 。該實驗過程所用的選擇培養基只能以甲醛作為唯一碳源，其原因(2) 應如何確認添加甲醛的培養基是否起到了篩選作用？(3) 由的分離活性污泥中細菌的接種方法 (如圖乙 )為法，接種時，對接種環應進行 ，在第二次及以后劃線時，總是從上一次劃線的末端開 始，這樣做的目的是 。_(4) 為研究甲醛初始濃度對菌株降解甲醛能力的影響，進行了相應實驗。當甲醛 的初始濃度小于 1 200 mg/L 時，菌株可以完全降解甲醛； 當甲醛的初始濃度增高至 1 600 mg/L時， 48 小時后菌株對甲醛的降解能力很弱， 甚至失去降解能力，其原因可能

22、是 。為了使該實 驗所得結果準確可靠，還應該設置 的對照實驗，以排除甲醛自然揮發對 實驗結果的干擾。(5) 純化菌株時，通常使用的劃線工具是 。劃線的某個平板培養后，第一 劃線區域的劃線上都不間斷地長滿了菌， 第二劃線區域所劃的第一條線上無菌落， 其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有 。答卷采樣錯因分析答題不規范，記憶不準確。 正確答案：高壓蒸汽滅菌。混淆兩種對照組用途 正確答案：制備一個接種的牛肉膏蛋白胨培養基同時培養， 觀察這兩種培養基上的菌落數目概念理解不透，混淆“消毒”與“滅菌”。正確答案：灼燒滅菌審題缺陷，解答失誤：看到“對照實驗”即盲目作答，未看到問題后面的“以排除甲醛

23、自然揮發對實驗結果的干 擾”。正確答案：不接種甲醛降解菌隨堂·真題&預測1. (2016全·國卷 ，39)空氣中的微生物在重力等作用下，可以一定程度地沉降。 某研究小組欲用平板收集教室空氣中的微生物，以了解教室內不同高度空氣中微 生物的分布情況。實驗步驟如下：配置培 養基 (成分：牛肉膏、蛋白胨、 NaCl、X 、H2O)；制作無菌平板；設置空白對照組和若干實驗組，進行相關操作； 將各組平板置于 37 恒溫箱中培養一段時間，統計各組平板上菌落的平均數。 回答下列問題：(1) 該培養基中微生物所需的氮來源于 。若要完成步驟，該培養基中的 成分 X 通常是 。(2) 步

24、驟中，實驗組的操作是 (3) 若在某次調查中，某一實驗組平板上菌落平均數為36 個/平板，而空白對照組的一個平板上出現了 6 個菌落，這種結果說明在此次調查中出現了 現象 若將 30(即 366)個/平板作為本組菌落數的平均值， 該做法(填“正確”或“不正確” )。解析 (1)牛肉膏和蛋白胨都含有蛋白質的水解產物，都可以作為氮源；平板為固 體培養基，故需要加入凝固劑瓊脂。 (2)實驗探究的是教室內 “不同高度空氣中微 生物的分布 ”，其中變量為不同高度，故需在不同高度下放置開蓋平板。同時， 為了保證單一變量，需要保證開蓋放置時間一致。為了保證實驗可靠性，需要設 置多個平行組。 (3)在完全正確

25、的操作情況下，空白對照組中不應出現菌落。若出 現菌落，表明操作過程中存在雜菌污染，屬于實驗失誤，所有實驗數據均不應采 用。答案 (1)牛肉膏、蛋白胨 瓊脂 (2)將各實驗組平板分別放置在教室不同高度的 位置上，開蓋暴露一段時間 (3)污染 不正確2. (2019 東·北師大附中調研 )大腸桿菌是遺傳學和微生物學中經典的模式生物。科 研人員要對大腸桿菌進行研究，首先要純化大腸桿菌，請結合所學知識，回答下 列問題：(1) 純化大腸桿菌首先需要制備培養基。在大腸桿菌培養過程中，除考慮營養條件外，還要考慮 、溫度等條件。(2) 可以估算出樣品中大腸桿菌密度的接種培養方法是，估算值一般比實際值

26、偏(填“大”或“小” )。(3) 濾膜法可計數水樣中的大腸桿菌。將過濾過待測水樣的濾膜緊貼在培養基上， 這屬于微生物培養中 操作。根據培養基的物理狀態來分，該培養基屬于 培養基。(4) 如圖是大腸桿菌的純化培養的一種方法， 12345 表示操作順序，培養 后可觀察到所需菌落的區域是 ，接種結束后將培養皿 放入恒溫 箱中培養。解析 (1)純化大腸桿菌首先需要制備牛肉膏蛋白胨固體培養基。 大腸桿菌的培養 過程中，除考慮營養條件外，還要考慮溫度、酸堿度和滲透壓等條件。 (2)接種大 腸桿菌最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法，其中可以估算出樣品中大腸桿 菌密度的是稀釋涂布平板法。由于兩個或兩個以上細

27、胞聚集在一起，觀察到的往 往是一個菌落，故估計數值一般偏小。 (3)過濾過待測水樣的濾膜緊貼在培養基上， 是將樣品中的大腸桿菌接種到培養基上，固體培養基適于計數。 (4)圖中 5 區域就 可得到所需要的菌落。接種結束后要將平板倒置放入恒溫箱中培養。答案 (1)牛肉膏蛋白胨固體 滲透壓(或酸堿度 )(2) 稀釋涂布平板法 小(3) 接種 固體 (4)5 倒置課后·強化訓練(時間： 30分鐘)1.(2019 山·東泰安一模 )洗衣機內部的環境非常潮濕，洗衣機使用時間越長，內部 滋生微生物的機會就越大。研究人員利用洗衣機內桶背面的殘留物進行了相關實 驗。請回答：(1) 要制備固體

28、培養基培養殘留物中的微生物，培養基中一般應含有。在倒平板操作后，將平板倒置，這樣做的目的是 (2) 以下各項中，需要消毒的是，需要滅菌的是 。培養基與培養皿；玻棒、試管，燒瓶和吸管；實驗操作者的雙手。(3) 為了檢測殘留物中含有微生物的情況，要將殘留物制成水樣稀釋，然后將稀釋 水樣用涂布器分別涂布到瓊脂固體培養基的表面進行培養，這種方法稱 為 。用該方法統計菌落數時是否需要對照組？ 。為什 么？ 答案 (1)水，碳源，氮源和無機鹽 防止培養皿蓋上凝結的水珠落入培養皿造成 污染，還可使培養皿表面的水分更好的揮發(2) (3) 稀釋涂布平板法 需要 因為需要判斷培養基是否被雜菌污染2.(2019

29、四·川雅安三診 )微生物的應用范圍相當廣泛，但優良菌種的選育是基礎和 關鍵，是顯著改善和提高產品種類、產量以及品質的先決條件。下圖是菌株分離 和篩選的一般流程，據此回答問題。采樣 富集 分離 篩選(1) 采樣：土壤有“微生物的天然培養 基”之稱，在尋找目 的菌 株時要根 據。(2) 富集：人為控制條件使目的菌種占優勢，同時 其他微生物生長，例如 培養霉菌時需將培養基的 pH 調至 。(3) 分離：從物理性質上看，分離需要配制 培養基，并采用 法滅 菌，分離過程可采用 接種。(4) 篩選：根據菌落 特_征進行鑒定 ( 至少 答兩點 )。解析 (1)不同的微生物對生存環境的要求不同，因此

30、在尋找目的菌株時，要到相 應的環境中尋找。(2) 在微生物富集步驟，要人為控制條件抑制其他微生物生長，并使得目的菌種占 優勢，如培養霉菌時需將培養基的 pH 調至酸性，不僅有利于霉菌的生長，還可 以抑制其他雜菌的生長。(3) 分離菌種應該采用固體培養基， 常用的接種方法有平板劃線法或稀釋涂布平板 法；接種菌種前需要利用高壓蒸汽滅菌法對固體培養基進行滅菌處理。(4) 不同的菌落具有不同的特征，可以根據菌落的形狀、大小、隆起程度、顏色、 透明度等特征進行鑒定。答案 (1)微生物對生存環境的要求， 到相應的環境中尋找 (2)抑制或阻止 酸性(3)固體 高壓蒸汽滅菌 平板劃線法或稀釋涂布平板法 (4)

31、形狀、大小、隆起程 度、顏色、透明度3. 嗜鹽菌常分布在曬鹽場、鹽湖、腌制品中，某生物興趣小組對嗜鹽菌進行了如 下探究和分析，請回答以下問題：(1) 獲得嗜鹽菌的第一步是從合適的環境中采集菌樣，然后按一定的方法分離、純 化。培養嗜鹽菌的培養基較普通培養基中 含量高。(2) 如圖是采用不同接種方法接種嗜鹽菌后純化培養的效果圖， 其中圖 方法不適合用于微生物的計數，出現圖 A 結果的原因是在操作時 。在進行計數時，最終選取菌落數在 范圍內的平板進行計數，不能選用菌落數過多的平板的原因是 (3) 在實驗過程中，無菌操作是非常重要的，對實驗過程中使用的玻璃器皿通常使用 法進行滅菌。解析 (1)由題意可

32、知，嗜鹽菌可以生長在高鹽的環境中，故與普通培養基相比， 培養嗜鹽菌的培養基中鹽含量較高。 (2)獲得圖 A 所示效果的接種方法為稀釋涂布 平板法，獲得圖 B 所示效果的接種方法為平板劃線法，在微生物計數時應該選用 稀釋涂布平板法接種。圖 A 中菌落集中在平板的某區域，說明在操作過程中涂布 不均勻。在計數時，為了保證結果準確，一般選擇菌落數在 30300 的平板進行 計數，若菌落數過多，菌落重疊的概率大，將產生較大誤差。 (3) 對玻璃器皿的滅 菌通常使用干熱滅菌法。答案 (1)鹽(NaCl) (2)B 涂布不均勻 30300 菌落數過多， 菌落重疊的概率 大，將產生較大誤差 (合理即可 ) (

33、3)干熱滅菌4. (2019 山·西太原模擬 )反芻動物如牛和山羊，具有特殊的器官 瘤胃，瘤胃中生 活著多種微生物，研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產菌株，并對其降解纖維素 能力進行了研究，請回答：(1) 在樣品稀釋和涂布平板步驟中，下列選項不需要的是(多選 )。A.酒精燈B.培養皿C.顯微鏡D.無菌水E.接種環(2) 向試管內分裝含瓊脂的培養基時，若試管口粘附有培養基，需要用酒精棉球擦凈的原因是 (3) 剛果紅可與形成紅色復合物，研究人員在剛果紅培養基平板上，篩選到了幾株有透明降解圈的菌落 (見圖 1)。圖中降解圈大小與纖維素酶的有關。圖中降解纖維素能力最強的菌株是(填圖中序號 )。

34、(4) 纖維素酶高產菌株在 20 長期保存時，菌液中常需加入一定量的 保 藏。(5) 研究人員用篩選到的纖維素酶高產菌株 A 和 B，在不同溫度和 pH 條件下進行 發酵，測得發酵液中酶活性的結果見圖 2，推測菌株更適合用于人工瘤胃發酵，理由是 答案 (1)CE (2)避免培養基污染棉塞(3)纖維素 量與活性 菌 2 (4)甘油(5) B 發酵過程會產熱和產酸， B 菌株在較高溫度和酸性環境下酶的活性更高5. (2019 石·家莊重點高中摸底 ) 牛奶富含礦物質和滿足人體生長發育所需的多種氨 基酸，消化率高達 98%。長期飲用牛奶有利于增強體質，但牛奶也是多種病菌的 傳播載體。如圖是

35、牛奶消毒及細菌檢測實驗的過程。請回答下列相關問題：(1) 培 養 基 中 的 蛋 白 胨 為 細 菌 的 生 長 提 供 的 營 養 物 質 主 要 有 (填兩個 )，對培養基常采用法進行滅菌。(2) 步驟稱為消毒法，步驟是 。_(3) 步驟的接種方法是 。_微生物培養過程中，為防止冷凝水影響細菌的生長，需將培養皿培養。(4) 將接種后的培養基放入中培養， 36 h后取出，統計 3個平板上的菌落數分別是 87、83 和85。經過消毒后的牛奶中，細菌數大約是個/mL。解析 (1)培養基中的蛋白胨為細菌的生長提供的營養物質主要有碳源、 氮源和維 生素；常采用高壓蒸汽滅菌法對培養基進行滅菌。 (2)

36、圖中步驟 把牛奶放在 80 恒溫水浴鍋中煮 15 min，采用的是巴氏消毒法，步驟 是梯度稀釋。 (3)接種微生 物常用平板劃線法和稀釋涂布平板法，其中只有稀釋涂布平板法可以用于微生物 計數。微生物培養過程中， 為防止冷凝水影響細菌的生長， 需將培養皿倒置培養。(4) 將接種后的培養基放入恒溫培養箱中， 培養 36 h后，統計 3個平板上的菌落數 分別是 87、83和 85，由圖可知稀釋倍數為 103，因此，經過消毒后的牛奶中，細 菌數大約是 (87 8385)/3×1038.5×104(個/mL)。答案 (1)碳源、氮源(和維生素 ) 高壓蒸汽滅菌 (2)巴氏 梯度稀釋

37、(3)稀釋涂 布平板法 倒置 (4)恒溫培養箱 8.5× 1046. (2019 四·川廣安眉山一診 )經人工誘變獲得的天冬氨酸缺陷型菌株，菌體自身不 能合成天冬氨酸，必須從外界環境中獲取天冬氨酸才能生長繁殖。下圖是科研人 員利用“影印法”篩選天冬氨酸缺陷型菌株的部分過程 (注：基本培養基中不含氨 基酸，完全培養基中含所有種類的氨基酸 )。回答下列問題：(1) 過程接種的方法是。待測培養皿中的培養基是(答“基本”或“完全” )培養基。(2) 過程是將印在同一塊絲絨布上的菌落，先后轉印至兩個不同的平板上。該過 程應該先轉印到(答“基本”或“完全” )培養基上，原因是 (3)

38、完成過程的轉印并在 28 的培養箱中培養 2 天后，兩個平板上出現的菌落 有的相同，有的不同。完全培養基上出現的菌落 A 和菌落 B中，不可能是天冬氨 酸缺陷型菌株的是菌落(答“A”或“ B”)，原因是 (4) 為了進一步鑒定篩選到的菌株確實是天冬氨酸缺陷型菌株， 科研人員又制備了 甲、乙兩個平板，這兩個平板中營養成分的差異是 。將待鑒定菌種接種 到兩個平板中，置于適宜條件下培養一段時間后，若觀察到兩個平板中菌落的生 長情況是 ，則說明該菌株是天冬氨酸缺陷型菌株。解析 (1)分析圖解可知，過程 導致菌落均勻分布，因此該方法為稀釋涂布平板 法；兩種培養基分別培養是為了篩選出氨基酸缺陷型菌株，因此

39、與基本培養基相 比，待測培養皿中特有的成分有氨基酸，類似于完全培養基。 (2)過程應將印在 絲絨布上的菌落先轉印至基本培養基上，原因是防止基本培養基中混入氨基酸。(3) 比較基本培養基和完全培養基中的菌落可知， B 菌落在基本培養基上能生長繁 殖，說明它能合成天冬氨酸，不可能是天冬氨酸缺陷型菌株。 (4) 為了進一步鑒定 篩選到的菌株確實是天冬氨酸缺陷型菌株，對照實驗的兩個平板中營養成分的差 異是是否含有天冬氨酸，接種后若兩個平板中菌落的生長情況是含有天冬氨酸的 平板上生長有菌落，另一個平板上不能生長，則說明該菌株是天冬氨酸缺陷型菌 株。答案 (1) 稀釋涂布平板法 完全 (2)基本 防止基本培養基中混入氨基酸(3) B B 菌落在基本培養基上能生長繁殖，說明它能合成天冬氨酸(4)是否含有天冬氨酸 含有天冬氨酸的平板上生長有菌落，另一個平板上不能生長7. (2019 河·南中原名校聯考 )