1、人類致病菌耐藥現(xiàn)狀人類致病菌耐藥現(xiàn)狀與防治對策與防治對策羅曉星羅曉星 教授教授第四軍醫(yī)大學藥學系 西安2005.11FOURTH MILITARY MEDICAL UNIVERSITY1 抗生素發(fā)展簡史2 細菌耐藥的現(xiàn)狀3 細菌耐藥導致的嚴重后果4 細菌耐藥發(fā)生的機理5 導致細菌發(fā)生耐藥性的原因6 控制細菌耐藥的對策一、抗生素發(fā)展簡史一、抗生素發(fā)展簡史1929 Alexander Fleming 發(fā)現(xiàn)青霉素The British Journal of Experimental Pathology,1929, Vol. X, p. 226. ON THE ANTIBACTERIAL ACTION

2、 OF CULTURES OF A PENICILLIUM, WITH SPECIAL REFERENCE TO THEIR USE IN THE ISOLATION OF B. INFLUENZAE. ALEXANDER FLEMING, F.R.C.S. From the Laboratories of the Inoculation Department, St. Marys Hospital, London. Received for publication May 10, 1929. Flemings original petri dish 1939 Howard Florey 和

3、Ernst Chain分離獲得青霉素， 用于動物試驗。研究工作結(jié)果發(fā)表在1940和1941年 的柳葉刀雜志上。1942 青霉素首次用于救治戰(zhàn)傷患者，拯救了 許多人 的生命。1950s 大量抗生素用于臨床。1944 在諾曼底登陸時期，青霉素大量地被英美軍隊用于 治療戰(zhàn)役中的傷病員。1945 Fleming 、Florey和Chain分享了諾貝爾醫(yī)學與 生理學獎。A poster from World War II, dramatically showing the virtues of the new miracle drug, and representing the high level o

4、f motivation in the country to aid the health of the soldiers at war.“Close the book on infection disease”US Surgeon General William Stewart, 1969“Infection disease will be with us for the foreseeable future”Harvard Medical School Mary Wilson, 1998 耐藥細菌在耐藥細菌在世界范圍內(nèi)廣泛散布世界范圍內(nèi)廣泛散布 耐藥菌散布速度極快耐藥菌散布速度極快 人類濫

5、用抗生素導致細菌耐藥人類濫用抗生素導致細菌耐藥細菌一旦對抗生素產(chǎn)生耐藥性，這種耐藥性一代代的傳下去，形成耐藥菌株。人類一旦感染了這些耐藥細菌，將會帶來嚴重后果。二、細菌耐藥現(xiàn)狀二、細菌耐藥現(xiàn)狀I(lǐng)nfluenza in 1918JAMA. 1999; 6;281(1):61-6.the interior of the old Kansas Building at Camp Funston during the height of the epidemic. Convalescent41008060402001980197519851990199520001997VISAVISAVREVREMRS

6、AMRSAMRSEMRSENPSPNPSPPercentage ofPathogensResistant toAntibioticsGram-Positive Resistance - United States, 1980-1999Paladino JA. Am J Health Syst Pharm 2000;57 Suppl 2:S10-2.Em ergence of Anti bi oti cEm ergence of Anti bi oti c- -R esi stant B acteri aR esi stant B acteri aCohen; Science 1992;257:

7、1050Gram-negative rodsEnterococcus sp.N. gonorrhoeaeH. influenzaeM. catarrhalisS. pneumoniae19501960197019801990S aureus PenicillinAmpicillin3rdgen CephalosporinsQuinolonesFigure: Data from voluntary reporting of the proportion of isolates of Staphylococcus aureus from blood culture that are methici

8、llin resistant, England and Wales.Journal of Antimicrobial Chemotherapy (2005) 56, 455462Variation in MRSA proportions between hospitals with AST results of more than 20 blood isolates. Only countries with more than one hospital are displayed.EARSS Newsletter 2004.3 Isolation rates of MRSA in differ

9、ent kinds of institutions. The isolation rates of MRSA in clinics ( ), small- ( ) and large- ( ) sized hospitals and total isolation rate ( ) were investigated every half year. The “1” in the Figure shows the first half of the year and the “2” shows the latter half of the year. JapanIsolation of MSS

10、A and MRSA in various age groups and their isolation from various types of specimens. MSSA and MRSA were isolated from various specimens. (A) isolation of MSSA and MRSA in age groups. (B) isolation of MSSA and MRSA from various specimens.JapanABPC, ampicillin; AMPC, amoxicillin; PIPC,piperacillin; S

11、BTPC, sultamicillin; CCL, cefaclor; CEZ, cefazolin; CMZ, cefmetazole; CTM, cefotiam; CAZ, ceftazidime; SBT/CPZ, sulbactam/cefoperazone; FMOX, flomoxef; IPM/CS, imipenem/cilastatin; LMOX, latamoxef; ABK, arbekacin; AMK, amikacin; DKB, dibekacin; EM, erythromycin; MINO, minocycline; DOXY, doxycycline;

12、 CLDM, clindamycin; NFLX, norfloxacin; OFLX, ofloxacin; LVFX, levofloxacin; FOM, fosfomycin; VCM,vancomycin.JapanBritish Medical Bulletin 2005; 73: 1724Antibiotic discovery and resistance developmentIn 1993Mortalities due to infectious disease 16.5 million vs Mortalities due to chronic disease 15.6

13、million超級細菌蔓延英醫(yī)院超級細菌蔓延英醫(yī)院 數(shù)百嬰兒病房內(nèi)感染數(shù)百嬰兒病房內(nèi)感染據(jù)英國泰晤士報2005年2月25日報道，英國每年有10萬人在醫(yī)院接受治療時被感染MRSA病菌。如今，隨著嬰兒感染MRSA細菌病例的增加，英國衛(wèi)生部投入了14萬英鎊（約合22.6萬美元）著手開展對這一問題的調(diào)查。 根據(jù)統(tǒng)計的資料顯示，在過去的5年中英國死于MRSA的人數(shù)增加了一倍，從487人增加到955人。不過專家們推測，死于這種細菌的實際人數(shù)要比記錄中多得多。中國感染控制雜志 2006; 5(2):153-155江蘇鎮(zhèn)江某醫(yī)院資料中國感染控制雜志 2006; 5(2):153-155江蘇鎮(zhèn)江某醫(yī)院資料臨床5

14、2家醫(yī)院常見分離菌株的藥物敏感性監(jiān)測中華檢驗醫(yī)學雜志 2006;29(5):452-457北京大學第三附屬醫(yī)院、解放軍總醫(yī)院、302 醫(yī)院、北京友誼醫(yī)院、北京兒童醫(yī)院、華中科技大學附屬同濟醫(yī)院、華中科技大學附屬協(xié)和醫(yī)院、湖北醫(yī)科大學附屬第一人民醫(yī)院、湖北醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院、武漢市第一醫(yī)院、武漢市第三醫(yī)院、武漢市第四醫(yī)院、武漢鋼鐵集團第一職工醫(yī)院、黃石市中心醫(yī)院、荊州市中心醫(yī)院、宜昌市中心醫(yī)院、襄樊市中心醫(yī)院、十堰市太和醫(yī)院、十堰市東風中心醫(yī)院、湖北中醫(yī)藥大學中心醫(yī)院、武漢市兒童醫(yī)院、中國醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院、中國醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院、沈陽軍區(qū)總醫(yī)院、大連醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院、大連醫(yī)學院第二附屬

15、醫(yī)院、遼寧省醫(yī)院、天津市第一中心醫(yī)院、天津市第二中心醫(yī)院、天津市第四醫(yī)院、北京協(xié)和中醫(yī)藥大學血液病研究所、天津市環(huán)湖醫(yī)院、天津醫(yī)科大學附屬醫(yī)院、天津市公安醫(yī)院、天津中醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院、天津腫瘤醫(yī)院、天津市第三中心醫(yī)院、天津市胸科醫(yī)院、天津醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院、天津市塘沽區(qū)醫(yī)院、天津市兒童醫(yī)院、廣州軍區(qū)總醫(yī)院、第一軍醫(yī)大學南方醫(yī)院、中山醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院、暨南醫(yī)學院附屬華僑醫(yī)院、廣州醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院、廣州醫(yī)學院附屬第二醫(yī)院、東莞市東華醫(yī)院、浙江大學第一附屬醫(yī)院、浙江醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院、廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院、河北醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院中華檢驗醫(yī)學雜志 2006;29(5):452-457

16、中華檢驗醫(yī)學雜志 2006;29(5):452-457金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌肺炎鏈球菌糞腸球菌屎腸球菌青霉素G84.984.62.946.274.1氨芐西林37.572.1哌拉西林53.650.4NT61.884.5哌拉西林/他唑巴坦45.229.9NT59.886.2頭孢曲松39.817.90NTNT頭孢克洛41.015.429.4NTNT頭孢噻肟36.716.20NTNT頭孢呋辛39.817.114.7NTNT頭孢丙烯39.813.717.6NTNT頭孢吡肟38.016.20NTNT亞安培南29.512.00NTNT美羅培南34.315.48.8NTNT慶大霉素

17、34.935.9NTNTNT紅霉素70.576.164.784.587.9環(huán)丙沙星42.235.9NT53.472.4氧氟沙星51.470.7左氧沙星50.267.2加替沙星35.558.6萬古霉素00005.2替考拉寧00005.220022003中國幾種革蘭陽性細菌對常見抗生素的耐藥率的比較中國幾種革蘭陽性細菌對常見抗生素的耐藥率的比較中華檢驗醫(yī)學雜志, 2005, 28(3): 254-265 中國是世界上濫用抗生素最為嚴重的國家之一，由此造成的細菌耐藥性問題尤為突出。臨床分離的一些細菌對某些藥物的耐藥性已居世界首位。但人們普

18、遍對其危害性知之甚少但人們普遍對其危害性知之甚少。由于開發(fā)新型抗生素的速度遠沒有耐藥細菌產(chǎn)生的速度快，照此下去，有專家估計，中國人將可能自食惡果，率先進入“后抗生素時代后抗生素時代”，亦即回到抗生素發(fā)現(xiàn)之前的黑暗時代，那絕對是一場重大災(zāi)難。中國致病細菌耐藥現(xiàn)狀細菌耐藥已成為世界性的災(zāi)難細菌耐藥已成為世界性的災(zāi)難致病細菌耐藥的出現(xiàn)與擴散正在成為世界性的災(zāi)難貧窮國家貧窮國家：抗生素用量不足，不能有效完成療程，導致敏感細菌被殺死，抵抗力較強的耐藥細菌得以生存，繁殖。富裕國家富裕國家：過度濫用抗生素，給許多不需使用抗生素的患者應(yīng)用抗生素；給家畜，家禽大量應(yīng)用抗生素，最終導致耐藥細菌的出現(xiàn)。世界各國之間

19、的交往頻繁，耐藥細菌極易在世界范圍內(nèi)擴。三、耐藥細菌感染后帶來的嚴重后果三、耐藥細菌感染后帶來的嚴重后果 患者死亡率增加 （與非耐藥或敏感細菌感染相比） 住院時間延長 用于治療的費用增加 （選用昂貴的抗生素，數(shù)種抗生素 合用，使用抗生素的時間延長） 與治療相關(guān)的醫(yī)療開支增加 感染并發(fā)癥增加 增加耐藥細菌散布傳播的機會有專家指出，濫用抗菌藥物對人類有四大危害：一是誘發(fā)細菌耐藥。病原微生物為躲避藥物，在不斷地變異，耐藥菌株也隨之產(chǎn)生。目前，幾乎沒有一種抗菌藥物不存在耐藥現(xiàn)象。二是損害人體器官。抗菌藥在殺菌的同時，也會造成人體損害，如影響肝、腎臟功能、胃腸道反應(yīng)及引起再生障礙性貧血等。三是導致二重感

20、染。在正常情況下，人體的口腔、呼吸道、腸道都有細菌寄生，寄殖菌群在相互拮抗下維持著平衡狀態(tài)。如果長期使用廣譜抗菌藥物，敏感菌會被殺滅，而不敏感菌乘機繁殖，未被抑制的細菌、真菌及外來菌也可乘虛而入，誘發(fā)又一次的感染。四是造成社會危害。濫用抗菌藥物可能引起一個地區(qū)某些細菌耐藥現(xiàn)象的發(fā)生，對感染的治療會變得十分困難，這樣發(fā)展下去，人類將對細菌束手無策。Critical Care Medicine 2001; 29(4)Supplement: N114-120Impact of antibiotic resistance on clinical outcomes and the cost of car

21、e美國每年大約有250,000人因患耐藥細菌感染所致菌血癥而入院，其死亡率為35 %。每位幸存者的住院時間多24天，多花費40,000美元美國國家科學院醫(yī)學研究所 (The Institute of Medicine The Academy of Science) 的調(diào)查研究表明，美國每年用于對付抗藥細菌感染的治療費用高達300億美元WHO 已向全世界發(fā)出警告DRUG RESISTANCE THREATENS TO REVERSE MEDICAL PROGRESS耐藥性的威脅正在逆轉(zhuǎn)醫(yī)學的進步耐藥性的威脅正在逆轉(zhuǎn)醫(yī)學的進步Curable diseasesfrom sore throats an

22、d ear infection to TB and malaria are in danger of becoming incurable一些諸如咽喉炎，耳朵感染，結(jié)核和瘧疾等可治一些諸如咽喉炎，耳朵感染，結(jié)核和瘧疾等可治愈的疾病正在變?yōu)椴豢芍斡膊〉奈ｋU之中。愈的疾病正在變?yōu)椴豢芍斡膊〉奈ｋU之中。目前我們還有有效藥物治愈幾乎所有的感染性疾病，但是我們正在經(jīng)歷失去這些有效藥物的危險如果我們不能有效地控制耐藥細菌感染，那么這些耐藥細菌將把這個世界帶回到抗生素前時代-既我們的祖父母曾經(jīng)生活的沒有抗生素的時代。我們決不希望這種情況發(fā)生在我們的子孫身上。我們這個世界或許只有十年或二十年的時間來使用目

23、前仍然有效的，用于控制感染疾病的抗生素，我們正在與時間競賽來控制感染性疾病，而不希望感染性疾病戰(zhàn)勝藥物。WHO總干事Gro Harlem Brundtland博士指出：WHO感染疾病計劃常務(wù)主任David Heymann博士強調(diào)：Drug-Resistant Bacteria Still on the RiseNew York Times December 28, 2000 Denise GradyBacteria are adapting to the excessive use of antibiotics by evolving into hard-to-kill superbugs.

24、Nature 18 September 2003 Tom KlarkeDrug companies snub antibiotics Speaker in the 43rd Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy in Chicago said that many firms, such as Roche and Eli Lilly, are turning away from antibiotics to concentrate on treatments for chronic illness ins

25、tead.四、細菌耐藥性發(fā)生的機理四、細菌耐藥性發(fā)生的機理1 天然或固有耐藥性(Natural or intrinsic resistance) Inaccessibility of the target (i.e. impermeability resistance due to the absence of an adequate transporter: aminoglycoside resistance in strict anaerobes) Multidrug efflux systems: i.e. AcrE in E. coli, MexB in P. aeruginosa D

26、rug inactivation: i.e. AmpC cephalosporinase in Klebsiella Target site modification (i.e. Streptomycin resistance: mutations in rDNA genes (rpsL), -lactam resistance: change in PBPs (penicillin binding proteins) Reduced permeability or uptake Metabolic by-pass (i.e trimethoprim resistance: overprodu

27、ction of DHF (dihydrofolate) reductase or thi- mutants in S. aureus) Derepression of multidrug efflux systems 2. 突變耐藥性（突變耐藥性（Mutational resistance）Drug inactivation (i.e. aminoglycoside-modifying enzymes, -lactamases, chloramphenicol acetyltransferase) Efflux system (i.e. tetracycline efflux) Target

28、 site modification (i.e. methylation in the 23S component of the 50S ribosomal subunit: Erm methylases) Metabolic by-pass (i.e trimethoprim resistance: resistant DHF reductase) 3外源性或獲得性耐藥性 (Extrachromosomal or acquired resistance ) Disseminated by plasmids or transposonsBABy-passAltered targetEfflux

29、ImpermeabilityInactivationMechanism of Antibiotic Resistance12345五、誘發(fā)細菌耐藥性的主要原因五、誘發(fā)細菌耐藥性的主要原因 濫用抗生素濫用抗生素在我國，濫用抗生素的情況十分普遍， 表現(xiàn)為盲目使用抗生素，調(diào)查資料顯示： 我國門診感冒患者約有75應(yīng)用抗生素。 外科手術(shù)圍手術(shù)期應(yīng)用抗生素的情況則高達95。 住院患者中，抗生素應(yīng)用率為79，這一數(shù)字遠高于 英國的22%和各國平均水平30%。其中使用廣譜抗生素和 聯(lián)合使用兩種以上抗生素的占58。 醫(yī)院不做藥敏試驗就使用抗生素的情況也十分嚴重。不合理處方和患者濫用使一些人畜共患的致病微生物耐藥

30、性或明顯變異的致病微生物直接傳給人類。在動植物中濫用抗生素，使一些微生物產(chǎn)生明顯的基因突變，產(chǎn)生所謂的“超級細菌”或“超級微生物”，使原本對人類不致病的微生物變得致病了抗生素不僅會通過肉類食品進入人類食物鏈，還會隨家畜的排泄物大量進入農(nóng)田、農(nóng)作物，將使大腸桿菌等自然界廣泛存在的微生物也產(chǎn)生耐藥性。 抗生素添加劑的廣泛應(yīng)用The majority of antibiotics used in food animals belong to classes of antibiotics which are also used to treat human illness; these include

31、: tetracyclines (四環(huán)素類) sulfonamides (磺胺類) penicillins (青霉素類) fluoroquinolones(喹諾酮類) macrolides (大環(huán)內(nèi)酯類） cephalosporins(頭孢菌素類) aminoglycosides(氨基糖苷類) chloramphenicols(氯霉素類) streptogramins (鏈陽性菌素類) Because these classes of antibiotics are similar, then bacteria resistant to antibiotics used in animals

32、will also be resistant to antibiotics used in humans.Prolonged chemotherapy can lead to an enhanced rate of emergence of resistance to antibacterial agents.a | Most multiplying bacteria are killed by bactericidal antibiotics, such as penicillin. b | Surviving bacteria that are not killed can, over a

33、 period of days, produce resistant clones, which are then selected by the antimicrobial agent. This results in the resistant clone becoming predominant.六、控制細菌耐藥的基本對策六、控制細菌耐藥的基本對策患者患者不要堅持為自己或子女應(yīng)用抗生素。咨詢醫(yī)生何種抗生素對自身的感染有效，并了解作用與副作用。牢記大多數(shù)的感冒、咳嗽、咽喉痛、流涕由病毒感染所致，抗生素對其無效。一定要按療程服用抗生素，即使病情好轉(zhuǎn)也不中斷。不要使用過期的抗生素。養(yǎng)成勤洗手的

34、習慣。醫(yī)生醫(yī)生不要過度開抗生素處方盡量選擇選擇性高的“窄譜”抗生素，保存廣譜抗生素用于對老抗生素耐藥的細菌檢查完每一位患者均應(yīng)洗手告訴患者細菌耐藥的危險性熟知每一位患者的免疫狀態(tài)抗微生物藥的合理選擇經(jīng)驗治療 (原始治療）：因無法確定感染的微生物， 故抗生素必須覆蓋所有可能的微生物，常選用 聯(lián)合治療或單一廣譜抗生素。確定治療：確定了病原體，選用窄譜、低毒性的抗生素。選擇抗生素時需要考慮的因素：1、選擇藥敏試驗2、藥代動力學因素：藥物到達感染部位，濃度MIC。3、給藥途徑4、宿主防御因素：宿主防御機能的狀態(tài)。5、局部因素：感染局部細胞碎片，膿液影響療效。6、年齡7、遺傳8、藥物過敏抗微生物藥治療的

35、合并應(yīng)用抗微生物藥治療的合并應(yīng)用抗微生物藥臨床合用的指征：1、尚不清楚特殊病原的嚴重感染治療。2、治療混合細菌感染。 3、提高治療特殊感染時的抗菌療效。4、阻止微生物突變所產(chǎn)生的耐藥：例如某種微生物對第 一種藥物產(chǎn)生耐藥性的頻率是10-7，對第二種藥物是 10-6, 該微生物同時對兩種藥物產(chǎn)生耐藥的理論頻率應(yīng) 該是10-13。抗生素的臨床選擇原則抗生素的臨床選擇原則首先要掌握抗生素的抗菌譜 根據(jù)致病菌的敏感度選擇抗生素 根據(jù)感染疾患的規(guī)律及其嚴重程度選擇抗生素，重癥深部感染選擇抗菌作用強，血與組織濃度均較高的抗生素。根據(jù)抗菌藥物的藥動學特點選擇抗生素（吸收、分布、消除）。 Public cam

36、paign, physician education, and increased antibiotic cost25899091 929394959605101520Stephenson, JAMA 1996;275:175 C ontrol l i ng C ontrol l i ng Pneum ococcalPneum ococcalR esi stanceR esi stance- -I cel andI cel and% nonsusceptible S. pneumoniaeC ontrol l i ng Erythrom yci n R esi stance i n C ont

37、rol l i ng Erythrom yci n R esi stance i n G roup A Streptococci G roup A Streptococci - -Fi nl andFi nl andSeppala, NEJM 1997;337:441YearErythromycinconsumption (DDD/1000)Erythromycin resistance (%)878889909192939495960123451015202530Erythromycin resistanceErythromycin consumption醫(yī)院醫(yī)院完善控制感染的各種措施使用紫

38、外線燈，改善環(huán)境衛(wèi)生，敦促工作人員經(jīng)常洗手。迅速、準確分離耐藥細菌。衛(wèi)生保健機構(gòu)衛(wèi)生保健機構(gòu)敦促兒童、青少年、成年和老年人適時免疫接種。監(jiān)測抗生素，特別是廣譜抗生素濫用的情況。政府部門政府部門建立全國耐藥細菌監(jiān)測體系，建立公共衛(wèi)生和醫(yī)療機構(gòu)之間信息交換體系，及時發(fā)布耐藥菌信息和說明。強化公共衛(wèi)生機構(gòu)快速監(jiān)測和控制感染性疾病發(fā)生的能力；完善監(jiān)測耐藥菌監(jiān)測實驗室和和流行病調(diào)查的設(shè)備；建立培訓計劃，培養(yǎng)專業(yè)人才。設(shè)立研究基金，用于研究新型疫苗和抗生素。設(shè)立研究基金用于研究細菌致病和耐藥機理。監(jiān)測抗生素在食用肉食動物飼養(yǎng)中使用的情況。國家食品藥品監(jiān)督管理局規(guī)定，從2004年7月1日起，各種處方類抗菌藥

39、物必須持執(zhí)業(yè)醫(yī)師處方才能購買研究機構(gòu)研究機構(gòu)繼續(xù)研制新型抗生素。研發(fā)新的疫苗。制藥公司制藥公司在藥品說明書上注明有關(guān)細菌耐藥的原因。繼續(xù)開發(fā)新的疫苗和抗生素。農(nóng)業(yè)農(nóng)業(yè)減少抗生素在動物飼料和食品中的應(yīng)用。世界衛(wèi)生組織世界衛(wèi)生組織制定全球行的策略，加強耐藥細菌的監(jiān)測，加強發(fā)展中國家衛(wèi)生設(shè)施（污水處理、飲水凈化等）建設(shè)。1997 the World Health Organization called for a ban on using antibiotics to promote growth in animal agriculture.1998 the European Union banne

40、d adding human-use antibiotics to animal feed. The United States has no such policy. 調(diào)控調(diào)控MRSA耐藥基因表達的信號通路耐藥基因表達的信號通路 -內(nèi)酰胺酶-內(nèi)酰胺酶PBP2aMecR1 RNAMecR1 RNABlaR1 RNABlaR1 RNAMecR1MecR1BlaR1BlaR1MecIMecI反義藥物反義藥物反義藥物BlaIBlaIAntisense antibioticFIG. 1. Effects of anti-MecR1 PS-ODN on growth of WHO-2. Cells we

41、re treated with either PS-ODNs or mismatched PS-ODN and the diluted WHO-2 was inoculated on solid agar that contained 6 g/ml of oxaccilin. The number of CFU was calculated from the number of colonies growing on plates. (A) Photograph of original culture plates. The a and b represented the control st

42、rain and mismatch PS-ODN treated strain; the c, d, e indicated 5, 10, 15 g/ml PS-ODN treated strains respectively. (B) CFU Inhibitions of WHO-2. The C was control group, the M was mismatch PS-ODN group, and 5, 10 and 15 standed for g/ml of PS-ODN in different groups. The data were expressed as mean

43、SD, n = 10, *P 0.05, *P 0.05, *P 0.01 vs control.FIG. 2. Growth rate in liquid culture of MRSA strain WHO-2. Bacteria were treated with either anti-MecR1 PS-ODNs or mismatched PS-ODN and then cells were cultured in liquid medium that contained 16 g/ml of oxacillin. Absorbance (A600) is a linear meas

44、ure of cell growth. The data were expressed as mean SD, n = 10.Fig. 3. Semi-quantification of MecR1 mRNA after treatment with antisense PS-ODN (15 g/ml) in MRSA strain WHO-2. After 2 hour incubation with PS-ODN, total-cell RNA was purified and RT-PCR was performed to quantify the transcription produ

45、cts of MecR1. (A) Gel analysis of MecR1 at 22, 24, 26, 28 and 30 cycles of PCR and 16S indicated 16S rRNA as an internal standard at 28 cycles of PCR. (B) Reduction of MecR1 mRNA in WHO-2 by PS-ODN at different cycles of PCR. n = 5, the data were expressed as mean SD, RNA expression was quantified a

46、fter scanning and by comparison with internal-control. Fig. 4. Concentration dependent reduction of MecR1 mRNA in WHO-2 by PS-ODN. After PS-ODNs were delivered into S. aureus WHO-2, cells were incubated for 2 hours. Thereafter RNA was purified and RT-PCR was carried out as described in Method and Materials. (A) Gel analysis of MecR1