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文檔簡介

1、Tris是什么?有什么作用? Tris-HCI , Tris-EDTA 如何配制?Tris :三羥甲基氨基甲烷三羥甲基氨基甲烷(Tris(hydroxymethyl)aminomethane,般簡稱為 Tris )是一種有機化合物,其分子式為(HOCH2)3CNH2 。Tris被廣泛應用于生物化學和分子生物學實驗中的緩 沖液的制備。例如,在生物化學實驗中常用的TAE和TBE緩沖液(用于核酸的溶解)都需要用到Tris。由于它含有氨基因此可以與醛發生縮合反應Tris為弱堿,在室溫(25 C下,它的pKa為8.1 ;根據緩沖理論,Tris緩沖液的有效緩 沖范圍在pH7.0到9.2之間。Tris堿的水

2、溶液pH在10.5左右,一般加入鹽酸以調節pH值至所需值,即可獲得該pH值的緩沖液。但同時應注意溫度對于Tris的pKa的影響。由于Tris緩沖液為弱堿性溶液,DNA在這樣的溶液中會被去質子化,從而提高其溶解性。人們常常在 Tris鹽酸緩沖液中加入 EDTA制成“TE緩沖液”,TE緩沖液被用于 DNA的 穩定和儲存。如果將調節pH值的酸溶液換成乙酸,則獲得“TAE緩沖液”(Tris/Acetate/EDTA ),而換成硼酸則獲得“TBE1沖液”(Tris/Borate/EDTA )。這兩種緩沖液通常用于核酸電泳實驗中。用途:有機合成中間體。在電泳緩沖液中同甘氨酸構成緩沖體系,穩定電泳過程中的

3、PH值。在凝膠中也起到穩定 PH的作用,只不過是 Tris-HCl緩沖體系。Tris緩沖液不僅被廣泛用作核酸和蛋白質的溶劑,還有許多重要用途。Tris被用于不同pH條件下的蛋白質晶體生長。 Tris緩沖液的低離子強度特點可用于線蟲( C. elegans核纖 層蛋白lamin )的中間纖維的形成。Tris也是蛋白質電泳緩沖液的主要成分之一。此外,Tris還是制備表面活性劑、硫化促進劑和一些藥物的中間物。Tris也被用作滴定標準物。常用Tris-HC神液配制:TrisHCl (O.OSmol/L, 25匸)50ml 0.1 mol/LE羥甲基氨基甲烷(Tiis)溶液與)(ml O/Irwl/L鹽

4、酸昆勻后,加水S 釋至100mlpHx/mlPHx/ml7.1045.78.1026.27.2044.78.2022.97.3043.48.3019.97.4042.08.4017.27.5040.38.5014.77 603S.58.6012477036.68.7010.37.8034.58.808.57 9032,08.907.0Ti胡子量=12114$ OlmoUL溶液為12.114g/U Ti晞液可從空氣中吸收二氧化碳 (百度及其他網站所述使ffi時注意將抵蓋嚴。酉擅不同濃度和不同PH值Tns-HCI 緩沖液時,可以先8嘛一定PH值的Oamol/L緩沖液*再稀釋到所需濃度*1 M Tr

5、is-HCI (pH7.4 , 7.6, 8.0)組份濃度 1 M Tris-HCI配制量 1L配制方法:1. 稱量121.1 g Tris置于I L燒杯中。2. 加入約800 ml的去離子水,充分攪拌溶解。3. 按下表加入濃HCI量調節所需要的pH值。pH值濃HCI7.4約 70 ml7.6約 60 ml8.0約 42ml4.將溶液定容至1 L。5.咼溫咼壓火菌后,室溫保存。注意:應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值,因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1C,溶液的pH值大約降低0.03個單位。1.5 M Tris-HCI (pH8.8)組份濃度 1.5 MTris-HCI配

6、制量 1 L 配制方法1. 稱量181.7 g Tris置于1 L燒杯中。2. 加入約800 ml的去離子水,充分攪拌溶解。3. 用濃HCI調節pH值至8.8。4. 將溶液定容至1 L。5. 咼溫咼壓火菌后,室溫保存。|注意:應使溶液冷卻至室溫后再調定pH值,因為Tris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1C,溶液的pH值大約降低0.03個單位。TE 即 Tris-EDTA buffer (10mM Tris , 1mM EDTA , pH7.4 pH7.6 pH8.0 )。常用分子生物學試劑,用于 DNA的溶解等。配制 1 0 XTE Buffer (pH7.4, 7.6,8.0)組份濃度:100 mM Tris-HCl,10 mM EDTA配制量:1 L配制方法:1.量取下列溶液,置于I L燒杯中。1 M Tris-HCl Buffer(pH

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