1、土壤速效磷的測(cè)定(0.5M碳酸氫鈉法) （一）方法原理： 用PH8.5的0.5M碳酸氫鈉溶液，于溫度25左右提取分離土壤速效磷。取一定量的提取液,控制顯色中的硫酸的濃度為0.4N，鉬酸銨的濃度為0.1%，以氯化亞錫為還原劑，使形成“磷鉬蘭”溶液。用比色計(jì)測(cè)定其蘭色強(qiáng)度，然后于標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找其相應(yīng)的濃度，從而計(jì)算土壤中的速效磷的含量。 （二）試劑配制： （1）0.5MNaHCO3：稱取化學(xué)純NaHCO3 420.0克放入血清瓶中。加8000ml水溶解后，定容10000ml，搖勻，一般情況下，這樣配制的溶液可得PH8.5。應(yīng)用酚酞指示劑檢查：取溶解后的溶液2ml于試管中，加入1滴酚酞應(yīng)為微紅色，否

2、則用0.5N NaOH逐滴加入，邊加邊搖動(dòng)血清瓶。調(diào)節(jié)至PH8.5，在定容10000ml，搖勻。 （2）硫酸鉬酸銨試劑： a.貯存液：稱化學(xué)純鉬酸銨50.0克于800ml水中，微熱溶解。另取化學(xué)純濃硫酸（比重1.84）903ml，分次徐徐加入盛有2000ml水的3000ml三角瓶，并不斷用玻棒攪拌，冷卻后備用。 將鉬酸銨溶液徐徐加入硫酸溶液中，并不斷攪拌，稀至5000ml（用容量瓶稀釋多次定容），搖勻，此溶液貯于緊塞的細(xì)口瓶中，放在暗處保存，其鉬酸銨濃度為1%，硫酸濃度為6.5N。 b.使用液：使用時(shí)視其用量，將貯存液準(zhǔn)確稀釋5倍（即1份體積貯存液加4份體積水），搖勻，即可使用。 （3）10%

3、HCL溶液：取分析純濃鹽酸（比重1.19）239ml，加入500ml水中，以水稀釋定容至1000ml，搖勺。 （4）氯化亞錫溶液：稱取1.00克氯化亞錫（二級(jí)）溶于40ml10%HCL中。此試劑每天新鮮配制。 （5）標(biāo)準(zhǔn)磷溶液：準(zhǔn)確稱取經(jīng)45烘干6小時(shí)分析純KH2PO4 4.3936克于小燒杯中，用少量水溶解后，將溶液毫無損失地溶解洗入1000ml量瓶中，加入2ml濃硫酸，稀釋至刻度，搖勻，即為1000PPm/ml標(biāo)準(zhǔn)磷溶液。再準(zhǔn)確吸取此液25.00ml于500ml量瓶中，用0.5M NaHCO3稀釋至刻度，搖勻，即為50PPm磷的標(biāo)準(zhǔn)溶液。將50PPm磷的標(biāo)準(zhǔn)溶液用0.5M NaHCO3溶液

4、準(zhǔn)確稀釋至50倍，即為1PPm磷的工作曲線標(biāo)準(zhǔn)磷溶液。每次使用前必需搖勻（不要長(zhǎng)期保存）。 （三）操作步驟： 1.制備待測(cè)液:稱取過20目篩的風(fēng)干土樣2.50克于200ml左右塑料瓶中，用快速自動(dòng)加液管加0.5M NaHCO3 50.00ml，蓋緊瓶塞，放在25±1恒溫室或保溫箱內(nèi)，保溫振蕩30分鐘，立即用干燥過濾器保溫過濾，濾液承接于60ml塑料杯內(nèi)。 2.顯色：分別用快速移液管吸取濾液5.00ml于20×180mm試管中，再加硫酸鉬酸銨使用液5.00ml，輕輕搖動(dòng)，以驅(qū)除CO2（防止試液濺出），最后充分搖勻，加氯化亞錫溶液1滴，再搖勻，當(dāng)室溫在20左右顯色1015分鐘，

5、否則應(yīng)延長(zhǎng)至2025分鐘。 3.比色：取一對(duì)經(jīng)檢查消光值相等的直徑1cm比色皿，一制裝蒸餾水做空白，另一支在測(cè)定時(shí)先倒入顯色液沖洗后，裝入顯色液，于光電比色計(jì)上，用紅色（或680nm波長(zhǎng)）濾光板測(cè)定其消光值（E）。根據(jù)E值在標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上查出其相應(yīng)濃度PPm（P）。 4.標(biāo)準(zhǔn)磷液的工作曲線的繪制： 用快速移液管準(zhǔn)確按下表，用6只20×180mm試管配制系列標(biāo)準(zhǔn)液后，進(jìn)行顯色測(cè)定： 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度（PPm） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.5M NaHCO3毫升數(shù) 5 4 3 2 1 0 1PPm/ml標(biāo)準(zhǔn)磷液毫升數(shù) 0 1 2 3 4 5 分別加入硫酸鉬酸銨使用液5

6、.00ml，充分搖勻，出去CO2，再逐個(gè)加入氯化亞錫溶液1滴，搖勻，與待測(cè)液一樣的條件顯色后進(jìn)行比色測(cè)定，以消光值E值為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)作一直線，在操作正確的條件下，方格坐標(biāo)紙上相應(yīng)的點(diǎn)，應(yīng)該連成一條直線。 （四）注意事項(xiàng)： 1.要求每天做一次工作曲線。當(dāng)更換操作人員、試劑、光電比色劑的硒光電池，燈泡和電源時(shí)，都應(yīng)重作工作曲線。每批樣品做12個(gè)參比土樣，以檢驗(yàn)分析結(jié)果可靠程度。 2.土樣中有機(jī)質(zhì)含量大于5%以上或者濾液顏色太深，可加無磷活性炭一小勺，以消除腐殖質(zhì)帶來顏色的干擾，一般情況下，沒有必要加入。 無磷活性炭的制作：先用10%鹽酸將活性炭浸泡過夜，次日用平板磁漏斗抽氣過濾，用水洗去鹽酸后，再用0.5M NaHCO3溶液浸泡一夜后過濾，以0.5M NaHCO3溶液洗3-4次，再用水洗去碳酸氫鈉，并檢查到無磷（PO43-）反應(yīng)為止（用鉬蘭法檢驗(yàn)），烘干備用。 3.顯色時(shí)間應(yīng)視具體溫度而定，一般為10-20分鐘，最好根據(jù)當(dāng)時(shí)溫度條件進(jìn)行顯色穩(wěn)定時(shí)間的試驗(yàn)。 4.提取和過濾的溫度對(duì)有效磷的含量有較大影響，據(jù)原法作者指出：用碳酸氫鈉法測(cè)定時(shí)的溫度在20-30，土壤有效磷含量在5-40PPm（P）時(shí)，溫度每相差 1測(cè)定結(jié)果平均相差0.43PPm(P)，可見溫度對(duì)測(cè)定結(jié)果影響相當(dāng)大，必須嚴(yán)格控制，提取和過濾的溫度在25±