1、大實驗六大實驗六 檸檬酸搖瓶發酵及提取檸檬酸搖瓶發酵及提取 1 1、學習掌握檸檬酸液體發酵工藝、學習掌握檸檬酸液體發酵工藝2 2、了解檸檬酸提取工藝、了解檸檬酸提取工藝實驗目的要求實驗目的要求實實 驗驗 原原 理理實驗原理 (continued)實實 驗驗 步步 驟驟1 1、斜面菌種制備、斜面菌種制備（已備好）（已備好）黑曲霉（黑曲霉（Aspergillus niger）；）；PDA培養基；培養基；28，34d實驗步驟 (continued)2、發酵培養基配制及分裝、發酵培養基配制及分裝 （以實驗室為單位）（以實驗室為單位） 配方：配方：土豆土豆 200g 煮汁、煮汁、 蔗糖蔗糖100g、NH

2、4NO3 2g，KCl 0.15g，MgSO4 0.25g，水，水1000ml；pH5 分裝：分裝：每小組每小組1瓶，每瓶瓶，每瓶100ml；棉塞或；棉塞或8層紗布；層紗布；0.08Mpa，20min 實驗步驟 (continued)3 3、制備孢子懸液及接種、制備孢子懸液及接種 （以小組為單位）（以小組為單位） 向每支斜面菌種加入向每支斜面菌種加入5ml5ml無菌水，用接種環刮菌苔表無菌水，用接種環刮菌苔表面或用無菌面或用無菌tiptip頭輕輕吹打制備孢子懸液；將懸液接頭輕輕吹打制備孢子懸液；將懸液接入滅菌并冷卻至室溫的培養基。入滅菌并冷卻至室溫的培養基。 實驗步驟 (continued)4

3、 4、搖瓶發酵及參數檢測、搖瓶發酵及參數檢測 200rpm，32；發酵；發酵4天天接種后每接種后每24h取樣測定、記錄發酵液取樣測定、記錄發酵液pH。 實驗步驟 (continued)下次實驗下次實驗 5 5、酸度測定、酸度測定 酸度酸度是指是指100ml發酵液所含檸檬酸的克數。發酵液所含檸檬酸的克數。方法：方法：取發酵液濾液或離心液取發酵液濾液或離心液1ml，以酚酞為指示劑，以酚酞為指示劑，用用0.14290.1430mol/L標準標準NaOH溶液滴定至淡溶液滴定至淡粉紅色，所消耗的粉紅色，所消耗的NaOH毫升數即為發酵液酸度。毫升數即為發酵液酸度。 實驗步驟 (continued)6、檸檬

4、酸提取、檸檬酸提取（部分）（部分） 1） 2C6H8O7H2O + CaCO3 Ca3(C6H5O7)24H2O + 3CO2 + H2O 2） Ca3(C6H5O7)24H2O + 3H2SO4 + 4H2O 2C6H8O7H2O + 3CaSO42H2O 3 3）濃縮結晶）濃縮結晶 實驗步驟 (continued) 發酵液經發酵液經24層紗布過濾（如需要可再用濾紙過層紗布過濾（如需要可再用濾紙過濾一次）或經離心（菌絲球很小的過濾太慢）取濾液；濾一次）或經離心（菌絲球很小的過濾太慢）取濾液； 加熱至加熱至70，慢慢加入適量，慢慢加入適量CaCO3，中和至，中和至pH6.06.5； 過濾得檸檬酸鈣。過濾得檸檬酸鈣。 實驗步驟 (continued)實驗結果實驗結果 實驗報告實驗報告1 1、實驗原理、方法步驟、結果及分析、實驗原理、方法步驟、結果及分析 2、思考題、思考題準準 備：備：1、發酵培養基：發酵培養基：（以實驗室為單位配制）（以實驗室為單位配制）2、