1、課題1微生物的實驗室培養1培養基中需含有碳源、氮源、水和無機鹽等營養物質。2消毒的目的是殺死物體表面或內部一部分對人體有害的微生物，滅菌則是殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子。3實驗室常用煮沸消毒法、巴氏消毒法和使用紫外線或化學藥劑進行消毒，常用的滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌等。4固體培養基的配制過程為：計算稱量溶化滅菌倒平板。5微生物接種最常用的方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法。6長期保存菌種可以采用甘油管藏法。一、培養基1.概念：人們按照微生物對營養物質的不同需求，配制出的供其生長繁殖的營養基質。2.種類：(按物理性質分) 液體培養基固體培養基3.營養構成：各種培養基一

2、般都含有水、碳源、氮源和無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養物質以及氧氣的要求。 二、無菌技術1.獲取純凈培養物的方法獲得純凈培養物的關鍵是防止外來雜菌的入侵，具體操作如下：(1)對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進行清潔和消毒。(2)將用于微生物培養的器皿、接種用具和培養基等進行滅菌。(3)為避免周圍環境中微生物的污染，實驗操作應在酒精燈火焰附近進行。(4)實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。2消毒和滅菌(1)概念：填表比較項目理化因素的作用強度消滅微生物的數量芽孢和孢子能否被消滅消毒較為溫和物體表面或內部的部分微生物不能滅菌強烈物體內外所有的微生物能(2)

3、常用方法：連線三、大腸桿菌的純化培養1制備牛肉膏蛋白胨固體培養基計算稱量溶化滅菌倒平板。2.純化大腸桿菌(1)純化原理：在培養基上將細菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一個純化的細菌菌落。 (2)接種方法：平板劃線法：通過接種環在瓊脂固體培養基表面連續劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養基的表面。稀釋涂布平板法：將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面，進行培養。(3)培養：將接種后的培養基和一個未接種的培養基都放入37_恒溫箱中，培養，12 h和24 h后，分別觀察、記錄。四、菌種的保存連線1不同培養基的具體配方不同，但一般

4、都含()A碳源、磷酸鹽和維生素B氮源和維生素C水、碳源、氮源和無機鹽D碳元素、氧元素、氫元素、氮元素解析：選C培養基中一般都含有水、碳源、氮源和無機 鹽，此外還應考慮pH、特殊營養物質及O2等條件。2獲得純凈培養物的關鍵是()A將用于微生物培養的器皿、接種用具和培養基等進行滅菌B接種純種細菌C.適宜環境條件下培養D防止外來雜菌的入侵解析：選D獲得純凈培養物的關鍵是防止外來微生物 的污染。3下列關于消毒和滅菌方法的選擇，對應錯誤的是()A培養基高壓蒸汽滅菌B牛奶煮沸消毒C接種環灼燒滅菌D實驗者雙手化學消毒解析：選B對牛奶應采用巴氏消毒法進行消毒。4制備牛肉膏蛋白胨固體培養基的步驟是()A計算、稱

5、量、倒平板、溶化、滅菌B計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌C計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板D計算、稱量、滅菌、溶化、倒平板解析：選C制備牛肉膏蛋白胨固體培養基，應先根據需 要計算各成分用量，然后稱量、溶化、滅菌、倒平板。5下列有關稀釋涂布平板法的敘述，錯誤的是()A首先將菌懸液進行一系列的梯度稀釋B然后將不同稀釋度的菌懸液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面C在適宜條件下培養D結果都可在培養基表面形成單個的菌落解析：選D稀釋涂布平板法是將菌懸液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌懸液分別涂布到瓊脂固體培養基的表面，在適宜條件下培養。只有在稀釋度足夠高的菌懸液里，聚集在一起的微生物才能被分散成 單個

6、細胞，從而在培養基表面形成單個的菌落。1培養基配制的原則(1)目的要明確：不同的微生物需求不同，根據培養目的進行配制。(2)營養要協調：營養物質的濃度和比例要適宜。營養物質濃度過低不能滿足微生物營養需要，過高對微生物的生長有抑制作用。(3)pH要適宜：各種微生物適宜生長的pH范圍不同，如細菌的適宜pH約為6.57.5、放線菌的適宜pH約為7.58.5、真菌的適宜pH約為5.06.0。為維持pH的相對恒定，可在培養基中加入緩沖劑，常用的緩沖劑是磷酸氫二鉀磷酸二氫鉀。2培養基的成分營養物質定義作用主要來源碳源凡能提供碳元素的物質構成生物體細胞的物質和一些代謝產物，有些也是異養生物的能源物質無機碳源

7、：CO2、NaHCO3等；有機碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等氮源凡能提供氮元素的物質合成蛋白質、核酸以及含氮的代謝產物無機氮源：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等；有機氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生長因子生長必不可少的微量有機物是酶和核酸的組成成分維生素、氨基酸、堿基等水不僅是優良的溶劑，而且可維持生物大分子結構的穩定培養基、空氣、代謝產物無機鹽為微生物提供除碳、氮以外的各種重要元素，包括大量元素和微量元素是細胞的組成成分、生理調節物質、某些化能自養菌的能源，酶的激活劑等無機化合物名師點撥幾種微生物的營養和能量來源微生物碳源氮源能源藍藻CO2NH、NO等光能硝化細菌CO2NH3NH3的氧化根瘤

8、菌糖類等有機物N2有機物大腸桿菌糖類、蛋白質等有機物蛋白質等有機物3幾種常用滅菌和消毒方法的比較滅菌和消毒種類主要方法應用范圍灼燒滅菌酒精燈火焰灼燒微生物接種工具，如接種環、接種針或其他金屬用具等，接種過程中的試管口或瓶口等干熱滅菌干熱滅菌箱160170 加熱12 h玻璃器皿(如吸管、培養皿等)、金屬用具等凡不適宜用其他方法滅菌而又能耐高溫的物品高壓蒸汽滅菌100 kPa、121 維持1530 min培養基及多種器材、物品煮沸消毒法100 煮沸56 min家庭餐具等生活用品的消毒巴氏消毒法7075 煮30 min或80 煮15 min牛奶、啤酒、果酒和醬油等不宜進行高溫滅菌的液體紫外線消毒30

9、 W紫外燈照射30 min接種室、接種箱、超凈工作臺化學藥物消毒用體積分數為70%75%的酒精、碘酒涂抹，來蘇爾噴灑等用于皮膚、傷口、動植物組織表面消毒和空氣、手術器械、塑料或玻璃器皿等的消毒題組沖關1下列關于微生物營養物質的描述，正確的是()A同一種物質不可能既作碳源又作氮源B除水以外的無機物僅提供無機鹽C凡是碳源都能提供能量D無機氮源也能提供能量解析：選D對同一種物質來說，含C、H、O、N四種元素的化合物既是碳源，又是氮源，如蛋白胨。除水以外的無機物種類繁多，對不同的微生物起的作用可能不同，如 CO2是光能自養細菌的碳源，但不能提供能量；NaHCO3 可作為自養型微生物的碳源。硝化細菌所利

10、用的氮源是無機氮源氨，同時氨也為硝化細菌提供用于化能合成作用的能量。2下列對滅菌和消毒的理解，不正確的是()A滅菌是指殺滅環境中的一切微生物的細胞、芽孢和孢子B消毒和滅菌實質上是完全相同的C接種環用灼燒法滅菌D常用滅菌方法有灼燒滅菌法、干熱滅菌法、高壓蒸汽滅菌法解析：選B消毒是使用較為溫和的物理或化學方法，僅殺死物體表面或內部一部分微生物，不包括芽孢和孢子。滅菌則是使用強烈的理化因素殺死物體內外所有的微生物，包括芽孢和孢子。1操作步驟2.倒平板操作的注意事項(1)培養基要冷卻到50 左右時開始倒平板。溫度過高會燙手，過低培養基又會凝固。(2)要使錐形瓶的瓶口通過酒精燈火焰。通過灼燒滅菌，防止瓶

11、口的微生物污染培養基。(3)倒平板時，要用左手的拇指和食指將培養皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，不要完全打開，以免雜菌污染培養基。(4)平板冷凝后，要將平板倒置。因為平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，培養基表面的溫度也較高，平板倒置后，既可使培養基表面的水分更好地揮發，又可防止皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。(5)在倒平板的過程中，如果不小心將培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，那么這個平板不能用來培養微生物，因為空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養基上滋生。(6)整個操作過程要在酒精燈火焰旁進行，避免雜菌污染。題組沖關3下列關于制備牛肉膏蛋白胨固體培養基的敘述，錯誤的是()A操作順序為計算、稱量、

12、溶化、倒平板、滅菌B將稱好的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯C加熱溶化瓊脂時應不斷用玻璃棒攪拌D待培養基冷卻至50 左右時倒平板解析：選A制備牛肉膏蛋白胨固體培養基的步驟是計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板，其順序不能顛倒。牛肉膏容易吸潮，所以稱好后需將稱量紙一同放入燒杯，當牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻璃棒取出稱量紙。在溶化時，加入瓊脂后應不斷用玻璃棒攪拌，防止瓊脂糊底而導致燒杯破裂。待培養基冷卻至50 左右，并且培養基處于溶化狀態時開始倒平板。4下列有關倒平板操作的敘述，錯誤的是()A將滅過菌的培養皿放在火焰旁的桌面上B使打開的錐形瓶瓶口迅速通過火焰C將培養皿打開，培養皿蓋倒放在桌面上D等待平板

13、冷卻凝固后需要倒過來放置解析：選C整個倒平板過程要防止外來雜菌的入侵，因此滅過菌的培養皿應放在火焰旁，打開的錐形瓶瓶口應迅速通過火焰，培養皿應打開一條稍大于瓶口的縫隙，而不能將培養皿蓋完全打開，等待平板冷卻凝固后需要倒過來放置。1平板劃線法(1)操作步驟(2)注意事項第一次劃線及每次劃線之前都需灼燒接種環滅菌，劃線操作結束仍需灼燒接種環。灼燒接種環之后，要等其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。在做第二次以及其后的劃線操作時，總是從上一次劃線的末端開始劃線，這樣才能使細菌的數目隨著劃線次數的增加而逐步減少，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落。劃線時最后一區域不要與第一區域相連。劃線用力要大

14、小適當，防止用力過大將培養基劃破。(3)平板劃線操作中幾次灼燒接種環的目的項目第一次劃線前灼燒每次劃線前灼燒劃線結束灼燒目的避免接種環上可能存在的微生物污染培養物殺死上次劃線結束后接種環上殘留的菌種，使下次劃線的菌種均來自上次劃線的末端殺死接種環上殘留的菌種，避免細菌污染環境和感染操作者2稀釋涂布平板法(1)操作步驟系列稀釋操作：a將分別盛有9 mL水的6支試管滅菌，并按101106的順序編號。b用移液管吸取1 mL培養的菌液，注入101倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸3次，使菌液與水充分混勻。c從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管中，重復b步的混勻操

15、作。依次類推，直到完成最后一支試管的稀釋。涂布平板操作：(2)注意事項每支試管及其中的9 mL水、移液管等均需滅菌；操作時，試管口和移液管應在離酒精燈火焰12 cm處。涂布器用體積分數為70%酒精消毒，取出時，讓多余酒精在燒杯中滴盡，然后將沾有少量酒精的涂布器在酒精燈火焰上引燃。不要將過熱的涂布器放在盛放酒精的燒杯中，以免引燃其中的酒精。酒精燈與培養皿距離要合適，移液管管頭不要接觸任何物體。 名師點撥平板劃線法和稀釋涂布平板法的比較(1)單細胞菌落的獲得： 利用平板劃線法接種時，單細胞菌落從后劃線的區域挑取；利用稀釋涂布平板法接種時，只有合適的稀釋度才能得到單細胞菌落。 (2)兩種接種方法的應

16、用： 兩種方法都能將微生物分散到固體培養基表面，以獲得單細胞菌落，達到分離純化微生物的目的；稀釋涂布平板法還能對微生物進行計數，而平板劃線法不能用于微生物的計數。 3.實驗結果分析與評價(1)未接種的培養基表面若有菌落生長，說明培養基被污染；若無，則說明未被污染。(2)在接種大腸桿菌的培養基上可觀察到獨立的菌落。有光滑型菌落，菌落邊緣整齊，表面有光澤，濕潤、光滑、呈灰色；也有粗糙型菌落，菌落扁平，干澀、邊緣不整齊；還有黏液型菌落，為含莢膜菌的菌落。(3)培養12 h和24 h，菌落大小不同，培養24 h，菌落大，灰色深，光澤度強。(4)若在培養基中觀察到不同形態的菌落，原因可能是菌液不純、混入

17、其他雜菌或在實驗操作過程中被雜菌污染。題組沖關5下列關于平板劃線操作的敘述，正確的是()A使用已滅菌的接種環、培養皿，在操作過程中不需要再滅菌B打開含菌種的試管，需通過酒精燈火焰滅菌，取出菌種后需馬上塞上棉塞C將沾有菌種的接種環迅速伸入平板內，劃三至五條平行線即可D最后將平板倒置，放在培養箱中培養解析：選D在平板劃線時，已滅過菌的接種環在每次劃線后，必須用灼燒滅菌法滅菌，以殺死上次劃線結束后接種環上殘留的菌種；盛有菌種的試管在打開或重新塞棉塞前，都需將試管口通過酒精燈火焰灼燒滅菌；在平板內劃三至五條平行線后應蓋上皿蓋，并灼燒接種環，待其冷卻后，從第一區域劃線的末端開始往第二區域劃線，并按此操作

18、繼續往三、四、五區域劃線；接種完成后，需將平板倒置放入培養箱，以防培養皿皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染。6下列關于微生物接種的描述，正確的是()A平板劃線法只用于固體培養基的接種，而稀釋涂布平板法只用于液體培養基的接種B平板劃線法不能用于微生物的計數，而稀釋涂布平板法可用于微生物的計數C利用平板劃線法不能得到單菌落，而利用稀釋涂布平板法能得到單菌落D平板劃線法所用的接種工具不需要滅菌，而稀釋涂布平板法所用的接種工具需要滅菌解析：選B這兩種接種方法都可用于固體培養基的接種，都能用于形成單菌落，接種工具都要進行嚴格滅菌處理。 隨堂基礎鞏固1下列關于培養基的說法，正確的是()A任何培養基都必須含有

19、碳源、氮源、礦質元素、水及生長因子B培養基只有兩類：液體培養基和固體培養基C固體培養基中加入少量水即可制成液體培養基D配制培養基時要注意各種養分的濃度和比例解析：選D不同微生物對營養物質的需求不同，如自養 微生物的培養基不需要加碳源，自生固氮菌的培養基不 需要加氮源。按不同的分類標準，培養基可有不同的種 類和作用，其中固體培養基是在液體培養基里加入瓊脂 等凝固劑配制而成的。配制培養基時要注意各種養分的 濃度和比例。2下列操作與消毒滅菌無關的是()A接種前用酒精燈火焰灼燒接種環B接種前用酒精擦拭雙手C將平板倒置，放入培養箱中培養D接種在酒精燈的火焰旁完成解析：選C接種用具、器皿、空氣中都存在大量

20、微生物，必須嚴格地消毒滅菌。A、B、D三項都是實驗操作過程 中消毒或滅菌的措施。將平板倒置，放入培養箱中培養與滅菌無關。3采用干熱滅菌、灼燒滅菌、高壓蒸汽滅菌、紫外線照射等幾種方法，可分別殺死哪些部位的雜菌()A接種環、吸管、培養基、接種室B吸管、接種環、培養基、接種箱C培養基、吸管、接種環、接種箱D培養皿、吸管、培養基、雙手解析：選B干熱滅菌是將滅菌物品放入干熱滅菌箱內，在160170 下加熱12 h，適用于耐高溫且需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培養皿)和金屬用具等；灼燒滅菌是利用酒精燈火焰的充分燃燒層滅菌，如接種針、接種環等；高壓蒸汽滅菌用高壓蒸汽滅菌鍋，一般在壓力為100 kPa

21、，溫度為121 的條件下，維持1530 min，主要用于培養基滅菌；紫外線照射適用于物體表面滅菌和空氣滅菌，如接種室、接種箱、超凈工作臺等，使用前用紫外線照射約30 min。4不同的微生物對營養物質的需要各不相同。下列有關一種以CO2為唯一碳源的自養微生物營養的描述，不正確的是()A氮源物質為該微生物提供必要的氮元素B碳源物質也是該微生物的能源物質C無機鹽是該微生物不可缺少的營養物質D水是該微生物的營養要素之一解析：選B由題干以CO2為唯一碳源可知，該微生物可以利用CO2合成有機物，CO2不能為微生物提供能量，其能源來自于光能或氧化無機物釋放出的化學能。5將接種后的培養基和一個未接種的培養基都

22、放入37 恒溫箱的目的是()A對比觀察培養基有沒有被微生物利用B對比分析培養基是否被雜菌污染C沒必要放入未接種的培養基D為了下次接種時再使用解析：選B對未接種的培養基進行培養，起到對照作用，可確定培養基是否被雜菌污染。6下列有關平板劃線操作的描述，不正確的是()A將接種環放在酒精燈火焰上灼燒，直到接種環燒紅B接種環在平板上劃線的位置是隨機的C在挑取菌種前和接種完畢后均要將試管口通過酒精燈火焰D最后一區的劃線不能與第一區相連解析：選B將接種環放在酒精燈火焰上灼燒，直到接種環燒紅；接種環在平板上劃線的位置不是隨機的；在挑取菌種前和接種完畢后均要將試管口通過酒精燈火焰；最后 一區的劃線不能與第一區相

23、連。7下圖甲、乙是微生物接種常用的兩種方法，請回答相關問題：(1)圖甲是利用_法進行微生物接種，圖乙是利用_法進行微生物接種。這兩種方法所用的接種工具分別是_和_；對這兩種接種工具進行滅菌和消毒的方法依次是_和酒精消毒。(2)平板劃線時，為保證微生物的數目隨劃線次數的增加而逐步減少，每次劃線都要從_開始，平板劃線結束后，最后一次劃的線不能與第一次劃的線_。(3)接種操作為什么一定要在火焰附近進行？ _。(4)下圖是接種后培養的效果圖解，其接種方法是_(填“圖甲”或“圖乙”)。(5)假設用圖乙所示方法接種培養結束后，發現培養基上菌落連成一片，可能的原因是什么？_。解析：(1)圖甲和圖乙分別是平板

24、劃線法和稀釋涂布平板法進行微生物接種，這兩種方法所用的接種工具分別是接種環和涂布器。(2)平板劃線時，每次劃線前都要從上一次劃線的末端開始，最后一次劃線不能與第一次劃線相連。(3)由于在酒精燈火焰附近存在著無菌區域，因此接種常在火焰附近進行。(4)培養基上的菌落分布均勻，接種方法為稀釋涂布平板法。(5)采用稀釋涂布平板法進行菌種分離時，稀釋度要足夠高，否則會使微生物不能分散成單個細胞。答案：(1)平板劃線稀釋涂布平板接種環涂布器灼燒滅菌(2)上一次劃線的末端相連(或相接、相交、交叉等)(3)火焰附近存在著無菌區域(4)圖乙(5)稀釋倍數不夠，菌液的濃度太高課時跟蹤檢測一、選擇題1下列對常用的無

25、菌操作的描述，錯誤的是()A無菌操作的目的是防止雜菌污染B對操作者進行消毒的方法是用酒精擦拭雙手C實驗操作過程應在酒精燈火焰附近進行D玻璃器皿(吸管、培養皿)可用酒精擦拭進行滅菌解析：選D無菌技術的主要目的是防止培養物被其他外來微生物污染。對操作者應用較溫和的方法進行消毒。實驗操作過程應在酒精燈火焰附近進行，防止瓶口空氣中的微生物污染培養基。對無菌操作用到的玻璃器皿要用干熱滅菌法滅菌。2培養基、培養皿、接種環、實驗操作者的雙手、空氣、牛奶所采用的滅菌或消毒方法依次是() 化學消毒灼燒滅菌干熱滅菌紫外線消毒 高壓蒸汽滅菌巴氏消毒ABC D解析：選A培養基用高壓蒸汽滅菌；培養皿耐高溫，需用干熱滅菌

26、；接種環可用灼燒滅菌達到迅速徹底地滅菌的效果；實驗操作者的雙手可用化學藥劑進行消毒，如用酒精擦拭雙手；空氣可用紫外線消毒；為不破壞牛奶中的營養成分，可采用巴氏消毒。3(江蘇高考)做“微生物的分離與培養”實驗時，下列敘述正確的是()A高壓滅菌加熱結束時，打開放氣閥使壓力表指針回到零后，開啟鍋蓋B倒平板時，應將打開的皿蓋放到一邊，以免培養基濺到皿蓋上C為了防止污染，接種環經火焰滅菌后應趁熱快速挑取菌落D用記號筆標記培養皿中菌落時，應標記在皿底上解析：選D在高壓滅菌的操作過程中，加熱結束后應讓滅菌鍋內溫度自然下降，待壓力表的壓力降到零時，打開放氣閥，旋松螺栓，打開蓋子。倒平板時，用左手將培養皿打開一

27、條稍大于瓶口的縫隙，而不是完全取下放到一邊。接種環經火焰灼燒滅菌后應在火焰旁冷卻后，再用其挑取菌落。在微生物的培養中，一般在皿底上用記號筆做標記。4下列有關平板劃線法操作的敘述，不正確的是()A第一步灼燒接種環是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物B每次劃線前，灼燒接種環是為了殺死上次劃線結束后，接種環上殘留的菌種C在每一區域內劃線時，接種環上的菌種直接來源于菌液D劃線結束后，灼燒接種環能及時殺死接種環上的菌種，避免細胞污染環境和感染操作者解析：選C在用平板劃線法分離大腸桿菌的實驗中，接種環取菌種前灼燒的目的是為了避免接種環上可能存在的微生物污染培養物；以后每次劃線前灼燒接種環是為了殺死

28、上次劃線后殘留的菌種；劃線結束后仍需灼燒接種環，是為了避免細菌污染環境和感染操作者。從第二次劃線開始，每次劃線時接種環上的菌種直接來源于上次劃線的末端。5為了保持菌種的純凈需要進行菌種的保藏，下列有關敘述不正確的是()A對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法B臨時保藏的菌種一般是接種到試管的斜面培養基上C臨時保藏菌種容易被污染或產生變異D對于需要長期保存的菌種，可以采用低溫4 保藏的方法解析：選D對于需要長期保存的菌種，可采用甘油管藏法，即在3 mL甘油瓶中加入1 mL甘油后滅菌，將1 mL 培養的菌液轉移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在20 的冷凍箱中保存。6用平板劃線法或稀釋涂布平板

29、法純化大腸桿菌時() 可以用相同的培養基都需要使用接種針進行接種 都需要在酒精燈火焰旁進行接種都可以用來計數活菌A BC D解析：選C平板劃線法或稀釋涂布平板法都使用固體培養基；平板劃線法采用接種針或接種環進行操作，而稀釋涂布平板法采用涂布器進行操作；進行接種操作時，要進行無菌操作，需要在酒精燈火焰旁接種，避免空氣中的微生物污染培養基；平板劃線法一般用于分離菌體而不能計數活菌。7下表是對四種生物的能源、碳源、氮源、新陳代謝類型的描述，正確的是()選項項目硝化細菌乳酸菌根瘤菌衣藻A能源NH3乳酸N2光能B碳源CO2糖類等糖類等CO2C氮源NH3N2N2NOD代謝類型自養需氧型異養厭氧型自養需氧型

30、自養需氧型解析：選B從能源來看，硝化細菌的能源是氧化氨氣為硝酸鹽過程釋放的能量，乳酸菌和根瘤菌需糖類等有機物供能；從氮源看，乳酸菌需要NH、NO；從代謝類型看，根瘤菌為異養需氧型；從碳源看，硝化細菌與衣藻需CO2，乳酸菌和根瘤菌需要糖類等有機物。8下面是微生物平板劃線示意圖，劃線的順序為1、2、3、4、5。下列敘述正確的是()A在五個區域中劃線前后都要對接種環和培養基進行滅菌B劃線操作時完全打開皿蓋，劃完立即蓋上C接種時不能劃破培養基，否則難以達到分離單菌落的目的D第1區和第5區的劃線最終要連接起來，以便比較前后的菌落數解析：選C在每次劃線前后都要對接種環進行滅菌；進行劃線操作時，左手將培養皿

31、的皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環迅速伸入平板內，劃三至五條平行 線，蓋上皿蓋；注意接種時不能劃破培養基，否則難以達到分離單菌落的目的；第1區和第5區的劃線不能相連。9平板劃線法和稀釋涂布平板法是純化微生物的兩種常用方法，下列描述正確的是()A都要將菌液進行一系列的梯度稀釋B平板劃線法是將不同稀釋度的菌液通過接種環在固體培養基表面連續劃線的操作C稀釋涂布平板法是將不同稀釋度的菌液倒入液體培養基進行培養D都可在培養基表面形成單個的菌落解析：選D平板劃線法不需要進行梯度稀釋，稀釋涂布平板法需要將不同稀釋度的菌液涂布到固體培養基的表面。平板劃線法和稀釋涂布平板法都可在培養基表面形成單菌落。1

32、0某研究小組從有機廢水中分離微生物用于廢水處理，下列敘述正確的是()A培養基分裝到培養皿后進行滅菌B轉換劃線角度后需灼燒接種環再進行劃線C接種后的培養皿須放在光照培養箱中培養D培養過程中每隔一周觀察一次解析：選B在配制培養基的過程中要先滅菌后倒平板；轉換劃線角度后要對接種環進行灼燒滅菌，殺滅接種環上殘留的菌種，再進行劃線；接種后的培養皿應放置在恒溫培養箱中培養；微生物生長、繁殖較快，在培養過程中一般要隔天觀察一次。二、非選擇題11在培養基上將細菌稀釋或分散成單個細胞，使其長成單個的菌落，這個菌落就是一個純化的細菌菌落。實驗基本步驟如下：請回答下列有關問題：(1)配制培養基時，各成分含量確定的原

33、則是_。不論何種培養基，在各種成分都溶化后分裝前，要進行的是_。(2)倒平板的適宜溫度是50左右，原因是_。待平板冷凝后，要將平板倒置，這樣既可使培養基表面的水分更好地揮發，又可防止_。(3)純化菌株時，若使用稀釋涂布平板法進行接種，應選擇的涂布工具是圖中的_；若使用平板劃線法進行接種，應選擇的接種工具是圖中的_。(4)劃線的某個平板培養后，第一劃線區域的劃線上都不間斷地長滿了菌落，第二劃線區域所劃的第一條線上無菌落，其他劃線上有菌落。造成劃線無菌落可能的操作失誤有_。(5)若用大腸桿菌進行實驗，使用過的培養基及培養物必須經過_處理后才能丟棄，以防止培養物的擴散。解析：培養基中各成分含量要根據

34、微生物的生長需要來確定。微生物生長需要一定的pH，所以培養基裝瓶前需要調節pH。由圖可知，A為接種環，B為涂布器，C為膠頭滴管，D為接種針，故稀釋平板法應選擇的涂布工具應是B，平板劃線法應選擇的接種工具是A。由題意分析可知，造成此現象的原因可能有兩個：一是接種環灼燒后未冷卻，菌種接觸到高溫的接種環而死亡；二是劃第二劃線區域第一條線時未從第一區域末端開始。有的大腸桿菌會釋放一種強烈的毒素，因此，使用過的培養基及其培養物必須經過滅菌處理后才能丟棄，以防止培養物的擴散。答案：(1)所培養微生物對各營養成分的需要量調整pH(2)溫度過高會燙手，過低培養基又會凝固皿蓋上的水珠落入培養基，造成污染(3)BA(4)接種環灼燒后未冷卻劃線未從第一區域末端開始(5)滅菌12下表是培養某微生物的培養基的配方，請回答下列問題：試劑牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂加水定容至用量5 g10 g5 g20 g1 000 mL(1)培養基的類型很多，但培養基中一般都含有水、碳源、_和無機鹽。上述培養基配方中能充當碳源的成分是_。培養基配制完成以后，一般還要調節pH并對培養基進行_處理。(2)在配制培養基時，除考慮營養條件外，還要考慮_、_和滲透壓等條件。(3)在微生物培養操作過程中，為防