1、    高效液相色譜法測定鹽酸環丙沙星血藥濃度及其藥動學研究        摘要采用高效液相色譜法(HPLC)測定鹽酸環丙沙星的血藥濃度。色譜條件為：紫外檢測波長277nm；分析柱為HP-RP-ODSC18柱，4.6×220mm；流動相：乙腈(溴化四丁基銨0.008mol.L-1+磷酸二氫鉀水溶液0.011mol.L-1)=1486，配好后磷酸調pH至2.74±0.02。本法血清最低檢出濃度0.01g.ml-1。對10名受試者口服500mg兩種鹽酸環丙沙星

2、片后進行藥動學和生物利用度研究。藥-時曲線經擬合為二室開放模型，其T1/2分別為4.68±0.53h與4.40±0.47h，Tmax分別為1.28±0.07h與1.33±0.07h，Cmax分別為6.44±0.61(g.ml-1)與5.88±0.40(g.ml-1)，AUC分別為19.88±1.83(g.h-1.ml-1)和19.24±1.08(g.h-1.ml-1)。供試品片劑的相對生物利用度為103.32±4.81%(99.58±4.63%，經含量校正)，經統計分析兩種制劑具有生物等效性。關

3、鍵詞鹽酸環丙沙星，高效液相色譜，藥物動力學，生物利用度鹽酸環丙沙星(Ciprofloxacin Hydrochloride)是新一代的氟喹諾酮類合成抗菌藥，具有抗菌譜廣、抗菌活性強(尤對革蘭陰性桿菌作用強)，同時又具有口服吸收完全，體內分布廣泛等特點，國內外已廣泛用于臨床，取得了良好的治療效果1.2。10名健康男性志愿者口服兩廠家環丙沙星片劑500mg，用自建的HPLC法測定供試品與對照品鹽酸環丙沙星不同時間的血藥濃度。經藥物動力學軟件3P87計算鹽酸環丙沙星的藥動學參數和供試品片劑的相對生物利用度，以評價供試品與對照品鹽酸環丙沙星在人體內的作用程度，為臨床治療的有效性和安全性提供依據。1材料

4、和方法1.1受試者漢族健康男性志愿受試者10名，一般體檢、實驗室檢查(血、尿常規，肝、腎功能)及心電均正常，且均無煙酒史。1.2藥品與試劑供試品鹽酸環丙沙星片劑(250mg/片；含量99.5%；溶出度96.9%；批號941025，由江西東方立可生制藥有限公司提供)；對照品鹽酸環丙沙星片劑(商品名“環福星”，250mg/片；含量95.9%；批號940701，由上海信誼藥廠生產)；鹽酸環丙沙星標準品由上海三維制藥公司提供；內標二氟哌酸(標準品，由中國醫學生物技術研究所提供)；乙腈為色譜純；磷酸、磷酸二氫鉀、溴化四丁基銨、三氯乙酸均為分析純。1.3儀器和色譜條件高效液相色譜儀(美國惠普公司HPLC1

5、050系統，包括泵、紫外檢測器、數據采集與數據處理工作站-HP486/50計算機與3365ChemStation色譜工作站軟件)；色譜柱(HP-RP-ODSC18柱，4.6×220mm)；3P87軟件運行于PC286計算機。色譜條件：流動相為乙腈(溴化四丁基銨0.008mol.L-1+磷酸二氫鉀水溶液0.011mol.L-1)=1486。配好后磷酸調pH至2.74±0.02，0.45m濾膜抽濾，超聲脫氣。流速1.2ml.min-1，檢測波長277nm，靈敏度0.025AUFS。柱溫25，取樣速率10次.SEC-1。本法鹽酸環丙沙星與二氟哌酸的保留時間分別是5.31min和7

6、.51min，有效理論塔板數(Neff=1.2×104，R=8.28)，血清最低檢出濃度0.01g.ml-1。1.4生物標本測定方法取血清0.5ml，加入內標二氟哌酸20l(0.816g)，旋渦振蕩5min；加入0.5ml甲醇，再旋渦振蕩5min；4000r.min-1離心15min，取上清液，真空揮干溶劑，流動相50l溶解，以0.22m微孔濾膜過濾后進樣20l。1.5鹽酸環丙沙星標準曲線精稱鹽酸環丙沙星(標準品)用流動相溶解定容，并配成7.263g.ml-1的儲備液，再分別稀釋成7.263，2.905，0.726，0.175，0.058g.ml-1的溶液，按生物樣本的處理方法至加入

7、0.5ml血清起依法測定之。以As(樣品峰面積)/Ai(內標峰面積)對濃度C回歸，得回歸方程：Y=0.492X+2.186×10-3，r=0.9919。回收率為96.38±3.31%；日內、日間RSD分別為4.05%和5.02%。1.6試驗方法10名受試者實驗前15d未服過任何藥物，受試前12h內禁食，當日早晨空腹，隨機分成2組：5人分別口服供試品片劑各500mg，另5人分別口服對照品各500mg。給藥后3h按統一食譜進餐，試驗期間飲水自便。受試者接受交叉給藥供試品和對照品各一次，間隔7d。服藥后分別于0，0.5，1.0，1.5，2.0，3.0，4.0，6.0，9.0，12

8、.0，24.0h抽取靜脈血，室溫(約15)放置1h，3000r.min-1離心15min，分離出血清，-20冰箱保存備測。1.7研究數據處理根據藥時曲線，用3P87軟件在計算機上進行了處理，經F檢驗，擬合優度，結合AIC進行判斷，用具有滯后時間的口服吸收二室開放模型自動擬合，求算藥動學參數。統計采用配對t檢驗。2結果2.1單劑量口服鹽酸環丙沙星片劑500mg后，10名志愿者各時間點平均血清中鹽酸環丙沙星濃度見表1。表1口服500mg鹽酸環丙沙星片后平均血藥濃度(±s，n=10)時間(h)供試品組血藥濃度(g.ml-1)±s對照品組血藥濃度(g.ml-1)±s0.5

9、2.742±0.3652.444±0.2861.05.818±0.7655.158±0.5561.57.121±0.6497.102±0.4332.05.341±0.3974.503±0.3143.03.346±0.3983.475±0.1574.01.785±0.3121.884±0.1996.00.653±0.0600.670±0.0119.00.180±0.0180.225±0.05312.00.109±0.0130.1

10、19±0.03424.00.016±0.0030.015±0.0052.2鹽酸環丙沙星片劑藥動學特性及供試品相對生物利用度見表2。2.2.1口服供試品片劑及對照品片劑后，吸收迅速，吸收半衰期分別為0.9±0.1h與1.0±0.1h；吸收滯后時間分別為0.33±0.01h和0.33±0.02h;Tmax分別為1.3±0.1h與1.3±0.1h，Cmax分別為6.4±0.6g.ml-1與5.9±0.4g.ml-1；表觀分布容積分別為38.4±5.0L與42.7±3.1L

11、；消除半衰期分別為4.7±0.5h和4.4±0.5h；藥物血漿清除率分別為25.7±2.2L.h-1與26.1±1.5L.h-1。以上參數均經配對t檢驗，P0.05，兩者之間差異均無顯著性，并與文獻報道3，4相一致。 表2口服鹽酸環丙沙星片后平均藥動學參數(±s，n=10)藥動學參數供試品片±s對照品片±sKa(h-1)0.5±0.10.5±0.1LagTime(h)0.33±0.010.33±0.02K10(h-1)0.7±0.10.6±0.1K12(h-1)0.

12、08±0.020.09±0.03K21(h-1)0.17±0.020.19±0.03T1/2(h)0.9±0.11.0±0.1T1/2(h)4.7±0.54.4±0.5Tmax(h)1.3±0.11.3±0.1Cmax(mg.ml-1)6.4±0.65.9±0.4V/F(L)38.4±5.042.7±3.1AUC(g.h-1.ml-1)19.9±1.819.2±1.1Cl/F(L.h-1)25.7±2.226.1±1

13、.5F(%)103.3±4.8%(99.6±4.6%，校正后)2.2.2生物利用度供試品與對照品的AUC(024h)分別為19.9±1.8g.h-1.ml-1與19.2±1.1g.h-1.ml-1，口服供試品片劑與對照品片劑的相對生物利用度為103.3±4.8%(經含量校正后為99.6±4.6%)。 3討論鹽酸環丙沙星的血藥濃度HPLC測定通常用熒光檢測器檢測，結果基線易漂移，理論塔板數也不高。本實驗建立了靈敏度較高且穩定性好的紫外檢測方法，該法回收率高，日內、日間變異系數小，理論塔板數也較高，適用于鹽酸環丙沙星的藥動學過程檢測要求。

14、10例健康志愿者交叉口服鹽酸環丙沙星供試品或對照品片劑后的藥-時曲線符合二房室開放式模型，實測血清藥物濃度-時間曲線與理論曲線基本重合。從藥-時曲線看，其血藥濃度較高，對全身組織細菌感染能起良好的治療作用。供試品和對照品片劑在體內吸收迅速，盡管有一個很短的吸收遲滯時間，但達峰時間仍很短，所有藥動學參數經配對t檢驗差異均無顯著性，說明兩者體內過程相似，人體生物利用度等效。作者單位：周秦秦傅穎君況榮華戴群熊玉卿江西醫學院衛生部臨床藥理基地南昌330006參考文獻1Campoli-Richards DM, Mond JP,Price A,Benfield P.Ciprofloxacin a revie w of its antibacterial activity pharmacokinetic properties and therapeutic use. Drugs,1988,35:3732張萬革.環丙氟哌酸的作用特點及臨床評價.中國藥學雜志，1992，27：2973Tom Bergan.Pharmacokinetics of ciprofloxacin intrarenous and increasin g oral doses. The