1、284中草藥ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月RP-HPLC法測定吳茱萸中金絲桃苷和異鼠李素-3-O-半乳糖苷的含量潘浪勝,呂秀陽,許海丹,吳平東(浙江大學材料與化工學院制藥工程研究所,浙江杭州310027)吳茱萸為蕓香科植物吳茱萸Evodiarutae2.)Benth.的干燥將近成熟果實。屬溫里carpa(Juss祛寒類中藥。有溫中散寒、疏肝止痛之功效,常用于治療脘腹冷痛、嘔吐腹瀉、頭痛、胃痛、疝痛、腹痛和痛經等1。本草綱目稱吳茱萸“開郁化滯,治吞酸厥陰、痰涎頭痛、陰毒腹痛、”、3和異鼠李素2。現代藥醇分別配成含金絲桃苷01096m異

2、鼠李素2mL、32O2半乳糖苷01298mgmL。213:40目篩的吳51,加200,減壓濃縮至干,加水溶解,過理研究認為,、解痙等作用4,與吳茱萸的鎮痛藥理作用一致。本研究采用RP2HPLC法建立了吳茱萸中金絲桃苷和異鼠李素232O2半乳糖苷含量的同時測定方法,對更好地開發吳,、10%乙醇、30%乙醇、50%乙、70%乙醇、95%乙醇洗脫,洗脫劑的更換根據洗脫液的顏色,當顏色變為較淡時更換為下一種溶劑。分瓶收集,收集液進行HPLC檢測,合并含金絲桃苷和異鼠李素232O2半乳糖苷組分,減壓濃縮后用甲醇定容至50mL,搖勻,過0145m濾膜,即得。其色譜圖見圖1。茱萸藥用植物資源具有一定意義。1

3、儀器與試藥Agilent1100型高效液相色譜儀(配四元梯度泵、在線脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、UV檢測器),R201旋轉蒸發器(上海申生科技有限公司),柱色譜聚酰胺(100200目,浙江省臺州市路橋四青生化材料廠)。實驗所用吳茱萸藥材產于湖南瀏陽,由中國中醫研究院中藥研究所何希榮主管中藥師鑒定。HPLC分析用甲醇為色譜純(德國Merck公司),水為超純水,其他試劑均為分析純。金絲桃苷和異鼠李素232O2半乳糖苷對照品由本研究所自制,用高效液相色譜面積歸一法測定其純度分別為9916%和9810%。2方法與結果211色譜條件:色譜柱為DiamonsilC18柱(250mm416mm,5m);流動

4、相為甲醇2015%磷酸(5050);體積流量為110mLmin;檢測波長為360nm;柱溫為30;進樣量為10L。212對照品溶液的制備:精密稱取干燥至恒重的金12金絲桃苷22異鼠李素232O2半乳糖苷12hyperin22isorhamnetin232O2galactoside圖1對照品(A,B)及樣品(C)的HPLC色譜圖Fig.1HPLCchromatogramsofreferencesubstances(A,B)andsample(C)214標準曲線及線性范圍:將配制的兩種對照品溶液分別依次進樣2、5、10、15、20L,按上述色譜條件進行分析,以進樣量(g)為橫坐標(X),以峰面積為

5、縱坐標(Y)線性回歸,金絲桃苷和異鼠李素232O2半乳糖苷的回歸方程分別為:Y=2203.21X-0.56,r=0.9999;Y=1613.41X-17.32,r=0.9999。表明當金絲桃苷、異鼠李素232O2半乳糖苷絲桃苷和異鼠李素232O2半乳糖苷對照品適量,加甲的進樣量分別在011921192g,015965196g與峰面積線形關系良好。215精密度試驗:精密吸取兩種對照品溶液各10L,在上述選定的色譜條件下,連續進樣6次,測定,計算得金絲桃苷和異鼠李素232O2半乳糖苷峰面積的RSD分別為1142%和1161%(n=6)。收稿日期:2004204212基金項目:國家重點基礎研究發展規

6、劃(973)資助項目(G1999055405);高等學校博士學科點專項科研基金資助項目(20010335029)作者簡介:潘浪勝(1972),男,江西豐城人,浙江大學博士生,研究方向為天然藥物的提取、分離、結構鑒定和含量測定。3通訊作者Tel:(0571)87952683E2mail:luxiuyang 1994-2006 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. 中草藥ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第2期2005年2月285216穩定性試驗:精密吸

7、取兩種對照品溶液,每隔2h進樣10L,連續測定12h,結果表明在12h內3討論311供試品溶液制備方法的選擇:吳茱萸中金絲桃峰面積值基本穩定。金絲桃苷和異鼠李素232O2半乳糖苷峰面積的RSD分別為1175%和1183%。217重現性試驗:精密稱取同一批吳茱萸樣品3份,按上述供試品溶液的制備方法和測定條件,測定峰面積,計算得金絲桃苷和異鼠李素232O2半乳糖苷峰面積的RSD分別為2121%和1163%。218回收率試驗:精密稱取已知含量的吳茱萸樣品3份,分別加入金絲桃苷和異鼠李素232O2半乳糖苷對照品溶液各20mL,按上述供試品溶液的制備方法和測定條件,計算回收率。率為9617%,RSD=2

8、104%(n=)2半乳糖苷平均,1.(n=3)。219:苷、異鼠李素232O2半乳糖苷含量較低,溶劑提取金絲桃苷的同時,也提取出大量的其他成分,無法直接進樣進行色譜測定,必須對提取物進行凈化處理。經試驗,確定用聚酰胺柱色譜進行凈化,收集洗脫部分,進行高效液相色譜測定。在該凈化條件下,去除大量雜質,金絲桃苷和異鼠李素2半乳糖苷洗脫完全,。312:水、乙腈2水、22水2,結05%磷酸(5050)水溶液的效果最,可抑制黃酮苷酚羥基的電離,改善分離效果,防止拖尾,使峰形尖銳、對稱。313檢測波長的選擇:金絲桃苷、異鼠李素232O2半乳糖苷對照品經紫外掃描,在360nm處均有較大吸收,因此將檢測波長確定

9、為360nm。References:1EditorialOfficeofNationalChineseHerbalMedicineCollec2tion1CollectionofNationalChineseHerbalMedicine(全國中草藥匯編)M1Beijing:PeoplesMedicalPublishingHouse,197512YinJ,LuXZ,DingLX1ModernResearchandClinicalApplicationofChineseMateriaMedica(中藥現代研究與臨床應用)M1Beijing:XuyuanPress,199313PanLS,LuXY,

10、WuPD1IsolationandidentificationoftwoflavonoidsfromEvodiarutaecarpaJuss.BenthJ1ChinTraditHerbDrugs(中草藥),2004,35(3):1922014ZhouZD,TianJ,YangSY,etal.AntispasmodicactionofhyperinJ1AnhuiMedJ(安徽醫學),1990,11(1):382391測定條件,測定了3批樣品中金絲桃苷和異鼠李素232O2半乳糖苷,結果見表1。表1吳茱萸中金絲桃苷和異鼠李素-3-O-半乳糖苷的測定(n=3)Table1Determinationof

11、hyperinandisorhamnetin-3-O-galactosideinE.rutaecarpa(n=3)批號12金絲桃苷(mgg-1)RSD%質量分數016820163611531174異鼠李素232O2半乳糖苷(mgg-1)RSD%質量分數216352138711681196新書簡介中藥成分代謝分析(20022010)相繼出臺的歷史背景下,本書是在我國中藥現代化發展戰略和中藥現代化發展戰略在研究分析了中藥復雜體系重大學科問題和目前中藥現代化與時俱進過程中關鍵科學問題的基礎上,作者系統總結了本研究組的科研成果和國內外相關領域的最新發展動態編寫而成。全書主要包括兩個部分:總論部分概要介紹了研究中藥成分結構生物轉化和或代謝的意義,中藥成分結構生物轉化和或代謝的生物學基礎、研究模型和分析方法;各論部分主要介紹了某些中藥代表性成分結構的生物轉化和或代謝及性質,包括來源、化學名、異名、英文名、結構式、分子式及相對分子質量、腸內菌轉化、體內代謝、化學結構數據、生物活性、定性定量分析及體內分布和藥代動力學。作者