1、丹參對內毒素致急性肺損傷大鼠肺水通道蛋白-1的調節效應         11-05-16 16:13:00     編輯：studa20                 作者：李敏,李鋒,胡波,王超鋒 【摘要】  目的 探討丹參對內毒素(LPS)致急性肺損傷(ALI)大鼠肺水通道蛋白-1(AQP-1)的調節作用。方法

2、SD大鼠48只,隨機分為正常組、丹參注射液預保護組、丹參注射液7 d治療組、ALI 7 d模型組、丹參注射液8 h治療組、ALI 8 h模型組,每組各8只。分別于7 d和8 h后電鏡及HE染色觀察各組大鼠肺組織病理改變、肺濕/干重比(W/D)及肺臟水通透性的變化,免疫組化法及肺組織勻漿后Western blotting法檢測AQP-1表達變化；測定血液氧分壓PaO2、血液流變學、內皮素-1(ET-1)濃度。結果 模型組均出現肺損傷癥狀。丹參注射液7 d治療組的肺水腫病理改變與ALI 7 d模型組比較明顯減輕,血液流變學指標明顯改善,但兩組AQP-1表達均與正常組無明顯差異(P<0.05)

3、。丹參注射液8 h治療組和丹參注射液預保護組與ALI 8 h模型組比較,肺水腫病理改變明顯減輕,血液流變學指標明顯改善(P<0.05),其中丹參注射液預保護組AQP-1表達上調明顯(P<0.01)。結論 丹參可能通過調節AQP-1的表達改善水液代謝,改善ALI大鼠的血液流變學,從而減輕肺水腫狀態,提示丹參新的藥理效應依據。 【關鍵詞】  丹參；急性肺損傷；脂多糖；水通道蛋白；血液流變學    Abstract：Objective To investigate the effect of SM on aquaporin-1 (AQP-1) ex

4、pression in rats with acute lung injury (ALI) induced by lipopolysaccharide (LPS). Method 48 SD rats were randomly divided into normal group, ALI 7-day group, ALI 8-hour group, SM prevention group, SM 7-day treatment group, and SM 8-hour treatment group, 8 rats per group. At 8 hours and 7 days after

5、 treatment, lung wet to dry weight ratio, lung pathology, electron microscope, AQP-1 immunohistochemistry, and AQP-1 Western blotting were performed. The situation of hemorheology and serum level of PaO2 and Endothelin-1(ET-1) were also detected. Results The model group rats all appeared ALI symptom

6、. Compared with the 7-day ALI group, the degree of lung edema statement alleviated in SM 7-day treatment group. But the expression difference of AQP-1 was not significant between the two groups (P<0.05). Compared with the 8-hour ALI group, the degree of lung edema statement alleviated in SM 8-hou

7、r treatment group and SM prevention group .The expression of AQP-1 was significantly increased in the group of SM prevention group (P<0.01). Conclusions SM may improve the body fluid metabolism and the situation of hemorheology, and alleviate the degree of the lung edema by regulating the express

8、ion of AQP-1. It suggests a new pharmacological effect of SM.         Key words：Salvia miltiorrhiza；acute lung injury；lipopolysaccharide；aquaporin-1；hemorheology 如何早期有效干預急性肺損傷(Acute Lung Injury,ALI)并阻止其發展為急性呼吸窘迫綜合征(ARDS),是當今研究的一大熱點。丹參(Salvia miltiorrhiza,SM)是常

9、見的活血化瘀中藥,具有抗炎、抗氧化、清除氧自由基、抗粘附、抗血栓以及免疫調節作用,以往研究表明其對ALI具有保護作用1。肺的水液代謝與水通道蛋白密切相關,但丹參對AQPs的調節作用未見報道。我們采用內毒素誘發ALI大鼠模型,觀察主要為丹參水溶性成分的丹參注射液對肺水通道蛋白-1(AQP-1)表達及其病理改變的影響,從而完善了丹參活血化瘀的機制,為丹參新的藥理效應提供依據。1  材料與方法1.1  動物、藥物及主要試劑    SD大鼠48只,體重180220 g,雌雄各半,第四軍醫大學實驗動物中心提供；LPS(E.coliO55：B5 L2880

10、,Sigma公司)；丹參注射液(四川升和制藥有限公司,國藥準字Z51021303)；內皮素-1(ET-1)放射免疫分析測定試劑盒(北京東雅生物技術研究所)；AQP-1兔抗鼠多克隆抗體(AB3272,美國Chemicon)。1.2  內毒素大鼠ALI模型的制備及分組    隨機將48只雌雄各半SD大鼠分為正常組(A組)、ALI 7 d模型組(D組)、ALI 8 h模型組(F組)、丹參注射液預保護組(B組)、丹參注射液7 d治療組(C組)、丹參注射液8 h治療組(E組),每組動物各8只。全部動物以速眠新注射液(0.8 mL/kg)肌肉注射麻醉,仰臥50

11、76;固定,BF組氣管內滴注LPS(150 g/kg,0.5 mL/kg),然后直立并旋轉大鼠,使藥物在肺內均勻分布。A組以等量生理鹽水代替。B組每日預先給予腹腔注射丹參注射液(1.5 mL/kg),B、C、E組分別于LPS滴注0.5 h后給予腹腔注射丹參注射液。D、F組同時同法給予等量生理鹽水。1.3  觀察項目及方法    A、B、E、F組大鼠分別在給予生理鹽水或LPS后8 h,速眠新注射液肌注麻醉,腹主動脈取血8 mL。1 mL行血氣分析；2 mL加入3%的EDTA-Na20.1 mL抗凝,離心(3 500 r/min,10 min)取上清液,-7

12、0 冰箱保存待測ET-1；5 mL加入肝素鋰抗凝管中,于4 h內檢測血液流變學。斷頭處死動物,開胸分離肺組織。取右肺上葉2.5%戊二醛固定,作透射電鏡觀察；結扎右肺中、下葉,肺內注射少量10%甲醛固定,作病理學觀察及免疫組化染色(10%甲醛固定,石蠟包埋切片,蘇木精-伊紅染色,光鏡下觀察),免疫組化結果以單個視野下每平方毫米陽性微血管數表示；取左肺下葉勻漿,用Western Blotting測AQP-1蛋白表達,應用Kodak Digital Science 1D圖像分析軟件對特異性條帶進行灰度掃描,以吸光光度值(A值)代表特異性條帶的信號強弱,以此來對目的蛋白表達水平進行半定量比較。各條帶隨

13、機取3次,以-actin為內參照,凈密度值=(平均密度背景密度)×面積。左肺上葉稱重后,置烤箱(60 ,5 d)烤至衡重,稱干重,計算肺濕/干重比值(W/D)。1.4  統計學方法    所有計量資料均用x±s表示,應用SPSS10.0統計軟件進行單因素方差分析,多個樣本均數間兩兩比較采用SNK-q檢驗,以P<0.05為有差異顯著性,P<0.01為差異有非常顯著性。2  結果2.1  動物觀察    D、F組大鼠毛發豎直、蜷作一團、呼吸急促、爪趾青紫。丹參治療組上述癥狀明顯

14、改善,以C組明顯。C組和D組分別于第3、6天死亡1只。2.2  肺組織病理學變化     肺大體觀察,正常對照組肺體積適中,顏色淡紅,無充血現象；ALI模型組肺體積增大,肺緣鈍圓,切面質實,包膜下有點、片狀出血,以F組為重；丹參治療、干預組較ALI模型組上述病變明顯減輕。光鏡下觀察,正常組肺組織肺泡無萎陷,肺泡和肺間質無炎細胞浸潤,肺泡壁無增厚,無毛細血管擴張、充血及白細胞附壁現象；ALI模型組見肺泡腔擴張,肺泡壁斷裂,肺泡隔明顯增寬,毛細血管擴張瘀血,腔內充滿紅細胞,有較多中性粒細胞浸潤；丹參治療、干預組肺組織上述改變明顯減輕。電鏡下可見,F組大鼠肺組織內部分肺泡壁毛細血管及肺泡上皮基板疏松、增寬；內皮細胞腫脹、變性,內皮細胞間緊密連接出現裂隙；毛細血管腔增寬