1、CXCR7在口腔鱗癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系作者 作者單位 王永霞 海南醫(yī)學(xué)院熱帶醫(yī)學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)院 陳鐘 廈門口腔醫(yī)院口腔頜面外 裴華 海南醫(yī)學(xué)院熱帶醫(yī)學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)院 饒朗毓海南醫(yī)學(xué)院熱帶醫(yī)學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)院 ABSTRACT Objective： To explore the expression of CXCR7 in oral squamous cell carcinoma (OSCC) and to evaluate the expression of CXCR7 and the clinicopathology factors of OSCC. Methods： CXCR7 prote

2、in expression and its relation to clinico-pathological features of OSCC were examined in 20 normal oral tissues and 48 OSCC by immunohistochemical SP methods. Results： The overexpression rate of CXCR7 in OSCC was 81.2%(39/48)，which was significant higher than that of the control group 25%(5/20) (P&l

3、t;0.005); The overexpression of CXCR7 among the lower differentiated tissues were significant higher than the middle/ higher differentiated tissues of OSCC (P<0.05) ， and the findings were similar among the groups of the 、 clinical stages than 、 clinical stages， and lymph node involvement than th

4、e non- lymph node involvement of OSCC(P<0.05). Conclusion： The overexpression of CXCR7 might be play an important role in the pathogenesis and development of OSCC， and it might be a target for the therapy and prognostic indicator of OSCC. KEY WORDS CXCR7; Oral squamous cell carcinoma; Immunohisto

5、chemical; Overexpression; 口腔鱗癌(oral squamous cell carcinoma，OSCC)是口腔頜面部最常見的惡性腫瘤，極易向頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，侵襲力較強(qiáng)。趨化因子受體屬于G蛋白耦聯(lián)跨膜受體，通過與其配體結(jié)合發(fā)揮多種生物學(xué)功能，如促進(jìn)細(xì)胞生長、發(fā)育、分化、凋亡等1 。近年來研究表明，趨化因子及其配體網(wǎng)絡(luò)對(duì)腫瘤細(xì)胞的發(fā)生和轉(zhuǎn)移起重要作用。CXCR7是新近發(fā)現(xiàn)的一種趨化因子受體，配體為CXCL12。研究證明CXCR7在乳腺癌、肺癌、肝癌、宮頸癌等常見惡性腫瘤中高表達(dá)，且與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。但關(guān)于CXCR7在口腔鱗癌中的表達(dá)及其與頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系尚未

6、見報(bào)道。本研究采用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)CXCR7在口腔鱗癌中的表達(dá)及與頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，探討其在口腔鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。 1材料與方法 1.1標(biāo)本來源 48例口腔鱗癌(OSCC)組織標(biāo)本來自20042010年廈門口腔醫(yī)院口腔頜面外科手術(shù)切除的標(biāo)本，術(shù)后均經(jīng)病理診斷證實(shí)為高、中、低分化口腔鱗癌，男性29例，女性19例;年齡3074歲，平均49.3歲;有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者31例，無頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者17例;腫瘤直徑：3cm 21例，>3 cm 27例;病理分級(jí)：中、高分化16例，低分化32例;TNM分期：、 期 19例，、期29例。 所有病例術(shù)前未接受放療、化療。另取20例外傷或門診拔

7、牙患者的正常口腔黏膜作為正常對(duì)照。所有標(biāo)本均經(jīng)4%多聚甲醛液固定，常規(guī)石蠟包埋，制成4 m厚連續(xù)切片。 1.2 主要試劑 兔抗人CXCR7多克隆抗體購至美國Abcam公司;免疫組化超敏SP染色試劑盒、DAB顯色試劑盒均購至武漢博士德生物科技公司。 1.3實(shí)驗(yàn)方法 石蠟切片經(jīng)二甲苯、梯度酒精脫蠟至水，以檸檬酸鹽緩沖液高溫高壓修復(fù)抗原，自然冷卻至室溫，H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，正常非免疫兔血清封閉20 min。隨后滴加一抗，37孵育1 h，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，已知的陽性O(shè)SCC標(biāo)本作為陽性對(duì)照;PBS漂洗3次，滴加生物素標(biāo)記的二抗，37孵育30 min，PBS漂洗3次;滴加鏈霉親和素

8、-過氧化物酶溶液，37孵育15 min，PBS漂洗3次;DAB顯色，蒸餾水漂洗;蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片。 1.4免疫組化結(jié)果判斷 CXCR7陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞漿和細(xì)胞膜，少數(shù)定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒。采用雙盲法統(tǒng)計(jì)結(jié)果，隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野(×400)計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)陽性細(xì)胞所占的百分比，根據(jù)陽性細(xì)胞百分比將染色結(jié)果分為4個(gè)等級(jí)：陽性細(xì)胞5%為 (-);6%25%為(+);26%50%為(+); >50%為(+)，(-)及(+)歸為不表達(dá)組或低表達(dá)組，(+)及(+)歸為高表達(dá)組。 1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料比較采用2檢驗(yàn)，P&l

9、t;0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2 結(jié)果 2.1 MAT1蛋白在口腔鱗癌及正常口腔黏膜組織中的表達(dá)情況 CXCR7主要表達(dá)于口腔鱗癌組織，棕黃色顆粒主要局限于細(xì)胞漿和細(xì)胞膜，少數(shù)定位于細(xì)胞核。CXCR7在口腔鱗癌組織中高表達(dá)(圖1)，在正常口腔黏膜組織中不表達(dá)或僅有微弱表達(dá)(圖2),2種組織中CXCR7的高表達(dá)率分別為81.2%(39/48)和25.0%(5/20)。在這些標(biāo)本中，31例發(fā)生頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中有28例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中CXCR7高表達(dá)，高表達(dá)率為90.3%。口腔鱗癌組織中CXCR7高表達(dá)率與正常口腔黏膜相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。圖1 CXCR7在口腔

10、鱗癌圖2 CXCR7在正常口腔組織中的表達(dá)(×400)黏膜組織中的表達(dá)(×400) 2.2MTA1蛋白表達(dá)與口腔鱗癌臨床病理特征的關(guān)系 腫瘤直徑>3 cm組CXCR7高表達(dá)率稍高于3cm組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);低分化組CXCR7高表達(dá)率顯著高于中、高分化組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);、期與、期相比，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組與無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組相比CXCR7高表達(dá)率均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表2)。表1CXCR7在口腔鱗癌及正常口腔黏膜組織中的表達(dá) 表2 CXCR7表達(dá)與OSCC臨床病理特征的關(guān)系 3討論 CXCR7是一個(gè)

11、新發(fā)現(xiàn)的基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1(stroma-cell drived factor 1，SDF-1)受體，能與SDF-1(CXCL12)結(jié)合發(fā)揮生物學(xué)作用。CXCR7主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞系、激活的內(nèi)皮細(xì)胞及胎肝細(xì)胞等，而正常細(xì)胞很少表達(dá)。研究證實(shí) CXCR7能促進(jìn)腫瘤生長、血管生成及細(xì)胞間黏附，參與了腫瘤的發(fā)生、侵襲與轉(zhuǎn)移2,3。Iwakiri等4通過對(duì)期非小細(xì)胞肺癌患者的臨床研究中發(fā)現(xiàn)，高表達(dá)CXCR7的患者術(shù)后遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率顯著高于低表達(dá)CXCR7的患者(P=0.007)，并且高表達(dá)CXCR7組5年無瘤生存率顯著低于低表達(dá)組(P=0.033)。目前研究顯示， CXCR7與乳腺癌、 肺癌、 前列腺癌

12、、肝癌、 胰腺癌等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)5-7。但CXCR7在腫瘤中的作用機(jī)制還不是很清楚，Wang 等5 研究 CXCR7 在前列腺癌中的作用時(shí)發(fā)現(xiàn)，CXCR7可能通過激活A(yù)KT信號(hào)通路和調(diào)節(jié)前血管形成因子白細(xì)胞介素-8( IL-8) 或血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá)調(diào)控腫瘤的發(fā)生、發(fā)展;并認(rèn)為CXCR7還可調(diào)節(jié)細(xì)胞間黏附分子(FN1、CDH11和CD44)及基質(zhì)金屬蛋白酶如MMP3、MMP10等的水平，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移。Barbero 等8發(fā)現(xiàn)CXCR7還能通過活化ERK1 /2信號(hào)通路誘導(dǎo)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖。這些研究均表明CXCR7能通過多種途徑增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲性及轉(zhuǎn)移

13、性。 目前， 關(guān)于口腔鱗癌中 CXCR7 的生物學(xué)功能報(bào)道較少，本研究采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)了48例口腔鱗癌組織和20例正常口腔黏膜標(biāo)本中CXCR7的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)CXCR7在口腔鱗癌組織中高表達(dá)，與正常口腔黏膜相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);通過對(duì)口腔鱗癌組織臨床病理特征與CXCR7表達(dá)的相關(guān)性研究發(fā)現(xiàn)，CXCR7高表達(dá)與癌組織分化程度、TNM分期及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，而與腫瘤的大小無明顯關(guān)系，CXCR7高表達(dá)于口腔鱗癌組織中的低分化組、臨床分期、期組及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，與中/高分化組、臨床分期、期組及無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說明CXCR7的

14、表達(dá)參與了口腔鱗癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移，這為進(jìn)一步闡明口腔鱗癌發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制提供了參考依據(jù)，對(duì)判斷腫瘤的生物學(xué)行為和預(yù)后有重要意義，還可為臨床醫(yī)生選擇最佳治療方案提供參考;同時(shí)，研究如何抑制CXCR7的表達(dá)及抑制其表達(dá)產(chǎn)物的生物學(xué)活性有可能成為將來治療腫瘤的新方法。但CXCR7是通過何種信號(hào)通路影響口腔鱗癌細(xì)胞的生物學(xué)特性以及與其他趨化因子網(wǎng)絡(luò)的關(guān)系如何，具體機(jī)制仍不清楚，尚需進(jìn)一步闡明。 【參考文獻(xiàn)】 1鄭芳. SDF 1/CXCR7 軸與腫瘤的研究進(jìn)展J. 腫瘤學(xué)雜志，2010,16(9)：740-743. 2Burns JM， Summers BC， Wang Y， et a l

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