1、編寫教師：阮源萍編寫教師：阮源萍 教教 授授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月編寫教師：阮源萍編寫教師：阮源萍 教教 授授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月實驗目的實驗目的 了解了解HPLC儀器根本構造儀器根本構造,掌握實驗儀器的普通運掌握實驗儀器的普通運用方法；用方法； 加深對色譜分別原理的了解，掌握主要實驗條件加深對色譜分別原理的了解，掌握主要實驗條件的選擇；的選擇； 掌握液相色譜定性定量分析技術。掌握液相色譜定性定量分析技術。實驗內容實驗內容反相高效液相色譜法分別測定烷基苯系反相高效液相色譜法分別測定烷基苯系物物 編寫教師：阮源萍編寫教師：阮源萍 教教 授授編寫日期：編寫日期：2

2、006年年9月月實驗講解要點實驗講解要點 一、色譜分別原理一、色譜分別原理 二、色譜分析技術二、色譜分析技術 三、三、 HPLC儀器和運用方法儀器和運用方法 四、四、 HPLC和和GC的比較的比較 五、五、 RP-HPLC測定烷基苯化合物原測定烷基苯化合物原理理 編寫教師：阮源萍編寫教師：阮源萍 教教 授授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月一、色譜分別原理一、色譜分別原理色譜法是一類高效分別方法。色譜法是一類高效分別方法。 色譜分別原理是什么？色譜分別原理是什么？ HPLC和和GC儀器的分別部件是什么？儀器的分別部件是什么？它們有什么不同？它們有什么不同？ HPLC和和GC的主要差別？的主

3、要差別？編寫教師：阮源萍編寫教師：阮源萍 教教 授授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月二、色譜分析技術二、色譜分析技術 色譜分析是一類重要的儀器分析方法，其色譜分析是一類重要的儀器分析方法，其特點是分別才干強、定量準確，適宜于復雜特點是分別才干強、定量準確，適宜于復雜樣品或多組分樣品分析。樣品或多組分樣品分析。 常見的色譜定性方法？常見的色譜定性方法？ 色譜定量分析的根據？色譜定量分析的根據？ 氣相色譜實驗采用那種定量分析方法？有何氣相色譜實驗采用那種定量分析方法？有何特點？特點？ HPLCHPLC和和GCGC的運用特點的運用特點 編寫教師：阮源萍編寫教師：阮源萍 教教 授授編寫日期：編寫

4、日期：2006年年9月月三、三、 HPLC儀器和實驗技術儀器和實驗技術 HPLC HPLC儀器的根本組分？儀器的根本組分？ 主要部件的任務原理？主要部件的任務原理？ HPLCHPLC和和GCGC儀器的比較儀器的比較 HPLCHPLC和和GCGC實驗技術的比較實驗技術的比較 有人以為色譜分析實驗很簡單，就是打一有人以為色譜分析實驗很簡單，就是打一針樣品而已，他是怎樣以為的？他能否給病針樣品而已，他是怎樣以為的？他能否給病人打過針？為什么沒有？人打過針？為什么沒有？編寫教師：阮源萍編寫教師：阮源萍 教教 授授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月四、高效液相色譜儀的根本組成四、高效液相色譜儀的根本

5、組成分幾個系統？分幾個系統？和和GCGC有何不同？有何不同？高壓泵任務原理？高壓泵任務原理？GCGC是如何進樣的？是如何進樣的？記錄系統和記錄系統和GCGC一樣一樣嗎？嗎？編寫教師：阮源萍編寫教師：阮源萍 教教 授授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月高壓泵任務原理單向閥高壓泵任務原理單向閥 高壓液體有危險嗎？高壓液體有危險嗎？ 高壓泵如何改動流速？高壓泵如何改動流速？編寫教師：阮源萍編寫教師：阮源萍 教教 授授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月高壓泵任務原理單向閥高壓泵任務原理單向閥 HPLC HPLC進樣針與進樣針與GCGC有何不同？有何不同？ 為什么為什么HPLCHPLC與與GCG

6、C進樣要求不同？進樣要求不同？六通閥任務原理流路切換六通閥任務原理流路切換編寫教師：阮源萍編寫教師：阮源萍 教教 授授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月五、五、 RP-HPLC測定烷基苯化合物原理測定烷基苯化合物原理 什么是正相色譜？什么是反相色譜？什么是正相色譜？什么是反相色譜？ 什么是鍵合固定相？什么是鍵合固定相？ 預測一下苯和甲苯在預測一下苯和甲苯在C18C18反相柱上的保管反相柱上的保管順序？順序？ 什么是反相色譜疏水機理？什么是反相色譜疏水機理？ 本實驗的主要色譜分析條件有那些？本實驗的主要色譜分析條件有那些？ 流動相組成對保管時間有何影響？舉例闡流動相組成對保管時間有何影響？舉

7、例闡明？明？ 改動檢測波長對色譜圖有何影響？改動檢測波長對色譜圖有何影響？編寫教師：阮源萍編寫教師：阮源萍 教教 授授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月HPLC的溶劑選擇的溶劑選擇 本實驗采用什么流動相？本實驗采用什么流動相？ 什么是什么是HPLCHPLC級甲醇、乙腈溶劑？級甲醇、乙腈溶劑？ 如何獲得超純水？如何獲得超純水？ 本實驗所用的流動相如何配制？本實驗所用的流動相如何配制？ 流動相為什么要除氣？如何除氣？流動相為什么要除氣？如何除氣？編寫教師：阮源萍編寫教師：阮源萍 教教 授授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月六、實驗部分六、實驗部分 一、溶液配制一、溶液配制1 1 配制規范系

8、列溶液配制規范系列溶液 三組分混標液：每三組分混標液：每mLmL溶液分別含溶液分別含1.00mg1.00mg苯、苯、甲苯和乙苯。甲苯和乙苯。 分別準確移取分別準確移取0.400.40、0.800.80、1.201.20、1.601.60和和2.00mL2.00mL三組分混標液于三組分混標液于10mL10mL容量瓶中，用流容量瓶中，用流動相溶劑定容。動相溶劑定容。2 2 流動相的配制、過濾和除氣。流動相的配制、過濾和除氣。 五組分混標液：含適量苯、甲苯、乙苯、丙五組分混標液：含適量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁苯。苯和丁苯。 規范苯測試液。規范苯測試液。 未知樣品未知樣品1 1號、號、2 2號和號和3

9、 3號。號。 編寫教師：阮源萍編寫教師：阮源萍 教教 授授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月二、色譜實驗條件二、色譜實驗條件 A A組：組：Waters HPLCWaters HPLC儀儀色譜柱：色譜柱：Nova Pak C18 (3.9Nova Pak C18 (3.9150mm, 4m)150mm, 4m)流動相：流動相：CH3OH-H2O (70/30, v/v)CH3OH-H2O (70/30, v/v)流速：流速：0.8 mL/min0.8 mL/min檢測波長：檢測波長：254nm254nm進樣體積：進樣體積：20L20LB B組：組：TSP HPLCTSP HPLC儀儀色譜柱

10、：色譜柱：Hypersil BDS C18 (4.0Hypersil BDS C18 (4.0200mm, 5m)200mm, 5m)流動相：流動相：CH3OH-H2O (80/20, v/v)CH3OH-H2O (80/20, v/v)流速：流速：0.8 mL/min0.8 mL/min檢測波長：檢測波長：254nm254nm進樣體積：進樣體積：20L 20L 編寫教師：阮源萍編寫教師：阮源萍 教教 授授編寫日期：編寫日期：2006年年9月月三、實驗內容與主要步驟三、實驗內容與主要步驟1 1 改換流動相。改換流動相。2 2 開動儀器，讓色譜柱平衡。開動儀器，讓色譜柱平衡。3 3 設置色譜任務站參數。設