1、T淋巴細胞表面CD4和CD45RA檢測及其在慢性腎衰中的意義    【摘要】nbsp;目的nbsp;CD45RA是CD45分子5種異構(gòu)體之一，選擇性地表達在CD8nbsp;+nbsp;TC、NK細胞、B細胞以及腫瘤浸潤性淋巴細胞（TIL）等表面，在細胞信號傳導中具有重要調(diào)節(jié)作用，本文旨在探討其在慢性腎衰時的表達情況。方法nbsp;應用流式細胞儀（FCM）檢     席允平 錢存榮 劉和平 孔憲濤 張 靜 路國強   中華現(xiàn)代中西醫(yī)雜志 2004年10月 第2卷 第10期 【摘要】 目的 CD45

2、RA是CD45分子5種異構(gòu)體之一，選擇性地表達在CD8 + TC、NK細胞、B細胞以及腫瘤浸潤性淋巴細胞（TIL）等表面，在細胞信號傳導中具有重要調(diào)節(jié)作用，本文旨在探討其在慢性腎衰時的表達情況。方法 應用流式細胞儀（FCM）檢測了慢性腎衰（CRF）患者和正常對照組CD3、CD4、CD8和CD45RA的表達。結(jié)果 顯示CRF患者CD4 + 細胞百分率顯著降低（P<0.01），CD45RA + 細胞百分率亦明顯降低（P<0.05）。結(jié)論 這可能與CRF患者免疫功能尤其是細胞免疫功能降低有重要關(guān)系。    關(guān)鍵詞 慢性腎衰 CD4 CD45RA 表

3、達    Detection of CD4and CD45RA on T lymphocyte  surface and its significane in CRF     Xi Yunping，Qian Cunrong，Liu Heping，et al.    406th Hospital of PLA，L shun116041.    【Abstract】 Objective CD45RA is one of

4、the five isoforms of CD45molecule.It expresses selectivly on CD8 + TC，NK cell，B cell and tumor infiltrating lymphocyte（TIL）.CD45RA has an important regulating function in cellular signal transduction.Methods In order to explore the relation between CD45RA and chronic renal failures（CRF），we have anal

5、yzed the expression of CD3，CD4，CD8and CD45RA in CRF patients and normal people by using FMC.Results The results indicate that CD4and CD45RA expression is decreased signifcantly in CRF patients（P<0.01or P<0.05）.Conclusion The results suggested that the immune function（especially cellular immune

6、 function）is decreased.    Key words detection CD4 CD45RA Tlymphocyte significance CRF     慢性腎功能衰竭患者簡稱腎衰（Chronic Renal Failure，CRF），是一種常見的嚴重臨床癥候群，預后不良。CRF是在各種慢性腎臟疾病的基礎上，由于腎單位嚴重受損，緩慢出現(xiàn)的腎功能減退而致不可逆轉(zhuǎn)的腎衰，同時往往伴有免疫功能的全面減退。本文應用流式細胞儀（FCM）檢測了CD3、CD4、CD8和CD45RA在慢性腎衰

7、中的表達，現(xiàn)報道如下。    1 材料和方法        1.1 檢測對象 CRF35例，男29例，女6例，平均年齡45.70±13.33歲。其中27例繼發(fā)于腎小球腎炎，8例繼發(fā)于腎盂腎炎。正常對照30例，男19例，女11例，平均年齡35.86±7.48歲，為體檢健康者。    1.2 材料        1.2.1 動物 BALB/C小鼠，46周齡，雌雄

8、不拘，由中國科學院上海動物中心提供。        1.2.2 細胞 2H4雜交瘤細胞（分泌CD45RA單抗），系從ATCC（美國模式菌種收集中心）購得。        1.2.3 培養(yǎng)基 RPMI-1640（GIBCO）完全培養(yǎng)液含2mmol/L谷氨酰胺，青霉素100U/ml，鏈霉素100g/ml，10%新生小牛血清。        1.2.4 CD45RA單克隆抗體制備 2H4細胞復

9、蘇后，將培養(yǎng)好的雜交瘤細胞（12）×10 6 /ml注入預先用降植烷處理過的小鼠腹腔中（0.5ml）。2周左右采集腹水，3，000rpm離心15min，收集上清。先用飽和硫酸銨（ASA）鹽析法進行粗提，然后將粗提后的單克隆抗體樣品用20mmol/L NaCl、pH7.820mmol/L的Tris-HCl緩沖液透析，其間更換3次以上透析液，至鈉氏試劑檢測無黃色物形成為止 1  。        1.2.5 CD3、CD4和CD8單克隆抗體 系由華美生物工程公司提供。   

10、60;    1.3 FCM測定CD3 + 、CD4 + 、CD8 + 和CD45RA + 細胞取受檢者肝素抗凝血100l，抗CD3、CD4、CD8和CD45RA單抗各10l。32孵箱孵育30min，經(jīng)常搖動。每管加0.02mol/L pH7.4的PBS4ml，1，000rpm離心3min，洗滌2次。然后加入羊抗鼠IgG熒光（FITC）標記抗血清，每管各加50l（華美生物工程公司提供），32孵育30min。每管滴加固定液（0.8%戊二醛）2滴，以Epics-XL FCM（Coulter）檢測。同時作陰性對照。    2 結(jié)果

11、    見表1。        3 討論    CRF是一種常見的嚴重臨床癥候群，預后不良，病死率較高。CRF是在各種慢性腎臟疾病基礎上，由于腎單位嚴重受損，緩慢出現(xiàn)的腎功能減退而致不可逆轉(zhuǎn)的腎衰。同時往往伴有免疫功能的全面減退。CRF的發(fā)病機制十分復雜，人們曾提出“尿毒癥毒素學說”，“健存腎單位學說”，“矯枉失衡學說”、“腎小球高濾過學說”、“脂質(zhì)代謝紊亂學說”和“腎小管高代謝學說”等。其中“尿毒癥毒素學說”較早得到人們認識并一直受到重視。目前

12、已知尿毒癥患者體液內(nèi)約有20余種尿毒癥毒性物質(zhì)，可分為小分子（分子量<500道爾頓）、中分子（分子量5003，000道爾頓）和大分子（分 子量>3，000道爾頓）三類，其中中分子毒性物質(zhì)可引起機體的免疫功能抑制。    表1 CRF組和正常組CD3 + 、CD4 + 、CD8 + 和CD45RA + 細胞百分率（%）的比較 (略)  注:與對照組比較， P<0.05， P<0.01   中分子毒性物質(zhì)可能包括:（1）高濃度正常代謝產(chǎn)物;（2）結(jié)構(gòu)正常，濃度增高的激素;（3）細胞代謝紊亂產(chǎn)生的多肽;（4

13、）細胞或細菌裂解產(chǎn)物。高濃度中分子物質(zhì)可引起周圍神經(jīng)病變、尿毒癥腦病、紅細胞生成抑制、脂蛋白酶活性抑制、抗體生成抑制、細胞免疫功能低下等 2  。        為了探討CRF患者細胞免疫功能狀況，本文應用FCM檢測了CRF組和正常對照組CD3、CD4、CD8和CD45RA的表達。結(jié)果顯示CRF患者CD4 + 細胞百分率顯著降低（P<0.01），CD45RA + 細胞百分率亦明顯降低（P<0.05）。而CD3 + 細胞和CD8 + 細胞百分率則差異無顯著性。    

14、;    CD4分子為細胞表面單鏈糖蛋白，屬免疫球蛋白超家族成員，CD4可與MHC類抗原結(jié)合，不僅可增強T淋巴細胞與APC或靶細胞結(jié)合的程度，而且與刺激信號的傳遞有關(guān) 3  。CD4的胞漿區(qū)與蛋白酪氨酸激酶P561ck相連，對T細胞信號傳導起重要作用 4  。CD4分子主要分布于誘導-輔助性T細胞（Tind/Th）、遲發(fā)型超敏反應T細胞（TDTH）和抗抑制性T細胞（TCS）上。CD4 + CD8 - T細胞的主要功能是以其分泌細胞因子來增強和擴大免疫應答過程的 5  。在CRF中CD4分子表達降低，這可能與CRF免疫功能尤其是細胞免疫

15、功能降低有重要關(guān)系。        Tind/Th細胞的主要功能之一是分泌細胞因子，包括抗原特異淋巴因子及抗原非特異淋巴因子（如IL-2、IL-4、IL-5、IL-10、IFN-、GM-CSF等）。后一類因子對免疫應答具有廣泛的正調(diào)節(jié)作用，能激活Tc及B細胞，使它們分化為相應的效應細胞。在CRF時，CD4 + 細胞百分率減少亦包括了Tind/Th細胞的減少，這也可能是其細胞免疫功能 減低的另一個重要因素。        CD45RA是CD45分子五種異構(gòu)體

16、之一，選擇性地表達在T細胞、NK細胞、B細胞以及腫瘤浸潤性淋巴細胞（TIL）等表面，在細胞信號傳導及淋巴細胞效應中具有重要作用 6  。現(xiàn)已證實，CD45分子參與細胞的活化和生長調(diào)節(jié)，抗原誘導的T細胞克隆增殖有賴于CD45分子的表達 7  。本文測定了35例CRF患者CD45RA + 百分率較正常組明顯降低（P<0.05），這可能是其細胞免疫功能降低的又一重要原因。至于CRF引起CD4和CD45RA表達降低的確切機制，以及二者之間的相互關(guān)系，有待進一步研究證實。    參考文獻    1

17、徐志凱.實用單克隆抗體技術(shù)，西安:陜西科學技術(shù)出版社，1992，91-142.        2 葉任高，池清瑞.腎臟病診斷治療學，北京:人民衛(wèi)生出版社，1994，516-532.        3 金伯泉.細胞和分子免疫學，北京:世界圖書出版公司，1995，21-23.        4 Rudd CE.CD4，CD8and the TCR-CD3complex:a novel cla

18、ss of protein-tyrosine kinase receptor.Immunol Today，1990，11（11）:400-406.        5 蔣明.風濕病學，北京:科學出版社，1995，106-112.        6 Thomas ML，Lefrancois L.Differential expression of the leucocyte-common antigen family.Immunol Today，1988，9:320-326.        7 Pingel JT，Thomas ML.Evi