PH1423 CTAB抽提液實驗步驟與方法_第1頁
PH1423 CTAB抽提液實驗步驟與方法_第2頁
PH1423 CTAB抽提液實驗步驟與方法_第3頁
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文檔簡介

1、 PH1423|CTAB 抽提液 /CTAB Extract SolutionCatalog No :PH1423Size :500mL Store at RT簡介CTAB 是一種陽離子去污劑,具有從低離子強度的溶液中沉淀核酸和酸性多聚糖的特性,在這種條件下,蛋白質和中性多聚糖仍留在溶液 里,在高離子強度的溶液里, CTAB 與蛋白質和大多數酸性多聚糖以外的多聚糖形成復合物,只是不能沉淀核酸。因此, CTAB 可以用于 從大量產生粘多糖的有機體如植物以及某些革蘭氏陰性菌(包括 E.coli 的某些株中制備純化 DNA 。從植物組織中制備基因組 DNA 較常采用的方法有氯化離心法、 CTAB 抽

2、提法等。 CTAB 抽提法是經典的植物 DNA 提取法,可以用于多種 不同類型植物樣品 DNA 的提取,獲得的量很高,但是純度一般,但是足夠用于大多數分子生物學實驗。 CTAB 抽提液的有效成分主要由 CTAB 、氯化鈉、 EDTA 等組成,附送 2-巰基乙醇,臨用前加入 2-ME ,使其更有效,更穩定。試劑組分試劑 (A:CTAB 抽提液 -500ml-Store at RT試劑 (B:2-ME-10ml-Store at RT away from light產品保存Store at RT ,有效期 24個月使用步驟(僅供參考1、取 5ml 或適量 CTAB 抽提液,按 CTAB 抽提液:2

3、-ME=50:1的比例混勻,置于 15ml 或其它規格的離心管中, 60預熱。2、稱取 1.01.5g或適量新鮮植物組織或葉片,用預冷的液氮或干冰冷卻研缽或勻漿器,將新鮮植物組織或葉片粉碎成細粉末,將冷凍的 組織轉移至離心管中。3、向粉碎的組織中按 45ml/g加入預熱的 CTAB 抽提液,充分混勻, 65溫育 1560min,并不時混勻。4、加入等體積 24:1氯仿 /異戊醇,顛倒充分混勻, 8000g 離心 5min10min,回收上層水相(即上清液,該上清液中含有所需 DNA 。5、轉移上清液至新的離心管中,加入 1/22/3體積預冷的異丙醇,輕輕混勻,室溫靜置使核酸沉至管底。如果觀察不到沉淀,可在室溫 下靜置數小時至過夜。6、 2000g 離心 2min ,輕輕棄上清液。7、在松散的 DNA 沉淀物上加入 75%乙醇,室溫靜置 20min , 4000g 離心 10min ,輕輕棄上清液。8、自然干燥 DNA ,加入適量去離子水或 TE 緩沖液,低溫保存。注意事

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