1、黃芪甲甙對大鼠離體腸系膜動脈血管舒縮功能的影響 【摘要】 目的:觀察黃芪甲甙對大鼠離體腸系膜動脈舒縮功能的影響,并探討其可能機制。方法:分離腸系膜動脈12級分支制備離體腸系膜血管環固定于微血管張力測定儀，觀察黃芪甲甙對血管環舒縮功能的影響。結果:不同濃度的黃芪甲甙(30 mg/L和100 mg/L)孵育后，苯腎上腺素引起的血管收縮較對照組明顯下降（P0.05或P0.01）。累積濃度的黃芪甲甙對苯腎上腺素（210-6 mol/L）預收縮的內皮完整或去內皮腸系膜動脈血管環均產生濃度依賴性的舒張作用，中高濃度的黃芪甲甙（10 mg/L、30 mg/L和100 mg/L）對內皮完整組的舒張作用明顯強于

2、去內皮組 (P0.05或 P0.01)。累積濃度的黃芪甲甙對KCl預收縮的腸系膜動脈血管環張力無明顯影響（P0.05）。L-NAME(10-4 mol/L)預處理能顯著減弱黃芪甲甙的舒血管作用（P0.05或P0.01）。結論:黃芪甲甙具有一定的內皮依賴性舒張血管作用,且主要通過NO途徑發揮作用。 【關鍵詞】 黃芪甲甙 腸系膜動脈 Abstract: Objective: To observe the effect of astragaloside on contraction and relaxation on isolated mesenteric arteries, and to stud

3、y its underlying mechanisms. Methods: The isolated mesenteric arteries segments were mounted in the Danish Myo Technology Multi Wire Myograph System (DMT). The effect of astragaloside on contraction and relaxation on the arteries was observed. Results: After incubation in the solution of Astragalosi

4、de of different concentrations (30 mg/L and 100 mg/L), vasoconstriction induced by ethyl phenyllphrine obviously declined compared with control group（P0.05 or P0.01）. Astragaloside relaxed mesenteric artery rings (both with and without endothelium) in concentration-dependent manner, which had been p

5、recontracted with ethyl phenyllphrine（210-6 mol/L）, while the relaxation of the rings with endothelium was significantly stronger than that of rings without endothelium （P0.05 or P0.01）. Astragaloside had no significant effect on those which had been precontracted by KCl（P0.05）. Pre-treatment with L

6、-NAME (10-4 mol/L) significantly decreased the effect of vasodilatation of Astragaloside （P0.05 or P.01）. Conclusion: Astragaloside IV can endothelium-dependently dilate vessels to some extent, and it plays this function mainly through the NO pathway. Key words: astragaloside IV; mesenteric artery;

7、vasorelaxation; vasoconstriction; endothelium 黃芪是傳統活血化瘀中藥，祖國醫學認為黃芪有補氣升陽，利水消腫，益氣固表之功效，而將其歸屬“補氣”之藥。黃芪廣泛用于心血管疾病的治療1。有研究表明,黃芪及其有效成分對冠脈、胸主動脈等有直接擴張作用2,3，但對機體主要的阻力血管腸系膜動脈的作用尚未見報道。本研究采用大鼠離體腸系膜動脈血管環灌流模型，觀察黃芪主要有效成分黃芪甲甙（astragaloside ）對大鼠離體腸系膜動脈血管收縮與舒張功能的影響，并探討其可能的機制。 1 材料和方法 1.1 實驗動物 Sprague-Dawley雄性大鼠（體重2002

8、50 g），由溫州醫學院實驗動物中心提供SYXK(浙)2005-0061。 1.2 主要試劑及儀器 黃芪甲甙（購自成都思科華生物技術有限公司，純度98%），L-硝基-精氨酸甲酯(N-Nitro-L-arginine-methyl-ester， L-NAME)、苯腎上腺素(Phenylephrine，PE)、乙酰膽堿(Acetylcholine，ACh)、二甲基亞砜(Demethyl sulfoxide，DMSO)購自Sigma公司。PSS營養液成分(mmol/L)：NaCl 118.99，KCl 4.69，MgSO47H20 1.17，KH2P04 1.1，CaCl22H20 2.50，NaH

9、CO3 25.00，EDTA 0.03，Glucose 5.50。KPSS營養液成分(mmol/L)：KCl 123.70，MgSO47H20 1.17，KH2P04 1.18，CaCl22H20 2.50，NaHCO3 25.00，EDTA 0.03，Glucose 5.50。二者pH值均為7.4，采用丹麥DMT微血管張力測定儀（DMT）和澳大利亞Powerlab生物信號采集處理系統記錄張力的變化。 1.3 腸系膜動脈環的制備 大鼠用鈍器擊昏，頸椎脫位處死后，迅速取出帶系膜的腸管。顯微鏡下分離腸系膜血管12級動脈分支， 剪取1.52 mm的動脈環。部分用0.1% Triton X-100灌注

10、腸系膜動脈5 s左右,以制備去內皮動脈環。將腸系膜動脈環固定于DMT浴槽內傳感器的鉗夾上，浴槽中恒速通以95% O2和5% CO2混合氣體，溫度維持在37 。血管環在PSS溶液中平衡30 min后作標準化，以KPSS檢驗動脈環收縮性,兩次收縮幅度相差小于10%。以Ach（10-5 mol/L）檢驗內皮功能（舒張率大于80%認為內皮完整，舒張率小于10%則認為內皮去除）。 1.4 實驗過程 1.5 統計學處理方法 采用SPSS 13.0統計軟件進行分析。兩組間比較采用t檢驗，方差不齊者采用t檢驗。多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD法。 2 結果 2.3 累積濃度黃芪甲甙對KCl

11、預收縮的腸系膜動脈環的舒張作用 實驗結果顯示各濃度黃芪甲甙不能使KCl誘導收縮的動脈環顯著舒張（均P0.05），見表3。 3 討論 PE是一種腎上腺素能受體激動劑，能通過開放受體操作性鈣通道(receptor-operated calcium channel，ROCC)而導致血管收縮。PE與受體結合后，通過改變膜受體耦聯G蛋白構型，激活磷脂酶C，產生三磷酸肌醇（IP3），通過IP3途徑引起肌漿網或者內質網鈣庫內鈣釋放，胞內鈣離子濃度升高，同時影響L型鈣離子通道，外鈣內流增加，通過興奮-收縮耦聯機制，血管平滑肌收縮，血管張力增加5,6。本實驗結果表明，不同濃度的黃芪甲甙對PE引起的血管收縮具有明

12、顯的抑制作用，提示黃芪甲甙抑制血管環的收縮可能與其抑制血管平滑肌胞內鈣釋放有關。 高鉀可誘導細胞膜電位去極化，激活電壓依賴性鈣通道(voltage-dependent calcium channel，VDCC)，引起胞外鈣內流而誘發血管收縮。實驗中發現，黃芪甲甙對KCl預收縮的腸系膜血管環無舒張作用，提示黃芪甲甙可能不是通過抑制VDCC介導的細胞外鈣內流而發揮其對腸系膜血管環的舒張作用。 本實驗發現，黃芪甲甙對PE預收縮的內皮完整和去內皮血管環都具有舒張作用，但對去內皮組的作用明顯降低，提示在黃芪甲甙舒張血管的作用中血管內皮起了重要作用。一般認為內皮依賴性舒張反應是由內皮源性舒張因子（即NO或

13、含有NO的復合物）、內皮依賴性超極化因子（EDHF）和前列腺素類物質（如PGI2）作用完成的。NO是血管內皮細胞合成的舒血管物質，對血管張力有調節作用。NO在內皮一氧化氮合酶的作用下由左旋精氨酸轉化而來,通過激活鳥苷酸環化酶，增加環磷酸鳥苷(cGMP)含量，抑制細胞外Ca2+內流和抑制細胞內Ca2+釋放而使平滑肌舒張8,9。本實驗發現，一氧化氮合酶抑制劑L-NAME預處理血管環，可明顯地抑制黃芪甲甙誘導的血管舒張作用。表明黃芪甲甙舒張血管的作用與內皮細胞的NO系統有重要關系。推測，黃芪甲甙作用于血管內皮細胞后促進了內皮依賴性舒血管物質NO的合成與釋放，而后者介導了黃芪甲甙的舒血管效應。【參考文

14、獻】 1 陳治奎.黃芪對心血管疾病作用的實驗研究進展J.心血管病學進展,2003,24(2):113-116.石剛剛,陳錦香,李長潮,等.黃芪注射液對冠狀動脈直接作用的研究J .中藥新藥與臨床藥理,1999,10(1):38-39.張必祺,胡申江,單綺嫻,等. 黃芪舒張血管平滑肌的作用及機制J. 浙江大學學報(醫學版),2005,34 (1):66-68.Musha Y, Itoh S, Hanson MA, et al. Does estrangen affect the development of abnormal vascular function in offspring of ra

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