1、猴子瘦素(leptin)酶聯免疫分析試劑盒利用說明書本試劑盒僅供研究利用。檢測范圍：96T80ng/L-2000ng/L利用目的：本試劑盒用于測定猴子血清、血漿及相關液體樣本中瘦素(leptin)含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中猴子瘦素(leptin)水平。用純化的猴子瘦素(leptin)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入瘦素(leptin),再與HRP標記的瘦素(leptin)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，通過完全洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的瘦素(leptin

2、)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中猴子瘦素(leptin)濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20mlX1瓶7終止液6mlX1瓶2酶標試劑6mlX1瓶8標準品(4000ng/L)XI瓶3酶標包被板12孔X8條9標準品稀釋液XI瓶4樣品稀釋液6mlX1瓶10說明書1份5顯色劑A液6mlX1瓶11封板膜2張6顯色劑B液6MX1/瓶12密封袋1個標本要求1 .標本搜集后及早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。假設不能馬上進行實驗，可將標本放于-20C保留，但應幸免反復凍融2 .不能檢測含NaM3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HR

3、P)活性。操作步驟1 .標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可依照以下圖表在小試管中進行稀釋。2000ng/L5號標準品150M的原倍標準品加入150W標準品稀釋液1000ng/L4號標準品150M的5號標準品加入150川標準品稀釋液500ng/L3號標準品150M的4號標準品加入150川標準品稀釋液250ng/L2號標準品150M的3號標準品加入150川標準品稀釋液125ng/L1號標準品150M的2號標準品加入1501標準品稀釋液2 .加樣：別離設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50卜山待測樣品孔中先加樣品

4、稀釋液40卜山然后再加待測樣品10川(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡可能不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3 .溫育：用封板膜封板后置37溫育30分鐘。4 .配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸鐳水30倍稀釋后備用5 .洗滌：警惕揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。6 .加酶：每孔加入酶標試劑50回，空白孔除外。7 .溫育：操作同3。8 .洗滌：操作同5。9 .顯色：每孔先加入顯色劑A50M，再加入顯色劑B50g,輕輕震蕩混勻，37避光顯色15分鐘.10 .終止：每孔加終止液50出，終止反映（現在藍色立轉黃色）。11 .測定：以空白空調零，

5、450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘之內進行。操作程序總結：準備試劑，樣品和標準品加入準備好的樣品和標準品，37T反應30分鐘洗板5次，加入酶標試劑，37反應30分鐘洗板5次，加入顯色液A、B,37顯色10分鐘加入終止液15分鐘之內讀0D值計算計算以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，依照樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度：再乘以稀釋倍數：或用標準物的濃度與OD值比算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。注意事項1 .試劑盒從冷藏環境中掏出應在室溫平穩15-30分

6、鐘后方可利用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保留。2 .濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不阻礙結果。3 .各步加樣均應利用加樣器，并常常校對其準確性，以幸免實驗誤差。一次加樣時刻最好操縱在5分鐘內，如標本數量多，推薦利用排槍加樣。4 .請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量太高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋必然倍數（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數（XnX5）。5 .封板膜只限一次性利用，以幸免交叉污染。6 .底物請避光保留。7 .嚴格依照說明書的操作進行，實驗結果判定必需以酶標儀讀數為準.8 .所有