1、文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.歡迎下載支持大腸桿菌培養實驗報告篇一：大腸桿菌檢測實驗報告國標法測定大腸桿菌樣本的細菌總數實驗目的實驗原理：國標法操作的原理實驗器材：培養箱，10只移液管，1只250ml錐形瓶，5只大試管， 試管架，4個平皿，500ml大燒杯1個，電子天平，紗布， 脫脂棉，滅菌鍋，PH計或PH試紙，100ml量筒，橡皮手套， 超凈臺實驗藥品：磷酸鹽緩沖液，蒸儲水，LB培養基，瓊脂，5%NaOH5%HCl 實驗步驟：10只移液管，1只250ml錐形瓶，5只大試管，4個平 皿，500ml大燒杯1個，100ml量筒進行洗滌，然后一起放 入高壓蒸汽滅菌鍋中在 121攝氏

2、度條件下滅菌 20min。滅完 菌后烘干，完成后放入超凈臺中。用酒精擦拭超凈臺,紫外消毒30min1:用電子天平稱取成品LB 3.1241g和瓊脂1.8756g放入250ml的潔凈錐形瓶中。2 :用量筒量取125ml的蒸播水1文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.歡迎下載支持.加入該錐形瓶中，制成培養基。3:用棉花堵住該錐形瓶的瓶口，用牛皮紙包住瓶口， 用橡皮筋扎牢，再將培養基放入滅菌鍋中在121攝氏度之下滅菌20min。4:火完菌后放入超凈臺中備用。三：1:取1只無菌250ml錐形瓶，用量筒向其中加入 49ml PBS2:將1ml樣品

3、加入到該錐形瓶中，搖勻制成1:50的細菌溶液。3:取4只試管，編號144:用無菌移液管分別向 4只試管中加入9ml的PBS5:用1ml無菌移液管從樣品中移取 1ml菌液加入到1 中,震蕩試管使菌液均勻。 6 :用1ml無菌移液管從1號試 管中移取1ml的細菌溶液加入2號試管中，搖勻7:用另一只1ml無菌移液管從2號試管中移取1ml 細菌溶液，加入 3中，搖勻以此類推直至 4只試管中均加入了細菌溶液。9:取4只平皿，編號 1410:分別用4只無菌移液管從這 4只試管中移取1 m 1 的菌液置于4只平皿中，加入4 5 5。攝氏度溫度下的培 養基，約15 mm厚度。緩慢旋轉平皿使菌液與培養基混合 均

4、勻；待培養基冷凝后倒置。2文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.歡迎下載支持11 :將培養基在3 6攝氏度條件下培養12小時。12:取由培養皿，選擇細菌個數在30至300個之間的平皿數細菌的個數。四：實驗結果（記得在操作過程和得到結果時拍照）1號，2號菌落個數多不可計，舍棄4號平皿中菌落數目小于 10 cfu ,舍棄3號平皿中菌落分布較均勻，數 3號中的菌落數，一共 有 210 個 cfu 。計算樣品中細菌濃度為：1.05 X 105 Cfu/ml點評超凈臺中的實驗步驟講述詳細，明確，不錯。前面的步 驟敘述有點亂，建議按照如下標題重新調

5、整順序。實驗步驟：1、儀器清洗將燒杯，培養皿、試管等儀器用洗衣粉清洗，超聲5min.然后用清水清洗，超聲 5min,最后用三蒸水清洗，放入烘箱 中烘干。2、培養基配制精確稱量。放入錐形瓶中，加入。mL蒸播 水，搖勻3,滅菌包扎、滅菌，烘干備用3文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.歡迎下載支持3、超凈臺中的操作（如上）除了實驗步驟和結果，還要有討論和注意事項例如：實驗討論：1、評價該方法（操作簡易程度，靈敏度如何，適用性）2、為何選擇細菌個數在 30至300個之間的平皿數細 菌的個數？注意事項比如各種儀器的使用注意事項，以及保持潔凈，防

6、止染 菌等。篇二：微生物生理生化實驗報告實驗十 一 IMViC與硫化氫試驗 指導教師：李海花周六第三組學號：06012XX041 姓名：宋天佳 專業：XX級水產養 殖學號：03021XX025姓名：皇 昊 專業：XX級化學1班學號：06012XX055姓名：續鵬輝 專業：XX級水產養 殖一、實驗目的了解IMViC與硫化氫反應的原理及其在腸道菌鑒定中的 意義和方法。二、實驗原理IMViC 是 I 一 口引噪（indol test ）、M甲基紅（methyl red4文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.歡迎下載支持test ）、V伏-普（

7、Voges-Prolauertest ）和 C檸檬酸鹽（citrate test ） 4個實驗的縮 寫。這4個實驗主要用來快速鑒別產氣桿菌與大腸桿菌，多用于水的細菌檢查。大腸桿菌雖非 致病菌，但在飲用水時若超過一定指標，則表示水質受糞便污染。產氣桿菌也廣泛存在 于自然界中，因此檢查水是要將兩者分開。硫化氫（H2S）實驗也是檢查腸道細菌的生 化實驗。（一）引噪試驗（indol test ）阻噪試驗是用來檢測阻噪試驗的產生,有些細菌分解培 養基中的色氨酸生成阻噪（靛基質），經與試劑中的對二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰回噪而呈紅色。色氨酸+ H2O色氨酸酶 阻噪+ NH升丙酮酸阻噪十對二甲基氨基苯甲

8、醛玫瑰回噪（紅色）只有部分細菌能產生色氨酸酶，從而具有分解色氨酸產生阻噪的能力，因此阻噪實驗可以作為一個生化檢測指標。大腸桿菌產色氨酸酶實驗結 果為陽性（紅色），產氣腸桿菌不產色氨酸酶實驗結果為陰 性（無色）。（二）M-甲基紅試驗（methyl red test ）用來檢測由葡萄糖產生的有機酸，如甲酸、乙酸、乳酸5文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.歡迎下載支持等。細菌代謝糖產生酸使培養基變酸（pH下降），使甲基紅指示劑變色：橘黃色（pH6.3紅色（pH4.2 ）盡管，所有腸道微生物都能發醉葡萄糖產生有機酸，但大腸桿菌和產氣腸桿菌有區

9、別：兩者在培養早期產生有機酸，但大腸桿菌在培養后仍能維持酸性pH4,而產氣腸桿菌則將有機酸轉化為非酸性產物，使 pH上升至6左右。因此，大腸桿菌為陽性（紅色），產氣腸桿菌陰性（黃色）。（三）伏-普實驗（Voges-Prolauer test ）測定細菌利用葡萄糖產生非酸性或中性末端產物（如丙酮酸）的能力。丙酮酸進行縮合、脫竣生成乙酰甲基醇，此化合物在堿性條件下能被空氣中的氧氣氧化成二乙酰。二乙酰與蛋白腺中的精氨酸的服基作用，生成紅色化合物，及伏 - 普反應陽性，不產生紅色化合物者為反應陰性。堿性條件、加入少量含服基的化合物可使反 應更明顯。大腸桿菌不產丙酮酸實驗結果為陰性（無色），產氣腸桿菌產

10、丙酮酸實驗結果為陽性（紅色） 。丙酮酸乙酰乳酸 乙酰甲基甲醇服基十二乙6文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.歡迎下載支持紅色化合物（四）檸檬酸鹽試驗（citrate test ）用來檢測檸檬酸鹽是否被利用，有些細菌以檸檬酸鈉為碳源，培養基中的檸檬酸和磷酸鏤被分解后，產生堿性化合物，使 pH升高，當加入1% 澳麝香草酚藍指示劑時，培養基就會有綠色轉變為深藍色，澳麝香草酚藍指示范圍：pHv6黃色，pH 67綠色，pH >7藍色。大腸桿菌不能利用檸 檬酸鹽實驗結果為陰性（綠色），產氣腸桿菌能利用檸檬酸 鹽實驗結果為陽性（藍色）。（五）

11、硫化氫實驗用來檢測硫化氫的產生，也是用于腸道細菌檢查的常用生化實驗。含硫有機物（如胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸）能被部分細菌分解產生 H2S,H2s和培養基中的鉛鹽或鐵鹽反應，形成黑色的硫化鉛或硫化鐵沉淀。大腸桿菌不能分解含硫有機物實驗結果為陰性（無沉淀），產氣腸桿菌能分解含硫有機物實驗結果為陽性（黑色沉淀）。三、實驗器材1、菌種：大腸桿菌、產氣腸桿菌斜面各一支。7文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.歡迎下載支持2、培養基：蛋白月東水培養基、葡萄糖蛋白月東水培養基、 檸檬酸鹽培養基、硝酸鹽還原培養基、醋酸鉛培養基3、溶液和試劑：甲基紅指

12、示劑，40%KOH 5%-蔡酚溶液，乙醍，回噪試劑4、儀器或其他用具：試管架，接種環等四、操作步驟一）實驗準備1 .葡萄糖蛋白陳水培養基配制：蛋白腺3g,葡萄糖3g,磷酸氫二鉀1.2g ,水600ml,溶解，調節Ph7. , 0-7.2 ,分裝于70支試管中，112c滅 菌 30min。2 .檸檬酸鹽培養基配制： NH4H2PO40.2g K2HPO4）.2g , NaCl1g, MgSO410mg 檸檬酸鈉 0.4g ,瓊月旨 4g,調節 pH6.8, 1峨香草酚藍乙醇液 2ml,水200ml,溶解，分裝于 20支試 管中，121c滅菌20min。（pH不宜偏高，以淡綠色為宜）3 .硝酸鹽還

13、原培養基配制：蛋白腺 1.25g ,氯化鈉 0.625g ,硝酸鉀 0.25g ,水 125ml,溶解，調節pH7.4左右，分裝于16支試管中，121c滅菌 20min。4 .硫化氫試驗養基配制：蛋白腺5g,氯化鈉1.25g,檸檬酸鐵鏤125mg硫代硫酸鈉 125mg,瓊脂5g,水250ml。8文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.歡迎下載支持先將瓊脂、蛋白腺融化，冷至 60 C時加入其他成分，調 pH7.2左右，分裝于 35支試管中，112c滅菌20min。二）接種與培養1 .穿刺法分別接種大腸桿菌、產氣桿菌于2支醋酸鉛培養基（H2S

14、）, 37 c 培養 48ho2 .分別接種大腸桿菌、產氣桿菌于2支蛋白月東水培養基（I）、2支葡萄糖蛋白月東水培養基（M& V）, 37c培養2d。3 .劃S曲線法分別接種大腸桿菌、產氣桿菌于2支檸檬酸鹽斜面培養基（C）, 37c培養2d。三）結果觀察1 .H2s實驗：觀察是否有黑色硫化鉛沉淀產生。2 .回噪實驗：2d后的培養物內加 34滴乙醍，搖動數 次，靜至13min,待乙醍上升后，沿管壁徐徐滴加2滴回噪試劑，在乙醍和培養物之間產生紅色環狀物者為陽性反應。3 .甲基紅實驗：2d后的培養物內加2滴甲基紅試劑，培 養物變為紅色者為陽性，黃色者為陰性（注意甲基紅不要過 量，以免由現假陽

15、性）。4 .伏一普實驗：2d后的培養物內加 510滴40%KOH 然后加入等量的5%-蔡酚溶液，用力振蕩，紅色為陽性。5 .檸檬酸鹽實驗：觀察 2d后的培養物上有無細菌產生 及其顏色，藍色為陽性，綠色為陰性。五、實驗結果9文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.歡迎下載支持將實驗結果填入下表。“ + ”表示陽性反應，“一”表示 陰性反應。六、討論1 .回噪試驗、甲基紅試驗、伏-普試驗、檸檬酸鹽試驗的實驗結果與理論結果一致。H2s試驗的實驗結果與理論結果不一致，兩支醋酸鉛培養基中都產生黑色沉淀，均為陽 性反應，可能的原因：接種操作時，先穿刺

16、接種產氣腸桿菌， 之后，接種針未充分加熱滅菌，再穿刺接種大腸桿菌時混入 部分大腸桿菌；接種針在接種產氣腸桿菌時，接種針上不粘 上了產氣腸桿菌，未被加熱滅菌，再接種大腸桿菌時，將產 氣腸桿菌混入，使大腸桿菌產生假陽性反應。2 .阻噪試驗，實驗現象不明顯，可能的原因：培養基 中的色氨酸含量不夠高；回噪試劑加入的量不夠，一部分粘 在試管壁上損失掉，之后補加時乙醍已揮發；滴加阻噪試劑 時動作不夠輕緩，破壞了紅色化合物的生成。3 .為什么大腸桿菌是甲基紅反應陽性，而產氣腸桿菌 為陰性？這個試驗與伏一普試驗最初底物和最終產物有何 異同？大腸桿菌、產氣腸桿菌都能發醉葡萄糖，在分解葡萄糖 過程中產生丙酮酸，進

17、一步分解代謝途徑不同。大腸桿菌， 可產生乳酸、琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性產物，可使培 養基PH值下降至pH4.5以下，使甲基紅指示劑變紅，即甲10文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.歡迎下載支持基紅反應陽性。產氣腸桿菌則使丙酮酸進行縮合、脫竣生成乙酰甲基甲醇，此化合物在堿性條件下能被空氣中的氧氣氧 化成二乙酰，二乙酰與蛋白月東中精氨酸的月瓜基作用，生成紅 色化合物，即伏-普陽性反應。4 .說明在硫化氫試驗中醋酸鉛的作用，可以用哪種化合物代替醋酸鉛？醋酸鉛培養基（試紙）可檢驗硫化氫的產生，反應為： Pb（Ac）2+H2S=PbSj +2

18、HAc產生黑色的硫化鉛。所以培養基（紙帶）變黑為陽性，不變為陰性。從硫離子的角度講，硝酸銀、硫酸銅可產生同樣現象。5 .為什么在細菌阻噪試驗中用回噪的存在作為色氨酸酶活性的指示劑，而不用丙酮酸？阻噪比較容易檢測，特異性也高，不容易受干擾。丙酮 酸則相對難以檢測，特異性很低，很多反應都能產生丙酮酸， 如葡萄糖醉解的終產物也是丙酮酸。篇三：多管發醉法檢測水中的大腸菌群的實驗報告學院：環境科學與工程學院班級：11級環境科學（2）班姓名：李寶攜學號：98實驗3多管發醉法檢測水中的大腸菌群一、實驗目的（1） 了解飲用水和水源水大腸菌群的原理和意義。（2）學習檢測水中大腸菌群的方法。二、實驗原理11文檔來

19、源為：從網絡收集整理,word版本可編輯文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.歡迎下載支持大腸菌群是評價水質好壞的一個重要的衛生指標，也是反映水體被生活污水污染的一項重要監測項目。大腸菌群是一群以大腸埃希氏菌為主的需氧及兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌，在37c生長時，能在 48小時內發醉乳糖并產酸產氣。我國生活飲用水衛生標準中規定一 升水樣中總大腸菌群數不超過三個。多管發醉法包括初發醉試驗、平板分離和復發醉試驗三 個部分。發醉管內裝有乳糖蛋白腺液體培養基，并倒置一德 漢氏小套管。當發醉產酸時，澳甲酚紫可由紫色變為黃色， 乳糖能起選擇作用，因為很多細菌不能發醉乳糖，而大腸菌 群能發醉乳糖而產酸產氣。三、實驗材料1、水樣 中心湖湖水2、試劑三倍濃縮乳酸蛋白腺培養液 3、儀器及其他用品試管、發醉管、燒杯、量筒、移液槍、高壓滅菌鍋四、操作過程1、取16支發醉管，其中5支加入5mL三倍乳糖蛋白月東 培養液。取35mL三倍乳糖蛋白月東培養液于燒杯中，量取70mL水進行稀釋，將三倍乳糖蛋白腺培養液稀釋成一倍的乳酸蛋 白腺培養液，分別取10mL一倍的乳酸蛋白腺培養液與10支試管中，最后，1支加入9ml自來水。2、完成后包裝好，于121c高壓滅菌鍋中滅菌 30min左12文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯文檔來源為：從網絡收集整理,word版本可編輯.歡迎下載支持.3、