1、實驗標題實驗標題實驗目的實驗目的n掌握谷丙轉氨酶活性測定的掌握谷丙轉氨酶活性測定的n 原理和方法原理和方法l血清谷丙轉氨酶作用于由丙氨酸及血清谷丙轉氨酶作用于由丙氨酸及a a一酮戊一酮戊二酸組成的基質。產生丙酮酸及谷氨酸二酸組成的基質。產生丙酮酸及谷氨酸l血清加基液保溫后產生丙酮酸的多少，即血清加基液保溫后產生丙酮酸的多少，即反響出谷丙轉氨酶活性的大小。反響出谷丙轉氨酶活性的大小。l丙酮酸與丙酮酸與2 2，4-4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在酸性溶液中顯黃色，在堿二硝基苯腙，在酸性溶液中顯黃色，在堿性溶液中成醌型顯棕紅色。性溶液中成醌型顯棕紅色。實驗原理實驗原

2、理 本實驗是在堿性條件下，生成醌類化合物的量反本實驗是在堿性條件下，生成醌類化合物的量反響丙酮酸的量，即反響了谷丙轉氨酶的活性。響丙酮酸的量，即反響了谷丙轉氨酶的活性。 本法以本法以lml血清與基質液在血清與基質液在37，保溫，保溫30分鐘生分鐘生成成2.5g丙酮酸為谷丙轉氨酶活性丙酮酸為谷丙轉氨酶活性1單位單位 求酶活性單位的方法：求酶活性單位的方法： 1、規范品對照法：檢品與規范丙酮酸液同樣處、規范品對照法：檢品與規范丙酮酸液同樣處置呈色，進展比色，計算出酶活性單位。置呈色，進展比色，計算出酶活性單位。 2、規范曲線法：取含待測物的一系列規范溶、規范曲線法：取含待測物的一系列規范溶液，作規

3、范曲線，由規范曲線查得活性單位。液，作規范曲線，由規范曲線查得活性單位。一、規范品對照法一、規范品對照法 取試管取試管4支，標號，按下表加試劑：支，標號，按下表加試劑：實驗操作實驗操作56放置放置5分鐘。分鐘。 加加0.4N NaOH液液5.0ml漸漸參與約漸漸參與約1分鐘，邊加邊混勻。分鐘，邊加邊混勻。室溫放置室溫放置 30分鐘，分鐘，測測OD值，波長值，波長 520nm，用蒸餾水調零點。，用蒸餾水調零點。 計 算ODA-ODBODs-ODs= =X 待測樣品丙酮酸含量待測樣品丙酮酸含量50ug/ml 0.1 ml X= =ODA-ODBODs-ODs5 5SGPT單位單位=ODA-ODBO

4、Ds-ODs5 50.10.12.52.5=ODA-ODBODs-ODs2020二、規范曲線法二、規范曲線法 配制一系列不同濃度的規范丙酮酸液，并且各加配制一系列不同濃度的規范丙酮酸液，并且各加以適量的基質液，以適量的基質液，作成規范曲線。詳細做法如下表。作成規范曲線。詳細做法如下表。各管混勻，放各管混勻，放37水浴水浴5分鐘分鐘 加加0.4N NaOH液液5.0ml 漸漸參與約漸漸參與約1分鐘，邊加邊混勻分鐘，邊加邊混勻然后各加呈色試劑然后各加呈色試劑0.5ml，混勻，混勻56放置放置5分鐘。分鐘。室溫放置室溫放置 30分鐘分鐘測定測定OD值值, 波長波長 520nm，用蒸餾水調零點。，用蒸

5、餾水調零點。一規范對照法一規范對照法.原始數據記錄2、公式計算酶活性單位要求帶入數據，寫出結果、公式計算酶活性單位要求帶入數據，寫出結果二、規范曲線法二、規范曲線法.原始數據記錄原始數據記錄2、繪制規范曲線，要求規范作圖、繪制規范曲線，要求規范作圖3、經過方法一的、經過方法一的ODA-ODB，在規范曲線中，查得酶活性單位，在規范曲線中，查得酶活性單位實驗結果實驗結果本卷須知本卷須知n操作中加操作中加 0.4N NaOH0.4N NaOH液時，需以較慢速度液時，需以較慢速度參與，并且邊加邊搖勻加快時那么參與，并且邊加邊搖勻加快時那么a a一戊酮一戊酮二酸引起的發色加強。二酸引起的發色加強。n本實驗中各試劑加量都需求準確，并且要本實驗中各試劑加量都需求準確，并且要留意控制條件，保溫時間要嚴厲留意控制條件，保溫時間要嚴厲n本法測定本法測定S