1、1第八章第八章 體液蛋白質檢驗體液蛋白質檢驗 人人類白蛋白分子類白蛋白分子 2n本章內容概要：本章內容概要：第二節第二節 體液蛋白質測定體液蛋白質測定第一節第一節 概述概述31 1、掌握掌握血漿蛋白質的組成、功能及分類；個別血漿蛋白質（前血漿蛋白質的組成、功能及分類；個別血漿蛋白質（前白蛋白、白蛋白）的來源和生理功能；血清總蛋白和白蛋白的白蛋白、白蛋白）的來源和生理功能；血清總蛋白和白蛋白的測定方法和原理。測定方法和原理。2 2、熟悉熟悉急性時相反應蛋白的概念和種類；血清球蛋白和纖維蛋急性時相反應蛋白的概念和種類；血清球蛋白和纖維蛋白原的測定方法白原的測定方法3 3、了解了解其他蛋白質的來源和

2、生理功能；尿液蛋白和腦脊液蛋白其他蛋白質的來源和生理功能；尿液蛋白和腦脊液蛋白的檢測的檢測 。n本章教學要求：本章教學要求：4第一節第一節 概概 述述p機體蛋白質機體蛋白質：p體液蛋白質的檢測：體液蛋白質的檢測： 機體主要的機體主要的 生物大分子生物大分子含量：人體固體成分的含量：人體固體成分的45%種類：種類：10萬，萬，30005000種種/單細胞單細胞功能：生長，代謝、血凝、運動、免功能：生長，代謝、血凝、運動、免疫、信息傳遞等疫、信息傳遞等疾病發生疾病發生體液蛋白質體液蛋白質異常異常5要判斷異常要判斷異常首先要清楚正常的血漿蛋白質組成，功能及分類及特點首先要清楚正常的血漿蛋白質組成，功

3、能及分類及特點一、血漿蛋白質的組成、功能及分類一、血漿蛋白質的組成、功能及分類n組成：組成：種類：種類：1000種種 500種種 200種種含量：含量：g mg g來源：肝臟是蛋白質主要的加工廠來源：肝臟是蛋白質主要的加工廠6n功能：功能：營養作用，修補組織蛋白營養作用，修補組織蛋白;維持血漿膠體滲透壓：維持血漿膠體滲透壓：白蛋白維持白蛋白維持75%80%的血漿滲透壓；的血漿滲透壓；作為作為PH緩沖系統的一部分：緩沖系統的一部分：酸性或堿性蛋白質；酸性或堿性蛋白質；作為激素、維生素、脂類、代謝產物、離子、藥物等的載體；作為激素、維生素、脂類、代謝產物、離子、藥物等的載體；體液免疫防御系統：體液

4、免疫防御系統：作為免疫球蛋白與補體等免疫分子；作為免疫球蛋白與補體等免疫分子；催化作用：催化作用：酶的本質；酶的本質；代謝調控作用；代謝調控作用；作為底物，酶或中間產物抑制或激活組織蛋白酶；作為底物，酶或中間產物抑制或激活組織蛋白酶；參與凝血與纖維蛋白溶解；：參與凝血與纖維蛋白溶解；：除除因子外均可因子外均可7n分類：分類： 依據依據來源來源、分離方法分離方法和和生理功能生理功能來源來源肝生成：肝生成：絕大多數血漿蛋白質絕大多數血漿蛋白質其他組織細胞生成：其他組織細胞生成：免疫球蛋白免疫球蛋白和和蛋白類激素蛋白類激素8分離方法分離方法鹽析法：白蛋白鹽析法：白蛋白/球蛋白球蛋白（pH7.0半飽和

5、的硫酸銨溶液）半飽和的硫酸銨溶液）電泳法：電泳法：醋酸纖維素薄膜電泳：醋酸纖維素薄膜電泳：6種種瓊脂糖凝膠電泳：瓊脂糖凝膠電泳：13種種聚丙烯酰胺凝膠電泳：聚丙烯酰胺凝膠電泳：30種種SDS聚丙烯酰胺凝膠等電雙向電泳：聚丙烯酰胺凝膠等電雙向電泳：300種種分分辨辨率率增增高高-+纖維蛋白原纖維蛋白原醋酸纖維素薄膜醋酸纖維素薄膜9即時可用的蛋白質電泳標準即時可用的蛋白質電泳標準 10功能分類功能分類:11二、個別血漿蛋白質二、個別血漿蛋白質n結構：結構： MW=54000MW=54000，四個相同亞基構成的四聚體。，四個相同亞基構成的四聚體。n理化性質：理化性質：p p4.74.7，肝細胞合成，

6、肝細胞合成，半壽期半壽期12 12 小時小時。n測定方法：測定方法：免疫比濁法免疫比濁法免疫擴散技術免疫擴散技術。（一）前白蛋白（一）前白蛋白（PAPA）急性時相反應蛋白急性時相反應蛋白 12n功能：功能：營養指標，載體功能（甲狀腺素維生素）。營養指標，載體功能（甲狀腺素維生素）。n臨床意義臨床意義：敏感性高的指標；敏感性高的指標； 降低：營養不良，肝功不全，降低：營養不良，肝功不全， 急性炎癥，惡性腫瘤，急性炎癥，惡性腫瘤， 肝硬肝硬化及腎炎時。化及腎炎時。n參考值參考值： 200200400mg/L 400mg/L 。13n結構結構：585585個個aaaa殘基構成的單鏈多肽，殘基構成的單

7、鏈多肽， MW=66458MW=66458，含，含17個個二硫二硫鍵。鍵。n理化性質理化性質：pIpI=4=45.85.8，肝細胞合成但不儲存，半衰期為，肝細胞合成但不儲存，半衰期為15-19 15-19 天，占總蛋白的天，占總蛋白的40%40%60%60%，p p7.47.4時帶負電。時帶負電。n測定方法測定方法：色素結合法：色素結合法: :溴甲酚綠（溴甲酚綠（BCGBCG），溴甲酚紫（），溴甲酚紫（BCPBCP）, ,鹽析等。鹽析等。（二）白蛋白（二）白蛋白（ALBALB）急性時相反應蛋白急性時相反應蛋白 14n功能功能：營養作用，載體功能（高親和力），維持血漿滲透壓：營養作用，載體功能（

8、高親和力），維持血漿滲透壓和正常和正常p p值。值。n臨床意義臨床意義：合成受食物影響，敏感性較低。：合成受食物影響，敏感性較低。降低降低: :在營養不良，肝功不全，急慢性肝疾病時在營養不良，肝功不全，急慢性肝疾病時; ;增高增高: :少見少見, ,假性升高。假性升高。n參考值參考值：35-50 g/35-50 g/15n結構：結構：394394個個aaaa殘基構成的單鏈多肽，含殘基構成的單鏈多肽，含101012%12%的糖的糖MW=5.5 MW=5.5 萬。萬。n理化性質理化性質：pIpI值為值為4.84.8，占，占1-1-球蛋白區帶顯色的球蛋白區帶顯色的90。n測定方法：測定方法：免疫化學

9、法，電泳（酸性凝膠電泳或等電聚焦電免疫化學法，電泳（酸性凝膠電泳或等電聚焦電泳），利用蛋白酶抑制能力測定等。泳），利用蛋白酶抑制能力測定等。（三）（三）1-1-抗胰蛋白酶（抗胰蛋白酶（AATAAT）急性時相反應蛋白急性時相反應蛋白 16n功能功能：蛋白酶抑制物（具有：蛋白酶抑制物（具有9090的抑制蛋白酶活力）。如的抑制蛋白酶活力）。如糜蛋白酶，彈性蛋白酶，但此抑制作用有明顯的糜蛋白酶，彈性蛋白酶，但此抑制作用有明顯的p p依賴性。依賴性。n臨床意義：臨床意義：降低：血漿降低：血漿AATAAT僅見于胎兒呼吸迫綜合癥。僅見于胎兒呼吸迫綜合癥。升高：炎癥、術后，某些激素治療后。升高：炎癥、術后，某

10、些激素治療后。n參考值：參考值： 0.83 0.831.99g/L 1.99g/L 17n結構：結構：181181個個aaaa殘基構成的單鏈多肽，殘基構成的單鏈多肽， MW=4MW=4萬，萬，含含45%45%的糖，的糖，其中唾液酸占其中唾液酸占11%11%12%12%。n理化性質：理化性質：p pI I 值值2.72.73.53.5，肝合成，膿毒癥時粒細胞和單核，肝合成，膿毒癥時粒細胞和單核細胞及某些腫瘤組織也可合成。細胞及某些腫瘤組織也可合成。 位于位于1-1-球蛋白區帶。球蛋白區帶。n測定方法：測定方法：免疫化學法（擴散免疫化學法（擴散, ,濁度）濁度）, ,化學法（間接法），化學法（間接

11、法），ELISAELISA法等法等（四）（四）1-1-酸性糖蛋白（酸性糖蛋白（AAGAAG） 急性時相反應蛋白急性時相反應蛋白 18n功能：功能：與免疫防御功能有關，機制不詳；抑制血小板凝集與免疫防御功能有關，機制不詳；抑制血小板凝集影響膠原纖維形成；參與脂類運輸。影響膠原纖維形成；參與脂類運輸。n臨床意義：臨床意義：升高：急性炎癥，組織損傷，風濕，腫瘤，升高：急性炎癥，組織損傷，風濕，腫瘤，AMI AMI ，潰結時；，潰結時；降低：營養不良降低降低：營養不良降低, , 嚴重肝損傷和雌激素作用。嚴重肝損傷和雌激素作用。n參考值：參考值：.25.252.0g/L 2.0g/L 。19n結構：結構

12、：590590個個aaaa殘基構成的單鏈多肽，殘基構成的單鏈多肽， MW=6.5萬萬，含萬萬，含4%4%的糖。的糖。n理化性質理化性質：p pI I 值值.7.7- -.8.8，在白蛋白和，在白蛋白和1-1-球蛋白之間。球蛋白之間。胎兒肝卵黃囊合成，成人量微，升高由于腫瘤細胞合成。胎兒肝卵黃囊合成，成人量微，升高由于腫瘤細胞合成。n測定方法：測定方法：免疫化學法（擴散免疫化學法（擴散, ,火箭電泳）火箭電泳）,ELISA,ELISA等等（五）（五）甲胎蛋白甲胎蛋白(AFP)(AFP)20n功能：功能：胎兒血漿主要蛋白質，調節肝細胞生長和腦細胞發胎兒血漿主要蛋白質，調節肝細胞生長和腦細胞發育；抑

13、制細胞和體液的免疫反應；維持正常妊娠，防止母嬰育；抑制細胞和體液的免疫反應；維持正常妊娠，防止母嬰排斥。排斥。n臨床意義：臨床意義：胎兒產前監測（羊水或母血）胎兒產前監測（羊水或母血）增高：原發性肝癌患者診斷和鑒別（增高：原發性肝癌患者診斷和鑒別（80%80%原發增高），原發增高）， 其他其他癌癥也可見增高。癌癥也可見增高。n參考值：參考值：20-100g/L(20-100g/L(成人成人) ) 5g/L( 5g/L(新生兒新生兒) ) 21n結構：結構： 兩對肽鏈兩對肽鏈形成四聚體，有變異體。形成四聚體，有變異體。n理化性質：理化性質：肝合成，肝合成， p pI I 值值為為4.14.1，電

14、泳位，電泳位a2 -a2 -球蛋白區帶球蛋白區帶n測定方法：測定方法：電泳法，免疫化學法（擴散電泳法，免疫化學法（擴散, ,濁度）濁度）, ,化學法等化學法等（六）（六）結合珠蛋白結合珠蛋白(Hp(Hp) ) 急性時相反應蛋白急性時相反應蛋白 22n功能：功能：與紅細胞中釋出自由與紅細胞中釋出自由HbHb 結合結合, ,防止防止HbHb 從尿中丟失保存從尿中丟失保存鐵鐵, , 急性溶血后一周再生恢復。急性溶血后一周再生恢復。高效的過氧化物酶。高效的過氧化物酶。需鐵細菌的天然抑菌劑。需鐵細菌的天然抑菌劑。n臨床意義：臨床意義：升高：急性時相反應；升高：急性時相反應；降低：血管內溶血時；雌激素作用

15、。降低：血管內溶血時；雌激素作用。n參考值參考值：0.5-2.2 g/L0.5-2.2 g/L23n結構：結構： MW=62MW=6280 80 萬萬, ,分子量最大，由四個相同的亞基組分子量最大，由四個相同的亞基組成，含糖量約。成，含糖量約。n理化性質：理化性質：肝細胞與單核吞噬細胞系統中合成，半壽期肝細胞與單核吞噬細胞系統中合成，半壽期5 5 天。天。n測定方法：測定方法：免疫化學等免疫化學等（七）（七）2-2-巨球蛋白巨球蛋白(AMG) (AMG) 24n功能：功能：與多種分子和離子結合，影響蛋白水解酶活性（主要與多種分子和離子結合，影響蛋白水解酶活性（主要的蛋白酶抑制劑具有選擇性保護某

16、些酶的作用）。的蛋白酶抑制劑具有選擇性保護某些酶的作用）。n臨床意義臨床意義：嬰幼兒及兒童比成人高；：嬰幼兒及兒童比成人高；升高：雌激素，低蛋白血癥可使其含量升高；升高：雌激素，低蛋白血癥可使其含量升高；降低：胰腺炎及前列腺癌時。降低：胰腺炎及前列腺癌時。n參考值：參考值：1.31-2.93g/L1.31-2.93g/L25n結構：結構： MW=12-16 MW=12-16 萬萬, 1046, 1046個個aaaa殘基構成的單鏈多肽，含殘基構成的單鏈多肽，含糖約，每分子銅藍蛋白可結合個銅原子。糖約，每分子銅藍蛋白可結合個銅原子。n理化性質理化性質：肝合成：肝合成, ,巨噬細胞和淋巴細胞合成少量

17、；巨噬細胞和淋巴細胞合成少量；p pI I 值值為為4.44.4， 具遺傳基因多態性具遺傳基因多態性。n測定方法測定方法：免疫化學（擴散或比濁）等：免疫化學（擴散或比濁）等（八）（八）銅藍蛋白銅藍蛋白(CER) (CER) 急性時相反應蛋白急性時相反應蛋白 26n功能：功能：具氧化酶活性且起抗氧化劑作用，銅的無毒代謝庫具氧化酶活性且起抗氧化劑作用，銅的無毒代謝庫n臨床意義：臨床意義：增加增加感染感染, ,創傷創傷, ,腫瘤腫瘤; ; 降低降低-營養不良，嚴重肝病及腎綜營養不良，嚴重肝病及腎綜; ;協助診斷協助診斷Wilson Wilson 病病n參考值：參考值：0.21-0.53g/L0.21

18、-0.53g/L27n結構結構： MW=7.7 MW=7.7 萬萬, ,單鏈糖蛋白，含糖約。單鏈糖蛋白，含糖約。n理化性質：理化性質：肝細胞合成，肝細胞合成， p pI I 值值為為5.5-5.9,5.5-5.9,半壽期半壽期7 7 天，可天，可逆結合多價離子如逆結合多價離子如Fe,Cu,Zn,CoFe,Cu,Zn,Co 等，一分子等，一分子TRF TRF 可結合兩個三可結合兩個三價鐵。價鐵。n測定方法：測定方法：免疫擴散法，放免法和免疫比濁法等。免疫擴散法，放免法和免疫比濁法等。（九）（九）轉鐵蛋白轉鐵蛋白(TRF) (TRF) 急性時相反應蛋白急性時相反應蛋白 28n功能：功能：運輸鐵。運

19、輸鐵。n臨床意義：臨床意義：血血TRF TRF 濃度受鐵供應調節，缺鐵濃度受鐵供應調節，缺鐵TRF TRF 升，鐵治升，鐵治療后恢復。可用于療后恢復。可用于貧血的診斷和對治療的監測貧血的診斷和對治療的監測。降低降低: :急性時相反應、慢性肝病、營養不良及蛋白丟失時；急性時相反應、慢性肝病、營養不良及蛋白丟失時；升高：妊娠或雌激素會使其降低升高：妊娠或雌激素會使其降低; ;缺鐵性低色素貧血。缺鐵性低色素貧血。n參考值：參考值： 2.5-4.3 g/L (2.5-4.3 g/L (成人成人) ) 1.30-2.75 g/L (1.30-2.75 g/L (新新生兒生兒) )29n結構：結構： MW

20、=11800MW=11800， 100100個個aaaa殘基構成的單鏈多肽，分子中含殘基構成的單鏈多肽，分子中含一對二硫鍵，不含糖。一對二硫鍵，不含糖。n理化性質：理化性質： p pI I 值值為為5.75.7，淋巴細胞合成，存在細胞表面，特，淋巴細胞合成，存在細胞表面，特別是淋巴和腫瘤細胞。釋放入血循環。半衰期別是淋巴和腫瘤細胞。釋放入血循環。半衰期107 107 分鐘，幾乎分鐘，幾乎由腎小管回收。由腎小管回收。n測定方法：測定方法：放射免疫化學等。放射免疫化學等。（十）（十）2 2 微球蛋白微球蛋白(BMG) (BMG) 30n功能：功能：分子量小，可自由通過腎小球濾過膜，在腎小管分子量小

21、，可自由通過腎小球濾過膜，在腎小管幾乎全部重吸收，可監測腎小管功能；是幾乎全部重吸收，可監測腎小管功能；是HLAHLA鏈的輕鏈鏈的輕鏈部分。部分。 n臨床意義：臨床意義：增高：腎功能衰竭，炎癥及腫瘤時。增高：腎功能衰竭，炎癥及腫瘤時。n參考值：參考值：1.0 1.0 2.5 mg/L 2.5 mg/L （血漿）（血漿） 31n結構：結構： MW11.5-14 MW11.5-14 萬萬，分子含個相同的亞基，亞基間靠，分子含個相同的亞基，亞基間靠非共價鍵連接成圓盤狀多聚體。非共價鍵連接成圓盤狀多聚體。n理化性質：理化性質：肝合成，肝合成， p pI I 值值為為6.26.2，電泳位于，電泳位于 r

22、 r 區帶區帶。n測定方法：測定方法：半定量沉淀法（早），免疫化學法。半定量沉淀法（早），免疫化學法。（十一）（十一）C-C-反應蛋白質反應蛋白質(CRP) (CRP) 急性時相反應蛋白急性時相反應蛋白 32n功能：功能：結合多糖，磷脂和核酸；激活補體，抗凝。結合多糖，磷脂和核酸；激活補體，抗凝。n臨床意義：臨床意義：第一個認定的急性時相反應蛋白第一個認定的急性時相反應蛋白, ,是急性時相是急性時相反應的一個敏感指標，在、創傷、感染、外科手術反應的一個敏感指標，在、創傷、感染、外科手術時含量迅速升高，達到正常的時含量迅速升高，達到正常的2000倍。倍。n參考值：參考值： 8.0mg/L 8.0

23、mg/L （血漿）（血漿） 33三、疾病時的血漿蛋白質三、疾病時的血漿蛋白質n急性時相反應蛋白：急性時相反應蛋白：在急性炎癥或某些組織損傷時，有些在急性炎癥或某些組織損傷時，有些血漿蛋白質含量會增高，有些會降低，這種現象稱為血漿蛋白質含量會增高，有些會降低，這種現象稱為急性時急性時相反應相反應。而這些血漿蛋白質被稱為。而這些血漿蛋白質被稱為急性時相反應蛋白急性時相反應蛋白。（一）炎癥、創傷（一）炎癥、創傷 前述除了甲胎蛋白、前述除了甲胎蛋白、2 2 微球蛋白微球蛋白和和 2 2- -巨球蛋白巨球蛋白以外再加上纖維蛋白原的九種蛋白質以外再加上纖維蛋白原的九種蛋白質34n急性時相反應蛋白分類：急性

24、時相反應蛋白分類：升高：升高：其他種蛋白質。其他種蛋白質。降低：降低：前白蛋白、白蛋白、轉鐵蛋白前白蛋白、白蛋白、轉鐵蛋白35n急性時相反應機制：急性時相反應機制： 當機體受到損傷或炎癥時釋放小分子蛋白質導致肝細胞當機體受到損傷或炎癥時釋放小分子蛋白質導致肝細胞中上述蛋白質的合成增加或減少。中上述蛋白質的合成增加或減少。n急性時相反應的應用：急性時相反應的應用： 急性時相反應時急性時相反應時, ,血漿蛋白質的變化和創傷的時間進程有血漿蛋白質的變化和創傷的時間進程有關，可用于鑒別急性、亞急性和慢性病理狀態。關，可用于鑒別急性、亞急性和慢性病理狀態。3637（二）（二）肝臟肝臟疾病：疾病：（三）（

25、三）腎臟腎臟疾病：疾病：腎病早期腎病早期嚴重腎臟嚴重腎臟選擇性蛋白質丟失選擇性蛋白質丟失非選擇性蛋白質丟失非選擇性蛋白質丟失（四）（四）風濕風濕病：病：免疫球蛋白，免疫球蛋白，1 1- -酸性糖蛋白，結合珠蛋白及酸性糖蛋白，結合珠蛋白及升高升高（五）（五）遺傳性遺傳性缺陷：缺陷：多由于編碼相應蛋白質的基因發生突變或缺失。多由于編碼相應蛋白質的基因發生突變或缺失。非典型的急性時相反應，非典型的急性時相反應，急性肝炎急性肝炎慢性肝硬化慢性肝硬化 見表見表8-38-33839第二節第二節 體液蛋白質測定體液蛋白質測定總蛋白測定總蛋白測定個別個別蛋白質的測定蛋白質的測定蛋白分離測定技術蛋白分離測定技術

26、p發展趨勢發展趨勢: :p測定體液標本測定體液標本: :血漿血漿：普遍：普遍尿液，腦脊液和胸腹水等尿液，腦脊液和胸腹水等：有選擇性的組織病變檢查：有選擇性的組織病變檢查40免疫化學法特異定量個別蛋白質免疫化學法特異定量個別蛋白質p體液蛋白質的測定方法概括：體液蛋白質的測定方法概括：常規：免疫濁度法、免疫擴散法，免疫電泳法，常規：免疫濁度法、免疫擴散法，免疫電泳法，微量：放射免疫測定（微量：放射免疫測定（RIARIA），酶免疫測定法（），酶免疫測定法（ELA/ELISAELA/ELISA）41電泳測定：電泳測定：定量化學測定定量化學測定TPr，Alb電泳電泳 組成圖譜組成圖譜 半定量半定量 定量

27、定量染料結合法，染料結合法，UVUV法，折光法等法，折光法等42一、血清總蛋白測定n假設：假設：、 純多肽鏈，含氮量平均為純多肽鏈，含氮量平均為16 % 16 % 、各種蛋白質與化學試劑反應性一致，僅為相對定量、各種蛋白質與化學試劑反應性一致，僅為相對定量43n測定依據：蛋白質測定一般利用蛋白質以下的結構或性質測定依據：蛋白質測定一般利用蛋白質以下的結構或性質1 1、元素組成測定：、元素組成測定：含含N N穩定；穩定；2 2、重復的肽鏈結構：、重復的肽鏈結構：具有多個肽鍵；具有多個肽鍵；3 3、酪氨酸和色氨酸與、酪氨酸和色氨酸與FolinFolin- -酚試劑反應酚試劑反應顯色顯色或或UV U

28、V 吸收；吸收；4 4、與色素結合的能力：、與色素結合的能力：與染料以離子鍵或共價鍵連接；與染料以離子鍵或共價鍵連接；5 5、沉淀后借濁度測定：、沉淀后借濁度測定：光度計測定；光度計測定；6 6、光折射測定：、光折射測定：折射儀測定。折射儀測定。44n方法方法：1.1.凱氏定氮法參考方法凱氏定氮法參考方法2.2.雙縮脲法雙縮脲法( ( 推薦推薦) ) 3.3.酚試劑法酚試劑法4.4.散射比濁法散射比濁法5.5.染料結合法染料結合法6. UV 6. UV 法法. .折光測定法折光測定法451.凱氏定氮法參考標準方法凱氏定氮法參考標準方法(0.05mg N 0.3g pro)消化消化用濃硫酸將蛋白

29、質消化為硫酸銨；（耗時）用濃硫酸將蛋白質消化為硫酸銨；（耗時） 蒸餾蒸餾用堿性溶液堿化消化液并蒸餾揮發；用堿性溶液堿化消化液并蒸餾揮發； 吸收吸收用酸性溶液（硼酸）吸收氣態氨（使用酸性溶液（硼酸）吸收氣態氨（使HH+ + ）滴定滴定用已標定的無機酸滴用已標定的無機酸滴（使（使H+ 恢復），恢復），計算總氮量計算總氮量定蛋白定蛋白（總氮量總氮量- -非蛋白氮）非蛋白氮）6.25=6.25=蛋白含量蛋白含量納氏試劑：碘化汞和碘化鉀的堿性溶液與氨反應生成淡黃棕色膠態化合物，其色度與氨氮含納氏試劑：碘化汞和碘化鉀的堿性溶液與氨反應生成淡黃棕色膠態化合物，其色度與氨氮含 量成正比。量成正比。 n原理：原

30、理：46n評價：評價：優點：準確度高，精密度優點：準確度高，精密度高，靈敏度高，是公認的參高，靈敏度高，是公認的參考方法。考方法。缺點：操作復雜，費時，缺點：操作復雜，費時，不適合常規檢測，血清各蛋不適合常規檢測，血清各蛋白含氮量會有所變化尤其是白含氮量會有所變化尤其是疾病時。疾病時。 n應用：應用：標準蛋白的標定標準蛋白的標定及校正其它常規方法及校正其它常規方法472.雙縮脲法雙縮脲法n原理：原理： 蛋白質中的肽鍵蛋白質中的肽鍵（-CONH-CONH-）在在堿性堿性溶液中能與溶液中能與Cu2+作用而產生作用而產生紫紅色絡合物紫紅色絡合物，其顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比，而與蛋白質的分子量及

31、氨基酸成分無關。其顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比，而與蛋白質的分子量及氨基酸成分無關。條件：至少含兩個肽鍵（條件：至少含兩個肽鍵（-CONH-CONH-）基團才能和）基團才能和CuCu2+2+形成絡合物形成絡合物, ,氨基酸及二肽無反氨基酸及二肽無反 應應, ,三肽以上才能反應。三肽以上才能反應。 雙縮脲生成 加熱加熱NH322H180022222N 端端C 端端48n評價：評價：優點：簡便，準確，重復性好，優點：簡便，準確，重復性好，10g-120g/L10g-120g/L線性好，線性好，特異性與精密度好，批內特異性與精密度好，批內CV%CV%2%2%，顯色穩定。，顯色穩定。缺點：靈敏度較差

32、，對蛋白質含量低的體液標本不適缺點：靈敏度較差，對蛋白質含量低的體液標本不適合。合。 n應用：應用：常規推薦方法。手工或上機使用。常規推薦方法。手工或上機使用。493.3.酚試劑法酚試劑法n原理：原理： 蛋白質分子中的蛋白質分子中的酪氨酸殘基酪氨酸殘基和和色氨酸殘基色氨酸殘基能夠和能夠和酚試劑酚試劑中的中的磷鎢酸磷鎢酸- -磷鉬酸磷鉬酸反應生成藍色化合物，反應生成藍色化合物， LowryLowry改良法：改良法：在酚試劑中加入在酚試劑中加入CuCu2+2+（75%75%呈色），提高了呈色），提高了呈色的靈敏度，為呈色的靈敏度，為雙縮脲法的雙縮脲法的100100倍左右。倍左右。50n評價及應用：

33、評價及應用：優點：操作簡單，改良法靈敏度高（優點：操作簡單，改良法靈敏度高（10g-6010g-60g），適合，適合測定蛋白含量少的標本。測定蛋白含量少的標本。缺點：各種蛋白質缺點：各種蛋白質酪氨酸酪氨酸和和色氨酸色氨酸比例不同，只適合測定比例不同，只適合測定單一蛋白質。受一些藥物干擾。單一蛋白質。受一些藥物干擾。 514.4.比濁法比濁法n原理：原理： n評價及應用：評價及應用：優點：簡便不需特殊儀器。優點：簡便不需特殊儀器。缺點：濁度形成的干擾因素多（加試劑方法，反應溫度，蛋缺點：濁度形成的干擾因素多（加試劑方法，反應溫度，蛋白絮狀沉淀等）白絮狀沉淀等） 某些酸類（磺基水楊酸等）和血清蛋白

34、質結合產生沉淀，某些酸類（磺基水楊酸等）和血清蛋白質結合產生沉淀，測其濁度，與標準對比，可求蛋白含量。測其濁度，與標準對比，可求蛋白含量。525.5.染料結合法染料結合法 在酸性環境下，帶正電的蛋白質（在酸性環境下，帶正電的蛋白質（-NH3+)與染料的陰離子與染料的陰離子產生顏色反應，使染料的吸收峰改變，可既而用分光光度法產生顏色反應，使染料的吸收峰改變，可既而用分光光度法比色測定。比色測定。n原理：原理：常用染料：常用染料：氨基黑，考馬斯亮藍等氨基黑，考馬斯亮藍等n評價及應用：評價及應用：優點：操作簡便，重復性好，靈敏度高，且干擾因素少。優點：操作簡便，重復性好，靈敏度高，且干擾因素少。缺點

35、：特異性不高；不同蛋白質和染料的結合力不一致，標準物不易缺點：特異性不高；不同蛋白質和染料的結合力不一致，標準物不易確定。確定。 536.6.紫外分光光度法紫外分光光度法 蛋白質分子中的蛋白質分子中的酪氨酸酪氨酸和和色氨酸等芳香族氨基酸可使蛋色氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白質溶液在白質溶液在280nm280nm處有一吸收峰處有一吸收峰。可用于測定蛋白質但需避可用于測定蛋白質但需避免核酸干擾。免核酸干擾。 （1 1）Lowry-Lowry-KalckerKalcker 公式公式 蛋白質濃度（蛋白質濃度（mg/mlmg/ml）=1.45 A =1.45 A 280280 - 0.74 A - 0.74

36、 A 260260 （2 2）Warburg-Christian Warburg-Christian 公式公式 蛋白質濃度（蛋白質濃度（mg/mlmg/ml）=1.55 A =1.55 A 280280 - 0.76 A - 0.76 A 260260 n原理：原理：54n評價及應用：評價及應用：優點：敏感而簡便，可優點：敏感而簡便，可保留蛋白生物活性保留蛋白生物活性，常用與較純的酶，常用與較純的酶和免疫球蛋白。需和免疫球蛋白。需紫外分光光度計及石英比色皿。紫外分光光度計及石英比色皿。缺點：各種蛋白質中芳香族氨基酸含量和比例不同；在缺點：各種蛋白質中芳香族氨基酸含量和比例不同；在280nm28

37、0nm測定易受游離色測定易受游離色aaaa和酪和酪aaaa以及尿酸和膽紅素的干擾；導以及尿酸和膽紅素的干擾；導致準確性和特異性受影響。致準確性和特異性受影響。措施：在措施：在220-225nm220-225nm波長區域，用波長區域，用0.15mol/l0.15mol/l的的NaClNaCl稀釋稀釋1000-20001000-2000倍可消除干擾。倍可消除干擾。557.7.折光測定法折光測定法 溶解在溶液中的固體可增加溶液的光折射率，在固定溶解在溶液中的固體可增加溶液的光折射率，在固定波長和溫度下，光折射率和血清中蛋白質含量成正比。波長和溫度下，光折射率和血清中蛋白質含量成正比。n原理：原理：n

38、評價及應用：評價及應用：優點：簡便、快速，易掌握，重復性較好，適合臨床急診，體檢篩查優點：簡便、快速，易掌握，重復性較好，適合臨床急診，體檢篩查和胸腹水蛋白質測定。和胸腹水蛋白質測定。缺點：準確性較差，易受高血脂癥，高膽紅素血癥以及溶血等因素影缺點：準確性較差，易受高血脂癥，高膽紅素血癥以及溶血等因素影響，會由于響，會由于A/GA/G比值變化而產生誤差。比值變化而產生誤差。 56p參考范圍：成人參考范圍：成人606080g/L80g/Lp臨床意義：臨床意義：總蛋白升高：總蛋白升高：總蛋白降低總蛋白降低：丟失過多丟失過多 消耗增加消耗增加 白蛋白合成減少白蛋白合成減少 水腫水腫真性升高：真性升高

39、：MMMM、巨球蛋白血癥、自身免疫性疾病等、巨球蛋白血癥、自身免疫性疾病等假性升高：機體明顯失水，總蛋白含量相對升高，假性升高：機體明顯失水，總蛋白含量相對升高，A/GA/G幾乎不變幾乎不變57二、血清白蛋白測定p方法方法：1.1.染料結合法染料結合法( ( 推薦推薦) ) 2.2.鹽析法鹽析法3.3.電泳法電泳法4.4.免疫化學法免疫化學法581.1.染料結合法染料結合法( ( 推薦推薦) )n原理原理: : 血清血清ALBALB可通過可通過離子鍵或疏水鍵離子鍵或疏水鍵與包括與包括染料染料在內的各種在內的各種有機離子結合有機離子結合, ,而而GLBGLB很少結合外源性染料很少結合外源性染料,

40、 ,可在可在不分離不分離ALBALB與與GLBGLB的情況下直接測定的情況下直接測定ALBALB。染料染料BCGBCGBCPBCP優點優點 缺點缺點 易于和非人源性白蛋白結合易于和非人源性白蛋白結合 與白蛋白結合特異性較差與白蛋白結合特異性較差 與與非人源性白蛋白結合力弱非人源性白蛋白結合力弱 與白蛋白結合特異性好與白蛋白結合特異性好 在在3030秒內測可提高特異性秒內測可提高特異性59n應用及評價應用及評價: : 嚴格控制反應時間的嚴格控制反應時間的BCGBCG法法既適合既適合手工手工也適合也適合自動自動化分析。化分析。臨床上推薦使用臨床上推薦使用。60n原理原理: : 鹽析是由于加入大量的

41、中性鹽破壞了蛋白質的鹽析是由于加入大量的中性鹽破壞了蛋白質的水化膜、水化膜、中和其所帶的中和其所帶的電電荷荷從而使蛋白質分子聚集而從而使蛋白質分子聚集而沉淀沉淀析出。析出。 各種蛋白質的各種蛋白質的親水性親水性和和帶電荷不同帶電荷不同，故鹽析時所需，故鹽析時所需鹽濃度與鹽濃度與pHpH不同。不同。GLBGLB在生理在生理pHpH下帶電荷及水化膜比下帶電荷及水化膜比ALBALB少少，可被較低濃度中性鹽沉淀。，可被較低濃度中性鹽沉淀。2.2.鹽析法鹽析法中性鹽：中性鹽：硫酸銨、硫酸鈉等硫酸銨、硫酸鈉等61n應及評價應及評價: :操作繁瑣，操作繁瑣，不宜自動化，基本不用不宜自動化，基本不用623.3

42、.電泳法電泳法n操作：操作：醋纖膜電泳醋纖膜電泳染色染色晾干晾干透明透明光密度儀掃描光密度儀掃描洗脫洗脫比色比色染色染色分離分離測得蛋白組分百分比測得蛋白組分百分比計算得出各種蛋白質含量計算得出各種蛋白質含量半定量半定量定量定量63n評價及應用：評價及應用：優點優點：電泳特異性好，可了解血清蛋白質全貌：電泳特異性好，可了解血清蛋白質全貌缺點缺點：電泳技術繁瑣，不易自動化；白蛋白與染料：電泳技術繁瑣，不易自動化；白蛋白與染料親和力高會導致結果偏高親和力高會導致結果偏高644.4.免疫化學法免疫化學法n原理及特點原理及特點:n應用：應用：特異性高特異性高,但成本較高但成本較高,費時費時,生化檢驗用

43、的不多生化檢驗用的不多.65p參考范圍參考范圍: :成人成人353555g/L.55g/L.p臨床意義：臨床意義：白蛋白升高：白蛋白升高：白蛋白降低：白蛋白降低：丟失過多丟失過多 消耗增加消耗增加 白蛋白合成減少白蛋白合成減少 水腫水腫 先天性先天性ALBALB缺乏病缺乏病真性升高：未見真性升高：未見假性升高：機體明顯失水，或治療輸入過多白蛋白假性升高：機體明顯失水，或治療輸入過多白蛋白66三、血清球蛋白測定三、血清球蛋白測定p方法方法：間接法間接法: :TP-ALB=GLBTP-ALB=GLB直接法直接法: :乙醛酸比色法乙醛酸比色法(GLB(GLB中的色氨酸遠大于中的色氨酸遠大于ALBAL

44、B中的色氨酸含量中的色氨酸含量) )色氨酸色氨酸+ +乙醛酸乙醛酸 紫色化合物紫色化合物H H+ +Hopkins-ColeHopkins-Cole反應反應: :p參考范圍參考范圍: : 成人成人202030g/L.30g/L. A/G A/G：1.51.52.52.567p臨床意義：臨床意義：球蛋白升高球蛋白升高：球蛋白降低球蛋白降低：合成減少、低或無合成減少、低或無-球蛋白血癥球蛋白血癥 真性升高（常見）：自身免疫性疾病、感染反真性升高（常見）：自身免疫性疾病、感染反應、應、MMMM、巨球蛋白血癥。、巨球蛋白血癥。假性升高（少見）：機體明顯失水。假性升高（少見）：機體明顯失水。68四、血漿

45、纖維蛋白原測定p血漿纖維蛋白原：血漿纖維蛋白原：結構特點：凝血因子結構特點：凝血因子，肝合成，肝合成，MW=3.4萬，大分子糖蛋白，萬，大分子糖蛋白，pI5.3，222功能特點：參與凝血功能特點：參與凝血血凝過程中的作用血凝過程中的作用：纖維蛋白原纖維蛋白原纖維蛋白網纖維蛋白網血凝塊血凝塊纖維蛋白細絲纖維蛋白細絲血液凝塊構造（紅色為紅血球，蘭色為血小板，黃色為纖維蛋白）血液凝塊構造（紅色為紅血球，蘭色為血小板，黃色為纖維蛋白）69p測定方法及特點：測定方法及特點：1.1.纖維蛋白原凝塊測定法：纖維蛋白原凝塊測定法：凝血酶凝血酶或鈣離子或鈣離子原理原理：纖維蛋白原纖維蛋白原 不溶的纖維蛋白凝塊不溶的纖維蛋白凝塊 含有含有Na