1、有關基因工程中的酶切問題、單選題:1已知某種限制性內切酶在一線性DNA分子上有3個酶切位點，如圖中箭頭所指，如果該線性DNA分子在3個酶切位點上都被該酶切斷，則會產生a、b、c、d四種不同長度的DNA片段。現在多個上述線性DNA分子， 若在每個DNA分子上至少有1個酶切位點被該酶切斷，則 從理論上講，經該酶切后，這些線性DNA分子最多能產生長度不同的DNA片段種類數是A. 3 B.4 C.9D.122.現有一長度為1000堿基對（bp）的DNA分子，用限制性核酸內切酶lOOObp,用Kpnl單獨酶切得到4OObp和600bp兩種長度的DNA分子,bp和600 bp兩種長度的DNA分子。該DNA

2、分子的酶切圖譜正確的是的3.現有一長度為3000堿基對（bp）的線性DNA分子，用限制性核酸內切酶酶切后，進行凝膠電泳，使降解哉性DNA分子的#（切示盤甩EcoRI酶切后得到的DNA分子仍是用EcoRI、Kpnl同時酶切后得到200民oRIKp/il Kpnii石00I 200 | 200coRIKpnlKp/i1 600 | 200 | 2001EcoRI600產物分開。用酶H單獨酶切，結果如圖1;用酶B單獨酶切，結果如圖如圖3。該DNA分子的結構及其酶切圖譜是（）2000bplOOObp2000bp600bp4D0bp1400b?600bp40Obp辛耳 4.DD 6001400601)1

3、2;用酶H和酶B同時酶切，結果6J0400 600400B 0；40。60014Q0 BOD4.在DNA測DNA上定位，使其成為DNA分子中的物理參照點。這項工作叫做“限制酶圖譜的構建”。假設有以下一項實驗：用限制酶Hi ndin,BamH和二者的混合4kb（1kb即1千個堿基對）大小的線性電泳，在電場的作用下，降解產物分開，如右圖所示。據此分析，這兩種限制性內切核酸酶在該DNA分子上的限制位點數目是以下哪一組？A. Hi ndn1個，BamH2個B.Hi ndn2個，BamHt 3個C. Hi ndn2個，BamH1個D.Hi ndn和BamHt各有2個MndmHlndmBdMlIHBJII

4、IHI2 J kb1 Skh1,kb1Jkb1.0kO.Skb0.9 kb0.3kb、填空題:400 500 001400DNA分子，降解產物分別進行凝膠請根據以上圖表回答下列問題。(1)在采用常規PCR方法擴增目的基因的過程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物體內的DNA聚合酶,其最主要的特點是_。(2)PCR過程中退火(復性)溫度必須根據引物的堿基數量和種類來設定。表1為根據模板設計的兩對引1.圖為某種質粒表到載體簡圖， 小箭頭所指分別為限制性內切酶EcoRI、BamHI的酶切位點，ampR為青霉素抗性基因，tctR為四環素抗性基因，P啟動子，T為終止子，ori為復制原點。已知目的基因的兩

5、端分別有包括EcoRI、BamHI在內的多種酶的酶切位點。據圖回答：(1)將含有目的基因的DNA與質粒該表達載體分別用EcoRI酶切，酶切產物用DNA連接酶進行連接后，其中由兩個DNA片段之間連接形成的產物有_、_、_三種。若要從這些連接產物中分(2)用上述3種連接產物與無任何抗藥性的原核宿主細胞進行轉化實驗。之后將這些宿主細胞接種到含四環素的培養基中，能生長的原核宿主細胞所含有的連接產物是；若接種到含青霉素的培養基中能生長的原核宿主細胞所含有的連接產物是 _(3)目的基因表達時，_RNA聚合酶識別和結合的位點是,其合成的產物是 _.(4) 在上述實驗中，為了防止目的基因和基因和質粒表達載體在

6、酶切后產生的末端發生任意連接，酶切2.(8分)將動物致病菌的抗原基因導入馬鈴薯制成植物疫苗，飼喂轉基因馬鈴薯可使動物獲得免疫力。 以下是與植物疫苗制備過程相關的圖和表。含右抗甌卑兇 的染色休DMAPCRDNAKirTm 11 nij mnni rnmiTiriwI rnwDNA亠模叔引物對A .P A ACTGAA ATGTA GCTAPC P2 TTAACTCC AT IA CTCTA G弓1物對B51GTC C G A CT AGTGG CTG PG52ACCTGGCGITTAGCCTCC表2兒種職制酶識別序列及切割位點衣限制酹ALu IIPsi rSnm IAG I CTG；AATTCC

7、TGCA；GCCC；GGG切割位點TC T GACTTAA T GG T ACGTCGGG f CCCJtcnKlHarnHl1 Mijj Aiu ,圖1赭華固操作濾程圖細iA引鉤時表1引物對序列衷圖2引物對與換板結合厲意圖物序列，圖2為引物對與模板結合示意圖。請判斷哪一對引物可采用較高的退火溫度？_ 。(3)圖1步驟所用的DNA1接酶對所連接的DNA兩端堿基序列是否有專一性要求？_。(4)為將外源基因轉入馬鈴薯，圖1步驟轉基因所用的細菌_B通常為。(5)對符合設計要求的重組質粒T進行酶切，。假設所用的酶均可將識別位點完全切開，請根據圖1中標示的酶切位點和表2所列的識別序列，對以下酶切結果作出

8、判斷。1采用EcoRI和PstI酶切，得到 _種DNA片斷。2采用EcoRI和SmI酶切，得到_ 種DNA片斷。3.(09江蘇卷)(7分)蘇云金桿菌(Bt)能產生具有殺蟲能力的毒素蛋白。下圖是轉Bt毒素蛋白基因植物的培育過程示意圖(ampr為抗氨芐青霉素基因)，據圖回答下列問題。(1)_ 將圖中的DNA用Hind川、BamH完全酶切后，反應管中有 _ 種DNA片段。3種限制性核酸內切悔識別序列與酶切位點(2)_ 圖中表示Hind川與BamHt酶切、DNA連接酶連接的過程，此過程可獲得 _ 種重組質粒；如果換用Bst l與BamH酶切，目的基因與質粒連接后可獲得 _ 種重組質粒。HAidlll:

9、 AAGCTTTTCGAABaraH I: GGATCCCCTAGGBst I: GGATCCCCIAGGHind RE皿嚴Ba mH II Hind IDNA連接廉rBSJTIHIBaraH IBamH I閔I日沁山 砂J植物DNA毎索蛋口 蘇云金桿菌(3)_目的基因插入質粒后，不能影響質粒的。(4)圖中的Ti質粒調控合成的vir蛋白，可以協助帶有目的基因的TDNA導人植物細胞，并防止植物細胞中 _ 對TDNA的降解。(5)已知轉基因植物中毒素蛋白只結合某些昆蟲腸上皮細胞表面的特異受體，使細胞膜穿孔，腸細胞裂解，昆蟲死亡。而該毒素蛋白對人類的風險相對較小，原因是人類腸上皮細胞 _(6)生產上

10、常將上述轉基因作物與非轉基因作物混合播種，其目的是降低害蟲種群中的_ 基因頻率的增長速率。4.(09福建卷)(10分)轉基因抗病香蕉的培育過程如圖所示。質粒上有PstI、Smal、EcoRI、ApaI等四種限制酶切割位點。請回答：(1) 構建含抗病基因的表達載體A時，應 選用限制酶_:對_進行切割。(2) 培養板中的卡那霉素會抑制香蕉愈傷組織細胞的生長， 欲利用該培養篩選已導入抗病基因的香蕉細胞，應使基因表達載體A中含有_作為標記基因。(3)_ 香蕉組織細胞具有， 因此， 可以利用組織培養技術將導入抗病基因的香蕉組織細胞培育成植株。圖中、依次表示組織培養過程中香蕉組織細胞的_。5.(18分)(

11、1)限制性內切酶I的識別序列和切點是一&GATC限制性內切酶H的識別序列和切點是GATC-。在質粒上有酶I的一個切點，在目的基因的兩側各有1個酶n的切點。1請畫出質粒被限制酶I切割后所形成的黏性末端。2請畫出目的基因兩側被限制酶n切割后所形成的黏性末端。3在DNA連接酶的作用下，上述兩種不同限制酶切割后形成的黏性末端能否連接起來？為什么？參考答案：1.C 2.D 3.A 4.AGATC的基因GATC用酶n切割.CTAGfCTAGfCTAG3可以連接。因為由兩種限制性內切酶切割后所形成的黏性末端是相同的（或“是可以互補的”）。點評：限制酶所識別的是特定的堿基序列，并在特定部位進行切割，限制酶不同，所識別的堿基序列不同,二、填空題：1. （18分）（1）目的基因一載體連接物物 分離純化（每空2分，共8分）（其他合理答案也給分） 基因-載體連接物（1分）、 載體-載體連接物（1分）（4）EcoRI和BamHI（2分）（只答一個酶不給分）（1）耐高溫2）引物對B（3）否（4）農桿菌載體-載體連接物目的基因-目的基因連接（2）載體-載體連接物（3）啟動子mRNA（每空（2分）； 目的2分，共4分）2.(5)213.4.