1、.金銀花和金銀花露中綠原酸和4種黃酮含量的測定    金銀花為忍冬科多年生半常綠纏繞植物忍冬的花蕾及初開的花，又名忍冬花、銀花、雙花等，其主要成分有機酸綠原酸具有抗菌、抗病毒及抗真菌、增強機體防御機能的作用，也是鑒定金銀花品質的標準。同時金銀花中含有木犀草素、金絲桃苷、槲皮素、芹菜素等多樣黃酮類化合物。現代醫學研究表明，黃酮類化合物具有降低心肌耗氧量，使冠脈、腦血管流量增加，軟化血管，降血糖、血脂等作用。同時黃酮還是一類天然的抗氧化劑，具有抗衰老，增加機體免疫力的生理活性作用。鑒于此，金銀花中黃酮的含量也可以作為金銀花品質檢驗的標準。目前對以上這5種物質已經建立的

2、分析方法已經有：阻抑催化褪色光度法 、分光光度法、高效液相色譜法、共振瑞利散射光譜法、催化動力學光度法、流動注射化學發光法、毛細管電泳法等但文獻中多為一種或兩種物質的測定，而同時對金銀花中綠原酸和黃酮類化學物進行測定的報導還未曾出過。本文則建立了一種反相高效液相色譜法同時對綠原酸、金絲桃苷、木犀草素、槲皮素、芹菜素進行測定，旨為增加對金銀花質量檢測的補充。 1  實驗部分1.1 儀器與試劑    Agilentl100高效液相色譜儀(美國，Agilent公司)；DF一101s集熱式恒溫加熱磁力攪拌器(中國，鄭州 長城科工貿有限公司)；DZF一6021真空

3、干燥箱(中國，上海齊欣科學儀器有限公司)；pHs一3c酸度計(中國， 成都世紀方舟科技有限公司) 綠原酸、金絲桃苷對照品(98%)，槲皮素對照品 (98%,中國藥品生物制品檢定)，木犀草素對照品(99%,中國藥品生物制品檢定),芹菜素對照品。甲醇(分析純)、磷酸(分析純)、金銀花樣品(購于重慶市)和金銀花露(每 500 mL相當于金銀花31.25 g)。水為二次蒸餾水。1.2 實驗方法 1.2.1 色譜條件    Eclipse XDB-C8柱(4.6×150 mm，5mm)；流動相為甲醇-水(用磷酸調節pH-2.60)。采用梯度洗脫

4、,檢測波長340 nm；流 速0.8 mLmin；進樣量為20uL。 1.2.2 標準曲線的繪制    分別精密稱取干燥至恒重的綠原酸、槲皮素、木犀草素和金絲桃苷對照品適量加甲醇溶解制成1.0 g/L的貯備液，芹菜素用熱的乙醇溶解制成1.0 g/L的貯備液。臨用前用貯備液配制一系列不同濃度的5種標樣的混合溶液進樣20uL,以各組分峰面積y對其質量濃度X(g/L)進行線性回歸分析，得到的回歸方程、相關系數、線性范圍及其檢測限。 1.2.3 樣品含量測定 精密稱取金銀花試品粉末(過60目篩)2.000g，置圓底燒瓶中，加30 mL 70%

5、乙醇(磷酸調pH- 26)，于86水浴回流1h，過濾，濾渣加2OmL 7O%乙醇(磷酸調pH-2.6)，重復上述步驟兩次，合并3 次提取液，放冷，轉移到100 mL容量瓶，稀釋至刻度，搖勻，取2.5 mL稀釋至100 mL，用0.45 m微孔 濾膜過濾，作為供試品溶液1；取金銀花露1 mL稀釋至10 mL作為供試品溶液2，按2.1色譜條件分析，外標法計算含量。1.2.4 精密度實驗    取同一濃度對照品溶液，重復進樣5次，測得峰面積，計算得綠原酸的標準相對偏差(RSD)為 2.8 96，金絲桃苷的RSD為1.4 ，槲皮素的RSD為2.O，木犀草素的RSD為1.1

6、 9/6表明該方法的精密度良好。 1.2.5 重復性實驗    按照23項下樣品的預處理過程分別同時處理金銀花樣品5份，測得綠原酸含量的RSD為1.69%；金 絲桃苷含量的RSD為2.4 ；槲皮素含量的RSD為2.1；木犀草素含量的RSD為1.8%。表明該方法的重現性良好。1.2.6 加樣回收實驗    精密量取已知含量的金銀花試液5份，分別精密加入綠原酸、金絲桃苷、槲皮素和木犀草素對照品，測定樣品的平均加標回收率。 1.2.7 穩定性實驗取同一樣品溶液，分別于0、4、8、12、24 h進樣測定，綠原酸的RSD為0

7、.87 ，金絲桃苷的RSD為 0.63% ，槲皮素的RSD為0.95% ，木犀草素的RSD為0.77% ，表明樣品在24 h內基本穩定。 2 結果與討論2.1 流動相的選擇    黃酮類成分在HPLC測定中易出現拖尾現象，在流動相中加入磷酸，抑制其拖尾，提高峰形對稱性。通過對不同比例的有機相及磷酸濃度的實驗選擇，結果發現甲醇-水(磷酸調pH-26)系統比乙腈-水(磷酸調pH-26)系統分離效果好，故選擇甲醇-水(磷酸調pH=26)為流動相。并根據這5種物質的極性和分離情況，調整流動相的配比，采用梯度洗脫。 2.2 實驗測定波長的選擇 

8、   掃描各對照品在200700 nm范圍內的紫外吸收光譜，分析結果，實驗選擇在330，340，350，360nm 處對混合樣測定，比較發現在340nm處所測定的峰面積相對較大，靈敏度較高，峰形較好，因此本實驗采 用340nm作為測定波長 2.3 樣品處理方法的選擇     金銀花樣品分別用水浴回流提取與超聲提取處理，結果發現水浴回流法提取的金絲桃苷、槲皮素和 木犀草素的總含量比超聲法的高出一倍，因為回流更有利于苷的水解，實驗比較選定磷酸緩沖，V (磷酸)：V(乙醇)-30：70水浴回流提取的方法。3  結  論     文獻中的高效液相色譜法的測定結果線性范圍窄，靈敏度低；而其他方法也存在一定的不足，如：分