1、第二章第二章 紅細胞血型檢測紅細胞血型檢測穆士杰穆士杰目 錄 第一節 輸血前免疫血液學檢查 第二節 鹽水介質試驗技術 第三節 酶介質試驗技術 第四節 凝聚胺介質試驗技術 第五節 抗球蛋白試驗技術 第六節微柱凝膠介質試驗技術目 錄 第七節 吸收放散試驗技術 第八節 凝集抑制試驗技術 第九節 紅細胞血型分子生物學檢測第一節第一節 輸血前免疫血液學檢查輸血前免疫血液學檢查重點提示 ABO血型和RhD血型鑒定 不規則抗體的篩查和鑒定 交叉配血試驗ABO血型和RhD血型鑒定 原理：利用抗原與抗體之間特異性結合的凝集反應來完成。 ABO血型鑒定：正定型、反定型。 正定型，檢測紅細胞表面是否存在A抗原和(或

2、)B抗原；反定型，檢測血清中是否存在抗-A抗-B抗體（凝集素）。 RhD血型鑒定：紅細胞上存在D抗原時，可與抗-D分型血清產生特異性的抗原抗體反應，出現紅細胞凝集為RhD陽性，不凝集者為RhD陰性。不規則抗體的篩查和鑒定 不符合ABO血型系統Landsteiner法則的血型抗體，即抗-A、抗-B之外的血型抗體 ABO系統中的亞型，變異型的抗-A1或某種抗-B等抗體 包括同種抗體和自身抗體 實驗方法：鹽水介質法、白蛋白介質法、低離子強度介質法(LISS)、酶技術、抗球蛋白試驗、凝聚胺(polybrene)促凝技術和凝膠試驗（Gel test）等交叉配血試驗交叉配血試驗1. 主側交叉配血：受血者血

3、清(漿)與供者紅細胞反應，檢測受血者體內是否存在針對供者紅細胞的抗體。2. 次側交叉配血：受血者紅細胞與供者血清(漿)反應，檢測供者血液中是否存在針對受血者紅細胞的抗體。3. 自身對照：受血者紅細胞與自身血清(漿)反應，以排除自身抗體、直接抗球蛋白試驗陽性及紅細胞緡錢狀假凝集等干擾試驗結果的因素。第二節第二節 鹽水介質試驗技術鹽水介質試驗技術重點提示 實驗原理 實驗方法 結果判讀實驗原理 在鹽水介質（saline medium）中，IgM類天然抗體分子鏈較長可直接與含有相應抗原的紅細胞結合，并呈現肉眼可見的凝集。 僅能檢出IgM類抗體，無法檢出IgG類抗體。實驗方法 平板法 應用于常規ABO血

4、型和RhD抗原定型，易出現假陽性或假陰性結果。 試管法 定型試驗或半定量試驗，如測定抗體效價，結果準確、可靠。結果判讀 陽性結果 紅細胞出現凝集反應或溶血 陰性結果 紅細胞呈游離的混懸狀態 溶血 陽性結果第三節第三節 酶介質試驗技術酶介質試驗技術重點提示 實驗原理 實驗方法實驗原理 作用于紅細胞表面的多糖鏈，減少紅細胞表面負電荷，縮短細胞間距，增強IgG抗體與紅細胞表面抗原的凝集反應 改變紅細胞表面結構，暴露出某些隱蔽抗原，使IgG類不完全抗體可以與酶處理的紅細胞在鹽水介質中發生凝集反應實驗原理 常用：木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶 Rh、Kidd血型系統的檢出效果最好 對M、N、S、s、Fya、Fy

5、b抗原破壞較顯著實驗方法 一步法 在血清和紅細胞反應體系中直接加入酶液促進抗體與相應紅細胞反應，敏感性較差 二步法 用酶液消化紅細胞后，洗滌去凈酶液，增強紅細胞抗原性，使不完全抗體與之發生反應，出現特異性凝集結果判讀 陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，被檢管出現凝集為陽性，不出現凝集判定為陰性。 陽性對照管不凝集或（和）陰性對照管出現凝集，試驗失敗。分析原因，重新試驗。第四節第四節 凝聚胺介質試驗技術凝聚胺介質試驗技術重點提示實驗原理實驗方法實驗原理 凝聚胺是一種高價陽離子季銨鹽多聚物，可中和紅細胞表面的負電荷，引起正常紅細胞可逆性的非特異性聚集。加入檸檬酸重懸液(中和液)后，僅由凝聚胺引起的

6、非特異性聚集會因電荷中和而消失 靈敏度高，可檢出IgM和IgG類抗體實驗方法 兩步：紅細胞去電荷、紅細胞復電荷 無抗體致敏的紅細胞可在試驗過程中產生可逆的非特異性凝集，抗體致敏的紅細胞產生的凝集則不可逆 試劑：低離子介質、凝聚胺溶液、重懸液第五節第五節 抗人球蛋白試驗技術抗人球蛋白試驗技術重點提示 實驗原理 實驗方法 臨床應用實驗原理 大部分IgG抗體與具有相應抗原的紅細胞在鹽水介質中能夠特異性結合，但不發生肉眼可見的凝集反應，該類抗體稱為不完全抗體 抗球蛋白分子的Fab片段可與包被在紅細胞上的球蛋白分子的Fc片段結合，從而通過抗球蛋白分子的搭橋作用使不完全抗體與具有相應抗原的紅細胞產生肉眼可

7、見的凝集反應實驗方法經典的血清學試驗方法，主要用于檢測IgG、IgA等抗體參與的抗原-抗體反應，也可測定補體組分C3、C4片段參與的免疫反應。直接抗球蛋白試驗和間接抗球蛋白試驗DAT用于檢測在患者體內致敏紅細胞的不完全抗體和（或）補體。IAT用于檢測血清中的不完全抗體，即在體外將人血清與紅細胞致敏，再與抗球蛋白試劑反應。臨床應用 DAT：胎母血型不合新生兒溶血病的診斷、免疫溶血性輸血反應的調查、自身免疫性溶血性貧血的診斷及藥物誘發型溶血病的診斷 IAT：血型鑒定、交叉配血、器官移植、妊娠所致免疫性血型抗體以及自身免疫性血型抗體的檢出和鑒定第六節第六節 微柱凝膠介質試驗技術微柱凝膠介質試驗技術重

8、點提示 實驗原理 適用范圍 優點實驗原理分子篩技術和免疫學技術相結合的產物游離紅細胞和凝集紅細胞是否能通過特殊結構的凝膠介質，從而使不同狀態的紅細胞得以分離陰性反應 離心力作用下，未與抗體結合的游離紅細胞因體積小通過凝膠層，沉淀于底部，形成“細胞扣” 陽性反應 與特異性抗體結合的紅細胞因體積大被凝膠阻滯不能通過凝膠層，留于凝膠介質的頂部或懸浮于凝膠中適用范圍 多用于抗球蛋白試驗、ABO血型正/反定型、交叉配血及其他血型系統抗原檢測。中性膠 不含抗體，相當于試管的作用特異性膠 含特異性抗體，如抗-A、抗-B，可進行AB抗原檢測抗球蛋白膠 含抗球蛋白，可進行IgG類抗體的檢測優點 操作簡便、結果準

9、確、靈敏度高、便于保存、節約標本、標準化、使用安全第七節第七節 吸收放散試驗技術吸收放散試驗技術重點提示 吸收試驗 放散試驗 臨床應用吸收試驗 根據被檢標本中所含抗體的最適反應溫度，對其進行吸收。 冷抗體4反應最強，通常用冷吸收技術，即自身抗體用自身紅細胞吸收，同種抗體用對應紅細胞吸收，多為IgM抗體 溫抗體 采用酶處理后的紅細胞在37孵育，多為IgG抗體吸收試驗原理：原理：待檢血清抗體加入已知抗原的紅細胞，或待檢抗原紅細胞加入已知效價的特異性抗血清，產生抗原抗體反應，離心后分離經過抗原吸收的血清。將吸收前與吸收后的血清用生理鹽水作倍比稀釋并測定其效價差異，若吸收后的血清效價低于吸收前，證明待

10、檢血清中含有與已知紅細胞抗原對應的抗體，或待檢紅細胞與加入的已知抗原的紅細胞血型相同。放散試驗 通過改變物理條件把結合到紅細胞膜上的抗體解離下來 獲得紅細胞上致敏的抗體（自身抗體）用于自身吸收 獲得沒有抗體吸附的紅細胞，用于血型鑒定和交叉配血放散試驗 試驗方法：熱放散技術、乙醚放散技術、磷酸氯喹放散技術、凍融放散技術、檸檬酸放散技術、氯仿/三氯乙烯放散技術、二甲苯放散技術臨床應用鑒定存在于紅細胞上的弱抗原，分離、鑒定混合抗體、鑒定新生兒溶血病和免疫性輸血反應的抗體等IgM抗體檢測時應使用冷吸收、熱放散IgG抗體檢測時應在37吸收、乙醚放散第八節第八節 凝集抑制試驗凝集抑制試驗重點提示 凝集抑制

11、試驗概念 唾液中可溶性ABH血型物質的檢測 P1、I等血型抗原凝集抑制試驗凝集抑制試驗簡介 可溶性血型物質：人類血型抗原部分以游離形式存在于血漿、唾液等液體中，如ABH、Lewis、I、P、Chido、Rodger等 凝集抑制試驗：用于鑒定存在于體液和(或)非紅細胞上的可溶性血型物質，利用這些血型物質可以結合相應抗體這一性質，用紅細胞檢測抗體是否被吸收或中和的情況，以顯示相應血型物質的存在。唾液中可溶性ABH血型物質的檢測 原理：人體液中可檢出ABH抗原物質，稱為分泌型；不存在ABH抗原物質，稱為非分泌型。H物質在A、B、O、AB四型分泌型個體唾液中均存在， O型人含量最多 適用范圍：用于AB

12、O、MN等血型鑒定的輔助試驗 實驗方法：抑制物處理，抗體標化P1、I等血型抗原凝集抑制試驗 原理：當需要確定某些被檢血清的抗體特異性時，可用已知血型物質輔助鑒定。如懷疑血清中含有抗-P1時，可用商品化的P1血型物質來確認 適用范圍：用已知血型物質測定未知抗體的特異性第九節第九節 紅細胞血型分子生物學檢測紅細胞血型分子生物學檢測重點提示 分子生物學檢測技術介紹 紅細胞血型檢測中的應用分子生物學檢測技術介紹 基本方法：利用DNA序列的特異性來間接區分等位基因 包括：引物延伸法（PCR-SSP）、限制性片段長度多態分析法（RFLP）、PCR-序列特異性寡核苷酸探針（PCR-SSOP）、PCR-單鏈構象多態（PCR-SSCP）、PCR反向點雜交（PCR-RDB）、PCR-DNA測序、基因芯片及PCR指紋圖紅細胞血型檢測中的應用 ABO疑難血型的鑒定 發現ABO血型新等位基因 ABO基因突變的研究 新生兒溶血病（HDFN）的輔助診斷 某些疾病的病理研究 法醫個體識別本章小結 輸血前檢