1、血小板抗原基因的分型與配型臨床療效作者：林國連 高發平 陳雅雯【關鍵詞】血小板摘要：目的：血小板基因分型及配型的探導，以便確定臨床血小板輸注 的安全和療效。方法：應用聚合酶鏈序列特異性引物技術（pcr-ssp）, 對湛江市72例患者（人血小板抗原）的hpa1-5系統等位基因進行分型，由湛 江市血液中心提供相配型的血小板為其進行成份血小板輸注。結果：經血小板基 因配型的吻合組血小板輸注后ccik cci24效果明顯優于對照組。結論：對血 小板基因分型與配型可以提高臨床輸注血小板的安全性和療效。關鍵詞：人血小板抗原；基因分型；配型；臨床療效the genotype matched-type and

2、 clinical effect of platelets antigengeneabstract: objective: to research the genotype and the matched-type of platelets antigen gene for making sure the clinical effect of the platelets inject. method: divide hpa1-5 system accede of 72 patients in zhanjiang by the technique of pcr-ssp. the inject m

3、atched-platelets with provided by the blood center of zhanjiang for patients. result: the group injected the matched genotype platelets in the effect of cci1.cci24 were better than the compared one. conclusion: to divide the genotype and match the type of platelets can improve the safety and curativ

4、e effect of the platelets injection.key words: platelets antigen; the genotype; matched-type; clinical effect國外近年來經大量 研究 后發現，hpa （人血小板抗原）在新生兒血 小板減少性紫瘢，輸血后紫瘢，和經血小板輸注后無療效等疾病中具有重要意義 1-2o特別在臨床上，許多血小板減少性紫瘢患者，因血小板輸注療效很差，并發出血等，更有甚者導致死亡等嚴重后果。因此，有必要對血小板抗原基因分 型及配型進行深入的探導。一直以來，醫學上一直用傳統的血清學方法進行hpa 分型，由于缺乏高質量、高效

5、價抗血清等等多種因素的制約，始終無法對hpa 進行分型。隨著對hpa基因的深入研究，國外近年來己報道36 將基因檢 測技術用于血小板分型研究中，經臨床配型輸注取得較好的效果。本文應用聚合 酶鏈序列特異性引物技術（pcr-ssp ）對湛江市區72例患者的hpa1-5系統 等位基因進行了分型，并提供基因型相合的血小板成份進行輸注，現報告如下。1材料與方法1.1檢測標本：抽取185名湛江市區的健康軍人獻血者以及72例需輸 注血小板的患者靜脈血1m1 （ edta抗凝b1.2主要試劑和儀器taq dna聚合酶由promega公司提供,hpas5系統等位基因特異性引物由美國ct公司提供,dna提取采用德

6、國qlamp dnamini kit,擴增儀為澳大利亞rg公司3000型wvsr分析儀。1.3 dna提取：采有德國qiaamp dna mini kit從全血中提取dna ,操作按機器說明書進行。1.4 pcrssp特異性hpa基因擴增1.4.1 pcr反應體系：反應體系共10pl ,包括反應混合液（含特異性 hpa1ahpa5b基因引物，內對照引物,dntp、pcr緩沖液等）8pl ,提取的基 因組 dnaipl 及含 0.6u taqdna 酶液 1plo1.4.2 pcr擴增參數：首先以95°c5min變性；然后按95°c 30s , 60°c 60 s

7、, 72°c90 s擴增，共45個循環。1.4.3擴增產物鑒定：pcr擴增產物在2%瓊脂糖凝膠中電泳，在紫外 光下觀察結果。1.5臨床hpa基因吻合組與末配型組輸注成份血小板的療效比較果：將 需要輸注血小板的患者分為基因吻合者（吻合組）及末配型者（對照組）兩組， 分別在輸注前、輸注后仆和24h進行血小板計數，同時記錄輸入的血小板數總 量及患者的體表面積。計算 血小板輸注后1h. 24h患者糾正的血小板計數增l （ cc1 ） 7 ,比較兩組的有效率。2結果2.1對185名湛江市區的健康軍人獻血者進行hpa基因分型，其abo 血型、hpa基因型分布情況見表1。2.2對72例需輸注血小板

8、的患者進行hpa基因分開型，其abo血型、 hpa基因型分布情況，見表2。2.3對湛江市區72例需輸注血小板患者進行血小板基因分型并選擇，由 湛江市血液中心提供hpa基因相吻合的血小板輸注。共收到臨床反饋資料60 份，其中基因型吻合者（吻合組）29份，未配型者（對照組）31份。吻合組與 對照組血小板輸注后1h. 24h平均cci值見表3o對吻合組及對照組血小板輸 注后1h、24h的輸注有效率進行了比較8,結果見表4。3討論血小板抗原在臨床輸血中有著重要的意義。血小板抗原不合，可導致 血小板輸注后療效差別很大，或者無效，輸成份血小板后引起紫瘢，以及引起新 生兒血小板減少性紫瘢等等。要想輸成份血小

9、板有滿意療效，必須對血小板抗原 基因分型及配型。近年來，國外對血小板抗原基因分型進行很多研究。我國大 部分地區沒開展此項技術的研究工作，臨床上大部分地區沒有對血小板抗原基因 分型及配型。導致臨床上輸血小板的療效不很滿意，甚至出現負作用。因此希望 廣大醫務工作者在此方面加倍努力。對湛江市185名獻血員的hpa仁5系統等 位基因進行分型，可建立一個小資料庫，為臨床輸注成份血小板的患者提供配型 相合的成份血小板。對提高輸血小板療效有很大的幫助，還可以對血小板特異性 抗體進行鑒別。對湛江市72例患者進行的hpa的基因分型及配型，從收集回 的60例療效來看，基因吻合組輸血小板后1h. 24h的平均cci

10、值比對照組顯 著升高。從兩組療效來看吻合組輸注血小板后1h、24h有效率表1湛江市185名獻血者abo血型、hpa基因型分布 略均為100%，而對照組則為83.9%和80.6%，明顯不及吻合組。目前臨 床上輸注血小板只考慮abo血型相同，（實際工作中，由于病情急，且血源受 限制時，血型不同也會輸注血小板，這情況結果，本人在另一編文章中已述）而 忽視hpa配型。對那些需反復多次輸注血小板者，更應進行hpa的基因分型,以便提高輸血小板的安全和療效。表2湛江市72例患者abo血型、hpa基因型分布 略參考文獻1 williamson l m,hacket g,pennie j,et al. the

11、natural history of fetomatrnal alloimmunization to the platelet-specific antigen hpala as determined by antenatal screening j .blood,1998 , 92:2280.2 kickler t s.platelet immunology.ln:anderson k l, ness p m.eds.scientific basis of transfusion medicine m .philadelphia:wb saunders, 1994.304.3 metcalf

12、e p,cavanagh g,hurd c,et al,hpa genotyping bypcr-ssp:report of 4 exercises j .vox sang,1999 , 77:40.4 skoge n b,belissimo d b,hess ner j m,et al.rapid determi nation of platelet alloantigen genotypes by pcr using allele-specific primersj .transfusion, 1994,34:95 .5 cavanagh g,dunn a,chapman c e,et al.hpa genotyping by pcr-ssp:a streamlined method for rapid routine investigations j .transfus med,1997,41.6 chen d f,pastucha l t,chen h y,et al,simultaneous genotyping of human platelet antigens by hot