1、一、總貝ijgeneral principle1范圍本規范規定了化妝品微生物學檢驗總則。木規范適用于化妝品樣品的采集、保存、供檢樣品制備。2儀器和設備2.1天平。2.2高壓滅菌器。2.3振蕩器。2.4三角瓶。2.5玻璃珠。2.6玻璃棒。2.7刻度吸管。2.8研缽。2.9均質器。2.10恒溫水浴箱。2.11釆樣用具：不銹鋼勺，剪刀，開罐器等。3培養基和試劑3.1生理鹽水成分：氯化鈉&5g蒸餾水加至1000 ml溶解后，分裝到加玻璃珠的三角瓶內，每瓶90ml, 103.43kpa(15 1b)20min高壓滅菌。3.2 scdlp液體培養基成分：酪蛋白豚17g大豆蛋口腺3g氯化鈉5g磷酸氫

2、二鉀2.5g衙萄糖2.5g卵磷脂lg吐溫807g蒸館冰ioootbl制法：先將卵磷脂在少量蒸幗水中加溫溶解后，再與其它成分混合，加熱溶解，調ph為 7.27.3,分裝，103.43kpa(151b)20min高壓滅菌。注意振蕩，使沉淀于底層的吐溫80充分混 合，冷卻至25°c左右使用。注：如無酪蛋口腺和大豆蛋口際也可用多腺代替。3.3滅菌液體石蠟。3.4 滅菌吐溫80o4樣品的采集及注意事項4.1所采集的樣品，應具冇代表性，一般視每批化妝品數量大小，隨機抽取相應數量的包裝 單位。檢驗時，應分別從兩個包裝單位以上的樣品中共取10g或lonilo包裝量小于2()g的樣 品，采樣量應適量增

3、加，其總量應大于16go4.2供檢驗樣品，應嚴格保持原有的包裝狀態，進口產品應為市售包裝。容器不應有破裂， 在檢驗前不得打開，防止樣品被污染。4.3接到樣品后，應立即登記，編寫檢驗序號，并按檢驗要求盡快檢驗。如不能及時檢驗， 樣品應放在室溫陰涼干燥處，不要冷藏或冷凍。4.4若只有一份樣品而同時需做多種分析，如微生物、毒理、化學等，應先做微生物檢驗， 再將剩余樣品做其它分析。4.5在檢驗過程中，從打開包裝到全部檢驗操作結束，均須防止微生物的再污染和擴散，所 用采樣用具、器11【1.及材料均應事先滅菌，全部操作應在無菌室內進行，或在相應條件下，按 無菌操作規定進行。5供檢樣品的制備5.1液體樣品5

4、丄1水溶性的液體樣品，量取10ml加到90ml滅菌生理鹽水中，混勻后，制成1:1()檢液。 5.1.2油性液體樣品，取樣品l()ml,先加5ml滅菌液體石悄混勻，再加l()ml滅菌的葉溫 80,在4ctc44°c水浴中振蕩混合lomin,加入滅菌的生理鹽水75ml(在40°c44°c水浴中 預溫)，在40°c44°c水浴中乳化，制成1:10的懸液。5.2膏、霜、乳劑半固體狀樣品5.2.1親水性的樣品，稱取10g,加到裝冇玻璃珠及9()ml滅菌生理鹽水的三角瓶中，充分振 蕩混勻,靜置15min。取其上清液作為1:10的檢液。5.2.2疏水性樣品，

5、稱取10g,放到滅菌的研缽中，加10ml滅菌液體石蠟，研磨成粘稠狀， 再加入10ml滅菌吐溫80,研磨待溶解后，加70nil滅菌生理鹽水，在40£44£水浴中充 分混合，制成1:10檢液。5.3固體樣品，稱取l()g,加到9()ml滅菌生理鹽水中，充分振蕩混勻，使其分散混懸，靜置 后，取上清液作為1:10的檢液。如有均質器，上述水溶性膏、霜、粉劑等，可稱10g樣品加入9()ml滅菌生理鹽水，均質 lmin2min；疏水性膏、霜及眉筆、口紅等，稱l()g樣品，加10ml滅菌液體石蠟，l()ml滅 菌葉溫80, 70ml滅菌生理鹽水，均質3min5min。二、菌落總數aerob

6、ic bacterial count1范圍本規范規定了化妝品中菌落總數的檢驗方法。木規范適用于化妝品菌落總數的測定。2定義木規范采用下列定義菌落總數(aerobic bacterial count)是指化妝品檢樣經過處理，在一定條件卜培養后(如培養 基成分、培養溫度、培養吋間、ph值、需氧性質等),lg(lml)檢樣中所含菌落的總數。所得 結果只包括一群木方法規定的條件下生長的嗜屮溫的需氧性菌落總數。測立菌落總數便于判明樣品被細菌污染的程度，是對樣胡進行衛牛學總評價的綜合依據。3儀器和設備3.1三角瓶。3.2 量筒。3.3 ph計或精密ph試紙。3.4高壓滅茵器。3.5試管。3.6 平皿：直徑

7、9cm。3.7 刻度吸管：10ml、2ml、iml。3.8酒精燈。3.9恒溫培養箱。3.10放大鏡。4培養基和試劑4.1 生理鹽水：見總則中3.1。4.2 卵磷脂、吐溫80營養瓊脂培養基4.2.1成分： 蛋白豚20g牛肉膏3g氯化鈉5g瓊脂15g卵磷脂lg吐溫807g蒸 is 水1 oooml4.2.2制法：先將卵磷脂加到少量蒸飾水屮，加熱溶解，加入吐溫80,將其他成分(除瓊脂外) 加到其余的蒸飾水屮，溶解。加入已溶解的卵磷脂、吐溫80,混勻，調ph值為7.17.4,加 入瓊脂，103.43kpa(15 1b)20min高壓滅菌，儲存于冷暗處備用。4.3 0.5%氯化三苯四氮啤(2,3,5tr

8、iphenyl terazolium chloride,ttc)成分：ttc0.5g蒸憎水l()()ml溶解后過濾，103.43kpa(15 1b)2()min高壓滅菌，裝于棕色試劑瓶，置4°c冰箱備用。5操作步驟5.1用滅菌吸管吸取1:10稀釋的檢液2ml,分別注入到兩個滅菌平皿內，每皿iml。另取 lml注入到9ml滅菌生理鹽水試管中(注意勿使吸管接觸液面)，更換一支吸傳，并充分混勻, 制成1:10()檢液。吸取2ml,分別注入到兩個滅菌平皿內，每皿iml。如樣品含菌量高，還 可再稀釋成1:1000, 1:10000,等，每種稀禪度應換1支吸管。5.2將融化并冷至45°

9、c50°c的卵磷脂吐溫8()營養瓊脂培養基傾注到平皿內，每皿約15ml, 隨即轉動平ll【l,使樣品與培養基充分混合均勻，待瓊脂凝固后，翻轉平ll【l,置37°c培養箱內 培養48h。另取一個不加樣品的滅菌空平皿，加入約15ml卵磷脂吐溫80營養瓊脂培養基， 待瓊脂凝固后，翻轉平ll【l,置37°c培養箱內培養48h,為空白對照。5.3為便于區別化妝品中的顆粒與菌落，可在每100ml卵磷脂吐溫80營養瓊脂中加入 lml0.5%的ttc溶液，如冇細菌存在，培養后菌落呈紅色，而化妝品的顆粒顏色無變化。6菌落計數方法先用肉眼觀察，點數菌落數，然后再用放大510倍的放大鏡

10、檢查，以防遺漏。記下各 平皿的菌落數后，求出同一稀禪度各平祖生長的平均菌落數。若平川l中冇連成片狀的菌落或 花點樣菌落蔓延生長時，該平皿不宜計數。若片狀菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌 落數分布乂很均勻，則可將此半個平皿菌落計數厲乘以2,以代表全皿菌落數。7菌落計數及報告方法7.1首先選取平均菌落數在3030()個z間的平川l,作為菌落總數測定的范圍。當只冇一個 稀釋度的平均菌落數符合此范圍時，即以該平皿菌落數乘其稀釋倍數(見表1中例1)。7.2若有兩個稀釋度，其平均菌落數均在30300個之間，則應求出兩菌落總數之比值來決 定，若其比值小于或等于2,應報告其平均數，若人于2則報告其中稀釋度

11、較低的平皿的菌落 數(見表1中例2及例3)。7.3若所冇稀禪度的平均菌落數均大于30()個，則應按稀禪度戢高的平均菌落數乘以稀禪倍 數報告z(見表1中例4)o7.4若所冇稀禪度的平均菌落數均小于3()個，則應按稀禪度最低的平均菌落數乘以稀禪倍數 報告之(見表1例5)o7.5若所有稀釋度的平均菌落數均不在30300個之間，其中一個稀釋度人于300個，而相 鄰的另一稀釋度小于3()個時，則以接近3()或300的平均菌落數乘以稀禪倍數報告z(見表1 中例6)o7.6若所冇的稀禪度均無菌生長，報告數為每g或每ml小于1 ocfuo7.7菌落計數的報告，菌落數在10以內時，按實冇數值報告z,大于10()

12、時，采用二位冇效 數字，在二位冇效數字后啲的數值，應以四舍五入法計算。為了縮短數字后面零的個數，可 用1()的指數來表示(見表1報告方式欄)。在報告菌落數為“不可計”時，應注明樣品的稀釋 度。表1 菌落計數結果及報告方式例次不同稀釋度平均菌落數兩稀釋度 菌數之比菌落總數cfu/ml 或 cfu/g報告方式cfu/ml 或 cfu/gw1w210-311365164201640016000 或 1.6x10422760295461.63800038000 或 3.8x10432890271602.22710027000 或 2.7x1044不可計4650513513000510000 或 5.1

13、 x105527115270270 或 2.7 x1026不可計305123050031000 或 3.1 x1047000< 1 x10<10*cfu：菌落形成單位。三、糞大腸菌群fecal coliforms1范圍本規范規定了化妝品中糞大腸菌群的檢驗方法。本規范適用于化妝品中糞大腸菌群的檢驗。2 定義木規范采用下列定義糞人腸菌群(fecal coliforms)系一群需氧及兼性厭氧革蘭氏陰性無芽胞桿菌，在44.5°c培養 24h48h能發酵乳糖產酸并產氣。該菌來自人和溫血動物糞便，是重要的衛生指示菌。3儀器3.1恒溫水浴箱或隔水式恒溫箱：44°c±

14、0.5°co3.2溫度計。3.3顯微鏡。3.4載玻片。3.5接種環。3.6 電爐。3.7三角瓶。3.8試管。3.9小倒管。3.10 ph計或ph試紙。3.11高壓滅茵器。32 亥ij度吸管：10ml、2ml、iml。3.13平皿。4培養基和試劑4.1雙倍乳糖膽鹽培養某成分： 蛋白月東40g10g10g5mlwooml豬膽鹽乳糖0.4%渙甲酚紫水溶液蒸餛水制法：將蛋白豚、膽鹽及乳糖溶解于蒸錨水屮，調ph到7.4,加入0.4%澳甲酚紫水溶液 5ml,混勻，分裝試管(每支試管中加一個小倒管)。68.95kpa(101b)20min滅菌。成分：蛋白豚10g10g2g4.2伊紅美蘭(emb)瓊

15、脂乳糖磷酸氫二鉀瓊脂20g2%伊紅水溶液20ml().5%美藍水溶液13ml蒸鐳水loooml制法：先將瓊脂加到900ml蒸懾水中，加熱溶解，然后加入磷酸氫二鉀、蛋白際 混勻, 使z溶解。再以蒸館水補足至loooml。校正ph值為7.27.4,分裝于三角瓶內，103.43kpa(15 lb)15min鬲壓滅菌備用。臨用時加入乳糖并加熱融化瓊脂。冷至6()°c左右無菌操作加入滅菌的伊紅美藍溶液，搖勻。傾注平iii備用。20g5gloooml4.3蛋白腺水(作靛基質試驗用) 成分：蛋白豚(或胰蛋白腺)氯化鈉 蒸憎水制法：將上述成分加熱融化，調ph值為7.07.2,分裝小試管，103.43

16、kpa(15 lb)15min 高壓滅菌。4.4靛基質試劑柯凡克試劑：將5g對二屮氨基苯屮醛溶解于75ml戊醇中，然后緩慢加入濃鹽酸25ml° 試驗方法：接種細菌于蛋白豚水中，于44±0.5°c培養24h。沿管壁加柯凡克試劑0.3 ().5ml,輕搖試管。陽性者于試劑層顯深玫瑰紅色。注：蛋口月東應含有豐富的色氨酸，每批蛋口陳買來后，應先用已知菌種鑒定后方可使用。 4.5革蘭氏染色液：451染液制備4.5.1.1結晶紫染色液：結品紫lg95% 乙醇20ml1%草酸錢水溶液80ml將結晶紫溶于乙醇中，然后與草酸餒溶液混合。4.5.1.2革蘭氏碘液：碘lg碘化鉀2g蒸懈

17、水加至3()()ml將碘與碘化鉀先進行混合，加入蒸懈水少許，充分振搖，待完全溶解后，再加蒸館水至300mlo4.5.1.3脫色液：95%乙醇。4.5.1.4復染液：a. 沙黃復染液：沙黃0.25g95% 乙醇10ml蒸飾水90ml將沙黃溶解于乙醇中，然后用蒸館水稀釋。b. 稀石碳酸復紅液：稱取堿性復紅10g,研細，加95%乙醇100ml,放置過夜，濾紙過 濾。取該液l()ml,加5%石碳酸水溶液90ml混合，即為石碳酸復紅液。再取此液l()ml加 水90ml,即為稀石碳酸復紅液。4.5.2染色法4.5.2.1將涂片在火焰上固定，滴加結晶紫染色液，染lmin,水洗。4.5.2.2滴加革蘭氏碘液，

18、作用lmin,水洗。4.523滴加95%乙醇脫色，約30s,或將乙醇滴滿整個涂片，立即傾去，再用乙醇滴滿整個 涂片，脫色10s,水洗。4.5.2.4滴加復染液，復染lmin,水洗，待干，鏡檢。4.5.3染色結果革蘭氏陽性菌呈紫色，革蘭氏陰性菌呈紅色。注：如用1:10稀釋石碳酸復紅染色液作復染，復染時間僅需10s。5操作步驟5.1取lomlklo稀釋的檢液，加到l()ml雙倍濃度的乳糖膽鹽培養基中，置44°c ±0.5°c培 養箱中培養24h48h,如不產酸也不產氣，則報告為糞大腸菌群陰性。5.2如產酸產氣，劃線接種到伊紅美藍瓊脂平板上，置37°c培養18

19、 h24 h。同時取該培養 液12滴接種到蛋白豚水中，置44°c±0.5°c培養24h。經培養后，在上述平板上觀察冇無典型菌落生長。糞大腸菌群在伊紅美藍瓊脂培養基上 的典型菌落呈深紫黑色，鬪形，邊緣整齊，表面光滑濕潤，常具冇金屬光澤。也冇的呈紫黑 色，不帶或略帶金屬光澤，或粉紫色，中心較深的菌落，亦常為糞大腸菌群，應注意挑選。 5.3挑取上述可疑菌落，涂片作革蘭氏染色鏡檢。5.4在蛋白豚水培養液中，加入靛基質試劑約0.5ml,觀察靛基質反應。陽性者液而呈玫瑰 紅色；陰性反應液面呈試劑本色。6檢驗結果報告根據發酵乳糖產酸產氣，平板上冇典型菌落，并經證實為革蘭氏陰性短

20、桿菌，靛基質試 驗陽性，則可報告被檢樣品中檢岀糞大腸菌群。!1!綠膿桿pseudomonas aeruginosa1范圍本規范規定了化妝品中綠膿桿菌的檢驗方法。木規范適用于化妝品中綠膿桿菌的檢驗。2 定義木規范采用下列定義。綠膿桿菌(pseudomonas aeruginosa)屬于假單胞菌屬，為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶陽性，能 產生綠膿菌素。此外還能液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽，在42°c條件下能生長。該菌對人有致病力，可使傷處化膿，引起敗血癥等。3儀器3.1恒溫培養箱：37°c、42°c。3.2三角瓶。3.3試管。3.4 平 111l3.5 刻度吸管：10ml

21、、2ml、iml。3.6顯微鏡。3.7載玻片。3.8接種針、接種環。3.9 電爐。3.10高壓滅茵器。4培養基和試劑4.1 scdlp液體培養基見總則中3.2。4.2十六烷基三甲基澳化餒培養基成分：牛肉膏3g蛋白豚10g氯化鈉5g1 六烷基三甲基澳化錢0.3g瓊脂20g蒸餾水loooml制法：除瓊脂外，將上述成分混合加熱溶解，調ph為7.47.6,加入瓊脂,68.95kpa(10 lb)20min滅菌后，制成平板備用。4.3乙酰胺培養基成分：乙酰胺10g氯化鈉5g無水磷酸氫二鉀1.39g無水磷酸二氫鉀0.73g硫酸鎂(mgso47h2o)0.5g酚紅0.012g (1.2%溶液 iml)瓊脂2

22、0g蒸懈水loooml制法：除瓊脂和酚紅外，將其它成分加到蒸鐳水中，加熱溶解，調ph為7.2,加入瓊脂、酚紅，103.43kpa(15 lb)20min高壓滅菌后，制成平板備用。4.4綠膿菌素測定用培養基成分：蛋白豚2og氯化鎂1.4g硫酸鉀10g瓊脂18g廿油(化學純)10g蒸飾水loooml制法：將蛋白豚、氯化鎂和硫酸鉀加到蒸懈水中，加溫使其溶解，調ph至7.4,加入瓊脂和廿油，加熱溶解，分裝于試管內，68.95kpa(10 lb)20niin高壓滅菌后，制成斜面備用。4.5明膠培養基成分：牛肉膏3g蛋白月東5g明膠12()g蒸飾水loooml制法：取各成分加到蒸懈水中浸泡20min,隨時

23、攪拌加溫使z溶解，調ph至7.4,分裝于試管內，經68.95kpa(10 lb)20min滅菌后，直立制成鬲層備用。4.6硝酸鹽蛋白腺水培養基成分：蛋白腺10g酵母浸膏3g硝酸鉀2g亞硝酸鈉0.5g蒸飾水loooml制法：將蛋白豚和酵母浸膏加到蒸憎水中，加熱使z溶解，調ph為7.2,煮沸過濾后補足液量，加入硝酸鉀和亞硝酸鈉，溶解混勻，分裝到加有小倒管的試管中，6&95kpa(101b)20min滅菌厲備用。4.7普通瓊脂斜面培養基成分：蛋白豚10g牛肉膏3g氯化鈉5g瓊脂15g蒸係水loooml制法：除瓊脂外，將其余成分溶解于蒸館水中，調ph為7.27.4,加入瓊脂，加熱溶解, 分裝試

24、管，103.43kpa(15 lb)20min高壓滅菌后，制成斜面備用。5操作步驟5.1增菌培養:取1:10樣品稀禪液10ml加到90ml scdlp液體培養基中，置37°c培養18h24ho如冇綠膿桿菌生長，培養液表面多冇一層薄菌膜，培養液常呈黃綠色或藍綠色。5.2分離培養：從培養液的薄膜處挑取培養物，劃線接種在十六烷基三卬基浪化錢瓊脂平板向周邊擴散或略 此培養基選擇性將菌液劃線接種 邊緣不整，菌落上，置37°c培養18h24h。凡綠膿桿菌在此培養基上，其菌落扁平無定型, 有蔓延，表而濕潤，菌落呈灰白色，菌落周fpi培養基常擴散有水溶性色素, 強，大腸艾希氏菌不能生長，革

25、蘭氏陽性菌生長較差。在缺乏卜六烷基三卬基浪化錢培養基時也可用乙酰胺培養基進行分離, 于平板上，放37°c培養24h,綠膿桿菌在此培養基上生長良好，菌落扁平, 周曲i培養基略帶粉紅色，其它菌不生長。5.3染色鏡檢：挑取可疑的菌落，涂片，革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陰性者應進行氧化酶試驗。5.4氧化酶試驗：取一小塊潔凈的白色濾紙片放在滅菌平皿內，用無菌玻璃棒挑取綠膿桿菌 可疑菌落涂在濾紙片上，然后在其上滴加-滴新配制的1%二甲基對苯二胺試液，在15s30s z內，出現粉紅色或紫紅色時，為氧化酶試驗陽性；若培養物不變色，為氧化酶試驗陰性。5.5綠膿菌素試驗：取可疑菌落23個，分別接種在綠膿菌素

26、測定培養基上，置37°c培養 24h,加入氯仿3ml5ml,充分振蕩使培養物中的綠膿菌素溶解于氯仿液內，待氯仿提取液 呈藍色時，用吸管將氯仿移到另一試管中并加入lmol/l的鹽酸iml左右，振蕩后，靜置片刻。 如上層鹽酸液內出現粉紅色到紫紅色時為陽性，表示被檢物中冇綠膿菌素存在。5.6硝酸鹽述原產氣試驗：挑取對疑的綠膿桿菌純培養物，接種在硝酸鹽蛋口腺水培養基中, 置37°c培養24h,觀察結果。凡在硝酸鹽蛋白豚水培養基內的小倒管中有氣體者，即為陽性, 表明該菌能還原硝酸鹽，并將亞硝酸鹽分解產生氮氣。5.7明膠液化試驗，取綠膿桿菌可疑菌落的純培養物，穿刺接種在明膠培養基內，置

27、37培 養24h,取出放冰箱lomin3()min,如仍呈溶解狀時即為明膠液化試驗陽性；如凝固不溶者 為陰性。5.8 42°c生長試驗：挑取對疑的綠膿桿菌純培養物，接種在普通瓊脂斜面培養基上，放在41 42°c培養箱中，培養24h48h,綠膿桿菌能生長，為陽性，而近似的熒光假單胞菌則不能生 長。6檢驗結果報告被檢樣品經增菌分離培養后，在分離平板上冇典塑或可疑菌落生長，經證實為革蘭氏陰 性桿菌，氧化酶及綠膿菌素試驗皆為陽性者，即可報告被檢樣品中檢出綠膿桿菌；如綠膿菌 索試驗陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產氣和42°c生長試驗三者皆為陽性時，仍可報告被檢樣 品中檢出綠膿桿

28、菌。五、金黃色葡萄球蘆staphylococcus aureus1范圍木規范規定了化妝品中金黃金色葡萄球菌的檢驗方法。木規范適用于化妝品中金黃色衙萄球菌的檢驗。2定義本規范采用下列定義金黃色葡萄球菌(staphylococcus aureus)為革蘭氏陽性球菌，呈葡萄狀排列，無芽胞，無莢 膜，能分解甘露醇，血漿凝固酶陽性。該菌是荷萄球菌屮對人類致病力最強的一種，能引起人體局部化膿性病灶，嚴重時可導 致敗血癥。3儀器和設備3.1 顯微鏡。3.2 恒溫培養箱。3.3 離心機。3.4 刻度吸管：iml、5ml、lomlo3.5 試管。3.6 載玻片。3.7 酒精燈。4培養基和試劑4.1 scdlp液

29、體培養基見總則中3.2o4.2 baird parker 氏培養基成分：胰蛋白豚10g牛肉膏5g酵母浸膏lg內酮酸鈉10g甘氨酸12g氯化 ®(licl-6h2o)5g瓊脂20g蒸餾水950mlph7.0±0.2增菌劑的配制：30%卵黃鹽水50ml與除菌過濾的1%亞儲酸鉀溶液10ml混合，保存于 冰箱內。制法：將各成分加到蒸館冰中，加熱煮沸完全溶解，校正ph。分裝每瓶95ml, 103.43kpa 高壓滅菌15mino臨用時加熱溶化瓊脂培養基，每95ml加入預熱至50"c的卵黃亞硏酸鉀增菌劑5ml,搖勻后制成平板。培養基應是致密不透明的。使用前在冰箱貯存不得超過4

30、8h。4.3血瓊脂培養基成分：營養瓊脂loomlk)ml待冷至50°c左右無菌操作加入脫纖維羊血，搖勻，制成平脫纖維羊血(或兔血)制法：將營養瓊脂加熱融化，板,4.4置冰箱內備用。 廿露醇發酵培養基 成分：蛋白豚10g氯化鈉5g廿露醇10g牛肉膏5g().2%麝香草酚藍溶液12ml蒸錨水loooml制法：將蛋白腺、氯化鈉、牛肉膏加到蒸懈水中，加熱溶解，調ph7.4,加入廿露醇和指示劑，混勻后分裝試管中，68.95kpa(10 lb) 20min滅菌備用。4.5兔(人)血漿制備取3.8%檸檬酸鈉溶液，103.43kpa(15 lb) 30min高壓滅菌，1份加兔(人)全血4份，混勻 靜

31、置；20()0rpm3()0() rpm離心3min5min。血球卜沉，取上面血漿。4.6 無菌液體石蠟。5操作步驟5.1增菌：取1:10稀釋的樣品k)ml接種到90ml scdlp液體培養基中,置37°c培養箱, 培養24ho5.2分離：自上述增菌培養液中，取12接種環，劃線接種在baird parker平板，如無此培 養基也可劃線接種到血瓊脂平板，置37°c培養24h4汕。在血瓊脂平板上菌落呈金黃色，大 而突起，圓形,不透明,表面光滑,周圍有溶血圈。在baird parker平板上為圓形，光滑,凸 起，濕潤，直徑為2mm3mm,顏色呈灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍為一混濁

32、帶，在其外 層冇一透明帶。用接種針接觸菌落似冇奶油樹膠的軟度。偶然會遇到非脂肪溶解的類似菌落, 但無混濁帶及透明帶。挑取單個菌落分純在血瓊脂平板上，置37°c培養24h。5.3染色鏡檢：挑取分純菌落，涂片，進行革蘭氏染色，鏡檢。金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性 菌，排列成葡萄狀，無芽胞，無夾膜，致病性葡萄球菌，菌體較小，直徑約為().5ixm-lumo 5.4甘露醇發酵試驗：取上述分純菌落接種到甘露醇發酵培養基中，在培養基液而上加入 2mm3mm的滅菌液體石蠟，置37°c培養24h,金黃色葡萄球菌應能發酵廿露醇產酸。5.5血漿凝固酶試驗：吸取1:4新鮮血漿0.5ml,放入滅菌小試管中，加入待檢菌24h肉湯培 養物().5mlo混勻，放37°c恒溫箱或恒溫水浴中，每半小時觀察一次，6hz內如呈現凝塊即 為陽性。同時以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉湯培養物及肉湯培養基各().5ml,分別加入 滅菌1:4血漿().5ml,混