1、修改記錄單版木時間簡述a2003-11-15新發行1a2004-06-02品控部改為品質部1-一-一.染色法、培養基和（微生物檢驗）試劑配制作業指導書1目的對染色法、培養基和試劑配制方法作出明確規定，為檢測結果的準確性提供最 基本的保證。2范圍適用丁微生物檢驗。3職責3.1微檢人員負責培養基、試劑配制。3.2微檢人員掌握微生物的染色方法。4培養基和試劑配制名稱、用途名稱用途4.1革蘭氏染色液微牛物染色4.2營養瓊脂細菌培養和細菌總數測定4.3孟加拉紅培養基霉菌、酵母菌計數4.4乳糖膽鹽發酵管大腸菌群，糞大腸菌群及人腸桿菌的測定4.5乳糖發酵管供大腸菌群證實試驗用4.6三糖鐵瓊脂腸桿菌科細菌的生

2、化反應篩選4.7伊紅美蘭瓊脂分離腸道致病菌。4.8緩沖蛋白腺水沙門氏菌檢驗屮的前增菌4.9四硫酸鈉煌(ttb)綠增菌液沙門氏菌檢驗中的前增菌4.10 gn增菌液志賀氏菌的前增菌4.11亞硒酸鹽胱氨酸增菌液沙門氏菌選擇性增菌培養4.12 ss瓊脂沙門氏菌、志賀氏菌的分離4.13 v-p半固體瓊脂細菌檢驗的vp試驗4.14 7.5%氯化鈉肉湯金黃色葡萄球菌的增菌培養4.15 baird-parker 培養基金黃色葡萄球菌的檢驗4.16酸性肉湯酸性罐頭食品商業無菌檢驗4.17尿索瓊脂基礎細菌檢驗中的尿索酶試驗4.18賴氨酸脫竣酶培養基細菌檢驗中的賴氨酸脫竣酶試驗4.19 口引味培養基細菌靛基質試驗，

3、亦稱色氨酸肉湯4.20硝酸鹽氧化鉀培養基細菌檢驗中的硝酸鹽還原試驗和氧化鉀試驗4.21生理鹽水檢樣的溶解與稀釋5具體內容5.1革蘭氏染色法5.1.1革蘭氏染色液5.1.1.1結晶紫染色液成份：結晶紫l.og95%乙醇20.0ml1%草酸鞍水溶液80.0ml5.1.1.2革蘭氏碘液成份：碘l.og碘化鉀2.0g蒸憾水300.0ml5.1.1.3 95%乙醇5.1.1.4沙黃復染液成份：沙黃0.25g95%乙醇10.0ml蒸憾水90.0ml5.1.2染色法5.1.2.1將涂片在火焰上固定。5.1.2.2初染：滴加結品紫染色液，染lmin,水洗。5.1.2.3媒染：滴加革蘭氏碘液，作用1 min,水

4、洗。5.1.2.4脫色：滴加95%乙醇脫色，水洗；或將乙醇滴滿整個涂片，立即傾去，再 用乙醇滴滿整個涂片，脫色10s,水洗。5.1.2.5復染：滴加沙黃復染液，染lmin,水洗，待干，鏡檢。5.1.2.6結果判定：革工氏陽性菌呈紫色；革工氏陰性菌呈紅色。5.2 一般培養基和專用培養基5.2.1營養瓊脂521用途：用于一般細菌培養及細菌總數測定。5.222 成份(g/l)：蛋白月東10.0牛肉粉3.0氯化鈉5.0瓊脂15.0ph7.3±0.15.2.2.3制法：稱取各成份溶于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝，121°c15 min 高壓滅菌備用。522.4注意事項：密封保存于

5、陰涼干燥處。5.2.2孟加拉紅培養基522.1用途：用于糧食、食品、飲料中霉菌、酵母菌計數。522.2 成份(g/l)：蛋白月東5.0葡萄糖10.0磷酸二氫鉀1.0硫酸鎂0.5孟加拉紅0.03氯霉菌0瓊脂15.05.2.2.3制法：稱取各成份溶于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝，121°c20 min 高壓滅菌備用。522.4注意事項：保存于陰涼干燥處；密封、避光。5.2.3乳糖膽鹽發酵管523.1用途：用于大腸菌群，糞大腸菌群及大腸桿菌的測定。523.2 成份(g/l)：蛋白月東20.0膽鹽3.0乳糖5.0混甲酚紫0.01ph7.4±0.1523.3制法：稱取各成份溶于純

6、水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝于有倒立發酵管 的試管中，115°c15min高壓滅菌，雙料乳糖膽鹽發酵管除純水外，其它成份加倍。 523.4注意事項：密封保存于陰涼干燥處。5.2.4乳糖復發酵管524.1用途：供大腸菌群證實試驗用。524.2 成份(g/l)：蛋白月東20.0乳糖10.0漠甲酚紫0.01ph74±0.15.2.4.3制法：稱取各成份溶于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝10ml于有倒立 發酵管的試管中，115°c15min高壓滅菌備用。524.4注意事項：密封保存于陰涼干燥處。5.2.5三糖鐵瓊脂5.2.5.1用途：主要用于腸桿菌科細菌的生化反應篩選

7、。525.2 成份(g/l)：蛋白月東20.0酚紅0.025牛肉膏3.0氯化鈉5.0乳糖10.0硫酸亞鐵(6h2o) 0.5蔗糖10.0硫代硫酸鈉0.5瓊脂12.0葡萄糖1.0ph7.4±0.15.2.53制法：稱取各成份溶于純水屮，加熱煮沸至溶解，分裝試管，115°c15min 高壓滅菌制成高層斜而備用。525.4注意事項：保存于陰涼干燥處，密封、避光。5.2.6伊紅美蘭瓊脂526.1用途：弱選擇性培養基，用于分離腸道致病菌。5262成份(g/l)：蛋白#東10.0乳糖10.0磷酸氫二鉀2.0瓊脂15.0伊紅0.4美蘭0.065ph7.1±0.25.2.6.3制

8、法：稱取各成份溶于純水中，加熱溶解，121°c15min高壓滅菌，冷至55°c傾注平板備用。526.4注意事項：保存于陰涼干燥處，密封、避光。5.2.7緩沖蛋白豚水527.1用途：用于沙門氏菌檢驗中的前增菌。527.2 成份(g/l)：蛋白月東10.0氯化鈉5.0na2hpo4( 12h2o)9.0kh2po41.5最終 ph7.2±0.1527.3制法：稱取各成份溶于純水中，加熱煮沸至完金溶解，分裝，每瓶225ml,121°c 15min高壓滅菌備用。527.4注意事項：密封保存于陰涼干燥處。5.2.8四硫酸鈉煌(ttb)綠增菌液528.1用途：用于沙

9、門氏菌檢驗中前增菌。528.2成份(g/l)：a基礎培養基膽鹽l.og碳酸鈣lo.og硫代硫酸鈉30.0g蒸館水1000mlb碘溶液碘5.0g碘化鉀6.0g蒸徭水20ml528.3制法：將基礎培養基的各成分加入蒸憾水中，加熱溶解，分裝每瓶100ml。 分裝時應隨時震蕩，使其中的碳酸鈣混勻。121°c高壓滅菌15min備用，臨用時每 100 ml基礎培養基中加入碘溶液2 ml、0.1%煌綠溶液1 ml。528.4注意事項：密封保存于陰涼干燥處。5.2.9gn增菌液529.1用途：用于志賀氏菌的前增菌液529.2 成份(g/l)：胰蛋白月東20.0 g葡萄糖l.og甘露醇2.0 g檸檬酸

10、鈉5.0 g去氧膽酸鈉0.5 g磷酸氫二鉀4.0 g磷酸二氫鉀1.5 g氯化鈉5.0 g蒸憾水1000ml529.3制法:按上述成分配好，加熱使溶解，校正ph。分裝每瓶225 ml, 115°c高壓滅菌15mino529.4注意事項：密封保存于陰涼干燥處。5.2.10亞硒酸鹽胱氨酸增菌液5.2.10.1用途：用于沙門氏菌選擇性增菌培養。5.2.10.2 成份(g/l)：蛋白月東5.0乳糖4.0磷酸氫二鈉10.0亞硒酸氫鈉4.0l胱氨酸0.1ph7.0±0.15.2.10.3制法：稱取各成份溶于滅菌純水中，在無菌容器中溶解，分裝，每瓶100ml,備用。5.2.10.4注意事項

11、：于4°c冰箱中密封保存。5.2.11 ss瓊月旨5.2.11.1用途：用于沙門氏菌、志賀氏菌的分離。5.2.11.2 成份(g/l)：蛋白月東5.0牛肉粉5.0乳糖10.0三號膽鹽3.5檸檬酸鐵10.0檸檬酸鈉8.5中性紅0.025硫代硫酸鈉8.5瓊脂15.0煌綠0.00033ph7.0±0.15.2.11.3制法：稱取各成份溶于純水中，加熱煮沸溶解，冷至55°c,傾注平板備用。5.2.11.4注意事項：a保存于陰涼干燥處，密封、避光。b勿咼壓滅菌。5.2.12v-p半固體瓊脂5.2.12.1用途:用于細菌檢驗的vp試驗。5.2.12.2 成份(g/l)：蛋白月

12、東12.0酵母膏1.0葡萄糖10.0氯化鈉5.0瓊脂3.0ph7.3±0.15.2.12.3制法：稱取各成份于純水中，加熱煮沸至溶解，分裝試管，每管11.5ml,12rc10min高壓滅菌，立即取出冷卻備用。5.2.12.4配制試劑:甲液：q -蔡酚6.0g無水乙醇溶液100.0ml乙液:氫氧化鉀40.0g肌酸0.3g蒸徭水100.0ml先將氫氧化鉀溶于水中，再加入肌酸。甲液和乙液保存于4°c冰箱內，可使用2個月。5.2.12.5試驗方法：挑取瓊脂培養物接種vp培養基中，于36±1°c培養24h±2h,將甲液0.2ml (約6滴)加入試管中，搖

13、混均勻，再加入乙酸0.1ml (約3滴)，再 搖混均勻。陽性反應立即或15min內呈現紅色，陰性反應為銅色。陰性結果在lh后再做 一次檢查。有些試管在數小時后紅色會逐漸消失，此仍作陽性反應。5.2.12.6注意事項：保存于陰涼干燥處，密封、避光。5.2.13 7.5%氯化鈉肉湯5213用途：用于金黃色葡萄球菌的增菌培養。5213.2 成份(g/l)：蛋白豚10.0牛肉粉3.0氯化鈉75.0ph7.4±0.15213.3制法：稱取各成份溶于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝，每瓶50ml, 121°c 15min高壓滅菌備用。5.2.13.4注意事項：密封保存于陰涼干燥處。5.

14、2.14 baird-parker 培養基5.2.14.1用途：用于食品中金黃色葡萄球菌的檢驗。5214.2 成份(g/l)：胰蛋白月東10.0丙酮酸鈉10.0牛肉膏5.0甘氨酸12.0酵母膏1.0氯化鋰(6h2o)5.0瓊脂20.0ph7.4±0.15.2.14.3用法：稱取各成份于純水中，加熱煮沸至溶解，分裝每瓶95ml, 121°c15min 高壓滅菌，冷至50°c時，每95ml加入5ml亞磅酸鉀卵黃增菌液。5214.4注意事項：a保存于陰涼干燥處，密封、避光。b平板冰箱貯存不超過48小時。5.2.15酸性肉湯5215用途：用于酸性罐頭食品商業無菌檢驗。52

15、15.2 成份(g/l)：多價蛋白月東5.0酵母粉5.0葡萄糖5.0磷酸氫二鉀4.0ph5.0±0.25215.3制法：稱取各成份溶于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝，121°c20min 高壓滅菌備用。5215.4注意事項：保存于陰涼干燥處；密封、避光。5.3生化試驗培養基和試劑5.3.1尿素瓊脂基礎5.3.1.1用途：用于細菌檢驗中的尿素酶試驗。531.2 成份(g/l)：蛋白月東1.0葡萄糖1.0氯化鈉5.0磷酸二氫鉀2.0酚紅0.012瓊脂15.0ph6.8± 0.1531.3制法：稱取各成份于純水中，加熱煮沸至完全溶解，121°c15min高壓

16、滅菌, 冷至55°c以無菌技術每95ml溶液加入40%尿素水溶液5ml,混勻后制成斜面備用。531.4試驗方法：挑取瓊脂培養物接種，在36±1°c培養24h,觀察結果。尿素酶 陽性者出于產堿而使培養基變為紅色。531.5注意事項：保存于陰涼干燥處；密封、避光。5.3.2賴氨酸脫竣酶培養基532.1用途：用于細菌檢驗中的賴氨酸脫竣酶試驗。532.2 成份(g/l)：酵母膏3.0葡萄糖1.0l賴氨酸5.0浣甲酚紫0.016ph6.7± 0.15.3.2.3制法：稱取各成份于純水中，加熱煮沸至完全溶解，分裝試管，每管l-1.5ml, 121°c 15

17、min高壓滅菌備用。5.324試驗方法：從瓊脂斜面上挑取瓊脂培養物接種，在36土 1°c培養18-24h,觀 察結果。賴氨酸脫竣酶陽性者出于產堿而使培養基變為紫色。陰性者無堿性產物, 但因葡萄糖產酸而使培養基變黃色。對照管應為黃色。5.3.2.5注意事項：保存于陰涼干燥處；密封、避光。5.3.3卩引味培養基5.331用途：用于細菌靛基質試驗，亦稱色氨酸肉湯。5.3.32 成份(g/l)：蛋白月東10.05.0氯化鈉ph7.4 土 0.15.3.3.3用法：稱取各成份于純水中，加熱煮沸至完全溶解，121°c15min高壓滅菌 備用。5.3.3.4配制柯凡克試劑：對二甲氨基苯甲

18、醛 lo.og戊醇150.0ml濃鹽酸50.0ml將色澤鮮明干燥的對二甲氨基苯甲醛溶于戊醇中，緩慢攪拌加入鹽酸，加熱至 60°c,呈深黃色，靜置6-7h,變成黃色即可使用。試劑宜少量配制，不用時保存 于4°c冰箱內。久存后試液變成褐色不可使用。5.3.3.5試驗方法：挑取瓊脂培養物接種，在36±1°c培養24h,滴加柯凡克試劑0.1ml。陽性反應出現紅色環；陰性反應為黃色環。5.3.3.6注意事項：保存于陰涼干燥處；密封、避光。5.3.4硝酸鹽氧化鉀培養基5.3.4.1用途：用丁細菌檢驗中的硝酸鹽還原試驗和氧化鉀試驗。534.2成份(g/l)：蛋白月東10.0氯化鈉5.0磷酸二氫鉀0.225磷酸氫二鈉5.64硝酸鉀（無亞硝酸鹽）1.05g/l氧化鉀溶液10.0ph6.8 ±0.15.3.4.3用法：稱取各成份于純水中，加熱煮沸至完全溶解，121°c15min高壓滅菌,每100ml無菌加入0.5%氧化鉀溶液lml,分裝無菌試管備用；同時將不加氧化鉀 的培養基作為對照培養基