1、2012 級(jí)基因工程復(fù)習(xí)題名詞解釋1.限制酶：是由細(xì)菌產(chǎn)生的一類能特異識(shí)別雙鏈 DNA 中的特 定堿基序列，并在識(shí)別位點(diǎn) 切割磷酸二酯鍵的核酸內(nèi)切酶。2. 同尾酶：來源不同、識(shí)別序列不同，但切割后能產(chǎn)生相同黏性末端的限制性核酸內(nèi)切酶。3外切核酸酶：一類從多核苷酸的末端開始逐個(gè)降解核苷酸的酶。4. 同切點(diǎn)酶：一類來源于不同微生物、能識(shí)別相同序列的限制性核酸內(nèi)切酶。5. 反轉(zhuǎn)錄酶：是依賴于 RNA 的 DNA 聚合酶，是分子克隆中重要的核酸酶之一。6. 新裂酶：識(shí)別序列相同、但切割位點(diǎn)與原型酶不同的酶。7. 星號(hào)活性：是指當(dāng)條件改變時(shí)，許多酶的識(shí)別位點(diǎn)會(huì)改變，導(dǎo)致識(shí)別與切割序列的非特 異性的現(xiàn)象。

2、8. 質(zhì)粒：存在于多種宿主細(xì)胞、獨(dú)立于染色體外的可以自主復(fù)制閉合環(huán)狀的DNA 分子。9. 松弛型質(zhì)粒：其復(fù)制宿主不偶聯(lián)，每個(gè)細(xì)胞中有幾十到幾百個(gè)拷貝數(shù)的質(zhì)粒。10. 隱蔽質(zhì)粒：不賦予寄主細(xì)胞任何表型或者究竟賦予寄主細(xì)胞何種表型，迄今仍未清楚， 因此特稱這類質(zhì)粒為隱蔽質(zhì)粒。（自己搜的，正確性不明確）11. 人工染色體載體：染色體具有復(fù)制功能，利用染色體的復(fù)制元件來驅(qū)動(dòng)外源DNA 片段復(fù)制的載體。12. 表達(dá)載體：可攜帶外源 DNA 片段進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制并進(jìn)行轉(zhuǎn)錄、翻譯的載體，即用 于在宿主細(xì)胞中高水平表達(dá)外源蛋白質(zhì)的載體。13. 克隆載體：克隆和運(yùn)載目的基因并轉(zhuǎn)移到宿主細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制和擴(kuò)增的

3、載體。14. 平末端：限制性核酸內(nèi)切酶在識(shí)別序列的對(duì)稱軸上切割形成的片段末端。15. 黏性末端：是指 DNA 分子在限制酶的作用之下形成的具有互補(bǔ)堿基的單鏈延伸末端結(jié)構(gòu)，它們能夠通過互補(bǔ)堿基間的配對(duì)而重新環(huán)化起來。16. 反向 PCR 由已知的一段 DNA 序列向兩端擴(kuò)增未知核苷酸序列并能快速獲得未知序列的 PCR操作。17. PCR 平臺(tái)效應(yīng)：PCR 反應(yīng)經(jīng)過一定數(shù)量的循環(huán)后，隨著產(chǎn)物的對(duì)數(shù)積累趨于飽和，DNA片段不再呈指數(shù)積累，而進(jìn)入線性增長(zhǎng)期或靜止期的過程。18. 簡(jiǎn)并序列：同一種氨基酸具有兩個(gè)或更多個(gè)密碼子對(duì)應(yīng)，即一段氨基酸序列可以有多個(gè) 可能的編碼序列。19. 終止子：是為轉(zhuǎn)錄提供終

4、止信號(hào)的一段 DNA 序列。20. 目的基因：基因工程中克隆的目標(biāo) DNA 分子。21. 基因表達(dá)：遺傳信息從 DNA 轉(zhuǎn)到 mRNA 再到蛋白質(zhì)的過程。22. RNAi:雙鏈 RNA 寸基因表達(dá)的阻斷作用稱為 RNA 干擾。23. 感受態(tài)細(xì)胞：處于能吸收外源 DNA 分子的生理狀態(tài)的細(xì)胞。24. 簡(jiǎn)并引物：用來編碼一段短肽不同堿基序列的混合物。25. 增強(qiáng)子：是遠(yuǎn)距離調(diào)節(jié)啟動(dòng)子并提高轉(zhuǎn)錄效率的一段 DNA 序列。26. 啟動(dòng)子：是 RNA 聚合酶識(shí)別、結(jié)合并起始轉(zhuǎn)錄的一段 DNA 序列。27. 沉默子：是遠(yuǎn)距離調(diào)節(jié)啟動(dòng)子并降低轉(zhuǎn)錄效率的一段 DNA 序列。28. 盒式誘變：是一種定點(diǎn)突變技術(shù)

5、，將靶基因的一段 DNA 刪掉，并用人工化學(xué)合成所具有 的突變核苷酸的雙鏈寡核苷酸片段取代的技術(shù)。29. 基因治療：指將外源正常基因?qū)氚屑?xì)胞，以糾正或補(bǔ)償因基因缺陷和異常引起的疾病， 以達(dá)到治療目的。30. CDNA 文庫：利用某種生物的總 mRN 合成 cDNA 再將這些 cDNA 與載體連接，轉(zhuǎn)入細(xì)菌細(xì)胞中進(jìn)行保存和擴(kuò)增，稱 cDNA 文庫。31. 轉(zhuǎn)化：細(xì)菌獲得外源質(zhì)粒 DNA 產(chǎn)生新的遺傳性狀的過程。32. 基因漂移：指轉(zhuǎn)基因生物中的目的基因在生物個(gè)體、種群甚至物種間自發(fā)移動(dòng)是過程。33. 實(shí)質(zhì)等同原則：是安全評(píng)價(jià)的起點(diǎn)，是指以有安全食用歷史的傳統(tǒng)食品為基礎(chǔ)，要求轉(zhuǎn) 基因食品和它所替

6、代的傳統(tǒng)食品至少要同樣安全。34. 切口：兩個(gè)相鄰核苷酸之間缺少一個(gè)磷酸二酯鍵35. 裂口：缺少一個(gè)或幾個(gè)核苷酸36. MCS :多克隆位點(diǎn)37. YAC:酵母人工染色體38. MAC:哺乳動(dòng)物人工染色體39. TAC:可轉(zhuǎn)移人工載體填空題1. 基因工程常用的 DNA 連接酶有兩種：一個(gè)是（大腸桿菌 ）DNA 連接酶，由 NAD 供能, 另一個(gè)是（T4）DNA 連接酶，由 ATP 供能。2. 在 DNA 保存液中，常加一滴氯仿，主要是起（有效防止細(xì)菌和核酸的污染）的作用。3. 對(duì)于雙鏈 DNA 分子，在一條鏈上失去了一個(gè)磷酸二酯鍵稱為（切口），失去一段單鏈稱 為（缺口）。4. 限制性內(nèi)切核酸酶

7、的命名原則，第一個(gè)大寫字母取自（微生物屬名）的第一個(gè)字母，第二、三個(gè)字母取自（種名）的前 2 個(gè)字母，第四個(gè)字母用株名表示。5. 在 Lacl 標(biāo)記基因插入外源基因，經(jīng) IPTG 誘導(dǎo)，在 X-gal 培養(yǎng)基中顯（白）色，為邙陽 性）克隆，未插入基因的克隆顯（藍(lán)）色，為（陰）性克隆。6. 基因序列經(jīng)堿基替代、缺失或插入后，可使遺傳信息產(chǎn)生三種不同的后果，分別是（同 義突變） 、（錯(cuò)義突變）、和無義突變。7. 在分離 DNA 寸，要戴手套操作，原因是手上有（ 核酸酶）。8. 乙醇沉淀 DNA 勺原理是（乙醇可以任意比和水相混溶，乙醇與核酸不會(huì)起任何化學(xué)反應(yīng)， 對(duì)DNA 很安全，是理想的沉淀劑。）

8、9. 依據(jù)質(zhì)粒自身傳遞的性質(zhì)可以分為（ 結(jié)合型）質(zhì)粒和非結(jié)合型質(zhì)粒，依據(jù)可否引起宿 主細(xì)胞出現(xiàn)新性狀分為顯性質(zhì)粒和（ 隱性質(zhì)粒），根據(jù)質(zhì)粒的復(fù)制性可分為嚴(yán)緊型質(zhì)粒和（松弛型質(zhì)粒）。10. 抽提含 pBR322 系列質(zhì)粒的細(xì)菌前，需在培養(yǎng)基中加入一定濃度的氯霉素，此氯霉素的 作用是（抑制蛋白質(zhì)合成，阻止細(xì)菌染色體復(fù)制）。11. 基因工程眾多的工具酶可粗略分為（限制酶）、（連接酶）、（聚合酶）、（修飾酶）4 類。12. 核酸探針可分為 2 類： DNA 探針和 RNA 探針。 其中 DNA 探針又分為（單鏈 DNA 探針）和（雙鏈 DNA 探針）13. E.coli 感受態(tài)出現(xiàn)的生理時(shí)期是（對(duì)數(shù)生

9、長(zhǎng)期）14. 在質(zhì)粒 pBR322 的抗四環(huán)素基因插入一個(gè)外源 DNA 轉(zhuǎn)化細(xì)菌后，就不可以再用四環(huán)素 篩選出這種細(xì)菌了，這種現(xiàn)象稱為（插入失活）。15. 由于不同構(gòu)型的 DNA 插入 EB 的量不同，電泳時(shí)遷移率也不同，SCDNA 的泳動(dòng)速度最（快）,OCDNA 泳動(dòng)速度最（慢），L DNA 居中，通過凝膠電泳和 EB 染色的方法可將不同構(gòu)型的 DNA 分別開來。16. PCR 是 （聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)） 的簡(jiǎn)稱， PCR 反應(yīng)體系的基本要素有 （緩沖液） 、 （模板） 、 （dNTP ） 、（引物）等。17. pBR322 的構(gòu)建元件來源于三個(gè)親本質(zhì)粒： pSE2124 提供 Ampr 基因；

10、2pMB1 提供 Colei 松弛型（復(fù)制子）（Ori）:pSC101:提供（Tetr）基因。簡(jiǎn)答題、論述題1. 基因工程技術(shù)流程有哪些？答：基因工程：在體外將外源基因進(jìn)行切割并與一定的載體連接，構(gòu)成重組DNA 分子并導(dǎo)入相應(yīng)受體細(xì)胞，使外源基因在受體細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制、表達(dá)，使目的基因大量擴(kuò)增或得到 相應(yīng)基因的表達(dá)產(chǎn)物或進(jìn)行定向改造生物性狀的過程。技術(shù)流程環(huán)節(jié)：1目的基因的克隆2載體的準(zhǔn)備3目的基因與載體的連接4重組 DNA 轉(zhuǎn)化/轉(zhuǎn)染/轉(zhuǎn)導(dǎo)5重組體的篩選與鑒定6重組體的大量培養(yǎng)，外源基因表達(dá)效應(yīng)的分析與開發(fā)應(yīng)用2. 構(gòu)建克隆載體應(yīng)滿足的條件是什么？答：（1）具有對(duì)受體細(xì)胞的可轉(zhuǎn)移性，能攜帶外源

11、基因進(jìn)入宿主細(xì)胞；（2）能在宿主細(xì)胞中自主復(fù)制，并實(shí)現(xiàn)外源基因的增殖；（3）具有由單一限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)組成的多克隆位點(diǎn)，可供外源基因插入；（4）具有合適的選擇性標(biāo)記，用于含有重組質(zhì)粒的宿主細(xì)胞篩選。3. PCR 原理、反應(yīng)體系和基本過程：答：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR：是 Kary Mullis 于 1985 年發(fā)明的核酸體外擴(kuò)增技術(shù)。1） PCR 技術(shù)原理：類似于 DNA 的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。 即在 體外適合的條件下， 在引物、 模板、 dNTP Mg2+存在的情況下， 由 DNA 聚合酶催化 dNTP 合成 DNA的反應(yīng)。2） PCR 反應(yīng)體系：1

12、緩沖液 模板 dNTP耐熱的 DNA 聚合酶 引物最佳反應(yīng)條件PCF 由變性-退火-延伸三個(gè)基本反應(yīng)步驟構(gòu)成：1模板 DNA 的變性：模板 DNA 經(jīng)加熱至 93C左右一定時(shí)間后，使模板 DNA 雙鏈或經(jīng) PCR擴(kuò)增形成的雙鏈 DNA 解離，使之成為單鏈，以便它與引物結(jié)合，為下輪反應(yīng)作準(zhǔn)備；2模板 DNA 與引物的退火（復(fù)性）：模板 DNA 經(jīng)加熱變性成單鏈后，溫度降至 55C左右，引物與模板 DNA 單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；3引物的延伸： DNA 模板-引物結(jié)合物在 TaqDNA 聚合酶的作用下， 以 dNTP 為反應(yīng)原料，靶序列為模板，按堿基配對(duì)與半保留復(fù)制原理，合成一條新的與模板 DNA

13、 鏈互補(bǔ)的半 保留復(fù)制鏈。4. 影響限制酶活性的因素有哪些？答：(1) DNA 羊品的純度(2) DNA 羊品的甲基化程度(3) 緩沖液性質(zhì)(4) 酶切反應(yīng)的溫度(5) 酶的純度(6) DNA 分子的構(gòu)型(7) 酶的星號(hào)活性5. 核酸的分子雜交有哪些類型？論述在什么情況下使用這些方法？答：Southern 雜交：是將 DNA 片段從瓊脂糖轉(zhuǎn)移到濾膜上。檢測(cè)特點(diǎn) DNA2Northern 雜交：檢測(cè)某一特定 RNA 分子的方法，可用于 RNA 定性和定量分析。3菌落雜交：挑選出含有插入序列的菌落或噬菌斑。用于重組噬菌斑克隆篩選。4斑點(diǎn)印跡雜交和狹線印跡雜交：主要用于基因組中特定基因及其表達(dá)情況的

14、定性或定量 研究。5Western 雜交：檢測(cè)可知被檢生物細(xì)胞內(nèi)目的蛋白的表達(dá)與否，表達(dá)量及分子質(zhì)量等。6液相雜交：核酸酶 S1 保護(hù)分析法、引物延伸分析法和抑制性消減雜交等。6. 基因克隆會(huì)用到連接反應(yīng)，其影響因素有哪些？答：連接反應(yīng)：在 DNA 連接酶的作用下，將外源基因 DNA 片段和線性質(zhì)粒 DNA 連接起來構(gòu) 成重組質(zhì)粒的過程。影響因素：1反應(yīng)溫度2連接酶濃度3ATP 濃度4DNA 片段末端5插入片段與載體的濃度比例7. 大腸桿菌作為受體系統(tǒng)，其優(yōu)缺點(diǎn)是什么？ 答：優(yōu)點(diǎn)：1遺傳背景清楚2培養(yǎng)周期短3目標(biāo)基因表達(dá)水平高4抗污染能力強(qiáng)5代謝途徑和基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制比較清楚6有大量可供選擇利

15、用的表達(dá)載體 缺點(diǎn)：1缺少真核基因產(chǎn)物的加工系統(tǒng)，目標(biāo)蛋白無特定空間構(gòu)象2內(nèi)源蛋白質(zhì)會(huì)降解表達(dá)產(chǎn)生的目標(biāo)蛋白，造成目標(biāo)蛋白不穩(wěn)定。8.以入噬菌體為例敘述基因文庫構(gòu)建的步驟： 答：目的基因的獲得；2基因文庫第一條鏈的合成；3基因文庫第二條鏈的合成，即雙鏈的合成；4入噬菌體載體的構(gòu)建，與目的基因相互連接，形成重組子;5導(dǎo)入宿主細(xì)胞中（如大腸桿菌）進(jìn)行整合、擴(kuò)增、克隆重組子6重組子的篩選與鑒定9. 基因文庫構(gòu)建的步驟：答：（1）基因組 DNA 的分離制備（2）基因組 DNA 的片段化（3）載體制備（4）重組連接（5）噬菌體離體包裝（6）重組噬菌體感染大腸桿菌10. CDNA 基因文庫構(gòu)建的步驟：答：

16、（1）細(xì)胞總 RNA 勺提取和 mRNA 勺分離（2） 第一條 cDNA 合成 （RnaseH 的作用）（3）第二條 cDNA 合成（4）雙鏈 cDNA 克隆進(jìn)質(zhì)粒或噬菌體載體并導(dǎo)入宿主中繁殖11. 目前利用基因差異表達(dá)獲得目的基因的技術(shù)主要有哪些？技術(shù)原理是什么？它們各有 什么優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)？答：差異顯示 PCR 根據(jù)絕大多數(shù)真核細(xì)胞 mRNA3 端具有的多聚腺苷酸尾（polyA）結(jié)構(gòu), 可用含 oligo （dT）的寡聚核苷酸為引物將不同的 mRN 反轉(zhuǎn)錄成 cDNA優(yōu)點(diǎn)：速度快，操作簡(jiǎn)單，靈敏度高而且樣品需要量少，一定程度上克服了差減雜交和扣除雜技技術(shù)的不足。缺點(diǎn)：假陽性率高，獲得的 cDN

17、A 片段很短，且其 3末端含有非翻譯區(qū)，使基因分類或 功能預(yù)測(cè)的難度增大。cDNA 代表性差異分析優(yōu)點(diǎn)：假陽性低、特異性強(qiáng)、靈敏度高和重復(fù)性好缺點(diǎn)：操作復(fù)雜、實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)以及費(fèi)用高抑制性消減雜交優(yōu)點(diǎn)：假陽性率低、靈敏度高、表達(dá)效率高、操作簡(jiǎn)便。缺點(diǎn)：只能用于兩組樣品對(duì)照處理，不能提供基因表達(dá)數(shù)量上的差異。RNA 任意弓|物 PCR原理：先從樣本中提取總 RNA 用隨機(jī)引物合成 cDNA 的第一鏈，再用同樣或者不同的 引物進(jìn)行 PCR 合成第二鏈，凝膠電泳可以顯示全部的 PCF 產(chǎn)物，再從中回收差異表達(dá)的 基因片段，進(jìn)行克隆、測(cè)序。優(yōu)點(diǎn)：有利于處理較短的 cDNA 片段。缺點(diǎn)：假陽性率較高12.

18、植物基因轉(zhuǎn)化受體系統(tǒng)應(yīng)具備的條件？1高效穩(wěn)定的再生能力2較高的遺傳穩(wěn)定性3具有穩(wěn)定的外植體來源4對(duì)選擇性抗菌素敏感5對(duì)農(nóng)桿菌侵染有敏感性13. 真核生物基因工程在人類生產(chǎn)生活中的應(yīng)用：答：真核生物基因工程包括植物基因工程、動(dòng)物基因工程、微生物基因工程。植物基因工程的應(yīng)用：在植物遺傳改良中的應(yīng)用：1植物對(duì)生物逆境性的抗性基因工程。2抗非生物性逆境基因工程。3植物抗除草劑基因工程。4作物高產(chǎn)基因工程。5資源利用效率的基因工程改良。6產(chǎn)物的延熟與保險(xiǎn)。7品質(zhì)的改善。8雄性不育系的培育。9植物觀賞性狀遺傳改良。作為藥物生產(chǎn)的反應(yīng)器。1.動(dòng)物基因工程的應(yīng)用：提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能。提高轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的抗病或抗性性能。改善畜禽產(chǎn)品品質(zhì)。基因治療。2.微生物基因工程的應(yīng)用：在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用（農(nóng)藥、肥料，飼料等）。在工業(yè)領(lǐng)域的應(yīng)用（發(fā)酵工業(yè)、食品添加劑、釀酒等）。在藥物生產(chǎn)上的應(yīng)用（蛋白質(zhì)藥物、抗生素等）。在環(huán)境保護(hù)上的應(yīng)用（農(nóng)藥殘留、石油產(chǎn)品、塑料等方面的降解）。14. 轉(zhuǎn)基因生物潛在的安全隱患有哪些？請(qǐng)舉例說明。1） 對(duì)人類健康的隱患：潛在的致敏性