1、淺談雙根清腦顆粒質量標準研究【摘要】目的對雙根清腦顆粒的質量標準進行研究。方法 采用薄層色譜法鑒別慧及仁、板藍根、郁金;采用高效液相色譜 法測定葛根素的含量。結果薄層色譜分離效果較好，斑點清晰, 陰性無干擾。葛根素的線性范圍為5. 184-40. 50 u g/ml,平均加 樣回收率為99. 93%, rsd=1.81%o結論 本方法可行，重復性好，能 有效控制雙根清腦顆粒的質量。【關鍵詞】雙根清腦顆粒;葛根素;質量標準;薄層色譜法;高 效液相色譜法abstract： objective to establish the quality control standard for shuangg

2、en qingnao granules methods tlc was used to identify yiyiren semencoicis, yujin radixcurcumae, baniangen radix isatidis;and hplc was used to determine the content of puerarin in shuanggen qingnao granules results the tlc spots developed were fairly clear, and the bland test showed no interference pu

3、erarin showed a good linear relationship in the range of 5.18440.50 u g/ml, the average recovery of puerarin was 99.93%, and rsd was 1. 81% conclusion the method is accurate and quick, and can be used for the quality control of shuanggen qingnao granules. key words: shuanggen qingnao ranules;quality

4、 standard;tlc;hplc雙根清腦顆粒由葛根、板藍根、郁金、慧孩 仁等組成,具有補腎益髓養腦、益氣活血、化瘀通絡之功效。為 控制該產品質量，本實驗采用薄層色譜法對方中板藍根、慧改仁、 郁金進行定性鑒別，采用高效液相色譜法對葛根素進行定量分 析。1儀器與材料硅膠g（薄層層析用，青島海洋化工廠）;agilentlloo高效液相 色譜系統。葛根素（中國藥品生物制品檢定所提供，批號110752- 200209）;雙根清腦顆粒（本實驗室制備）。甲醇（色譜純）；其他化 學試劑均為分析純。2定性鑒別2. 1板藍根的薄層色譜鑒別取板藍根對照藥材、市售藥材、樣品、陰性對照粉末各1 g, 加稀乙醇40

5、ml,超聲處理20 min,濾過，濾液蒸干,殘渣加稀乙醇2 nil使溶解，作為供試品溶液。照薄層色譜法2005年中國藥典 （-部）附錄vib試驗，吸取上述對照藥材10 ul.市售藥材10 ul、樣品15 ul、陰性溶液15 pl,分別點于同一硅膠g薄層板 上（自然干燥）。以正丁醇-冰醋酸-水（19 : 5 : 7）為展開劑,展開, 取出，熱風吹干，噴以苗三酮試液，105 °c加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，樣品在與對照藥材相應的位置上顯相同顏色的斑 點，陰性對照無干擾。取板藍根對照藥材粉末2 g、樣品4 g、陰性對照2 g,加氯仿 40 ml,超聲40 min,濾過，濾液蒸干，殘渣

6、加氯仿1 ml使溶解，作 為供試品溶液。按薄層色譜法2005年中國藥典（一部）附錄 vib試驗，吸取上述3種溶液，分別以對照藥材、樣品、陰性對照 各10、15、20卩l點樣，點于同一硅膠g薄層板上。以苯-氯仿- 丙酮（5 : 4 : 1）為展開劑，展開，展距為8 cm,取出，晾干。供試品 色譜中，在與對照藥材相應的位置上顯相同顏色的斑點，陰性對 照無干擾。2. 2慧戲仁的薄層色譜鑒別取慧及仁對照藥材、藥材、樣品粉末、陰性對照粉末各1 g, 以10倍量70%的乙醇超聲40 min,濾過,濾液置80 °c水浴蒸干，取 樣量為1 g,加石油瞇（6090 °c） 10 ml,超聲處

7、理30 min,濾過, 濾液蒸干，殘渣加石油b （60-90 °c）1 ml使溶解，作為供試品溶 液。按薄層色譜法2005年中國藥典（一部）附錄vib試驗, 吸取上述對照藥材10 ul.藥材10 ul、樣品15 pl、陰性對照 15 pl,分別點于同一硅膠g薄層板上，以石油瞇（6090 °c）- 乙瞇-乙酸（15 : 1 : 0.01）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香 草醛硫酸溶液，于105 °c烘約5 min。供試品色譜中，在與對照藥 材、藥材相應的位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。按薄層色譜法2005年中國藥典（一部）附錄vib試驗，吸 取上述對照

8、藥材10 ul、藥材10 ul、樣品15 ul、陰性對照15 l,分別點于同一硅膠g薄層板上。以石油瞇-乙瞇-乙醇 （15 ： 1 ： 0. 05）為展開劑，展開，展距約為8 cm,取出，晾干，噴以 10%的硫酸-乙醇液，于110 £烘15 min顯色，于365 nm紫外光燈 下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材、藥材相應的位置上顯相 同顏色的斑點，陰性對照無干擾。2. 3郁金的薄層色譜鑒別取對照藥材、藥材、樣品粉末、陰性對照粗粉各2 g,以10倍 量70%的乙醇超聲40 min,濾過,濾液置80 °c水浴蒸干，取樣量為2 g,上述4種樣品粉末分別加乙醇20 ml,超聲提取3

9、0 min,濾過，濾 液蒸干，殘渣加乙醇2 ml使溶解，作為供試品溶液。按薄層色譜 法2005年中國藥典（一部）附錄vib試驗，吸取上述對照藥材 10 ul、藥材10 ul、樣品15 ul、陰性對照15 u l 4種溶液, 分別點于同一硅膠g薄層板上。以石油01（60-90 °c）-乙酸乙酯 （8 : 1.5）為展開劑，展開，取岀，晾干，噴以10%的硫酸-乙醇液，于 110 °c烘15 min顯色。供試品色譜中，制劑在與對照藥材、藥材 相應的位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。按薄層色譜法2005年中國藥典（一部）附錄vib試驗，吸 取上述對照藥材10 ul、藥材10

10、ul、樣品15 ul、陰性對照15 ul 4種溶液，分別點于同一硅膠g薄層板上。以己烷-乙酸乙酯(85 : 15)為展開劑，展開，取出，以10%磷釦酸乙醇液噴霧后，于 105 °c烘約10 mine供試品色譜中，在與對照藥材、藥材相應的 位置上顯相同顏色的斑點，陰性對照無干擾。3葛根素的含量測定3. 1色譜條件色譜柱：lichrospher c18(5 um, 4. 6 mmx250 mm);流動相： 甲醇-水(25 : 75):流速1.0 ml/min;檢測波長:250 nm;柱溫: 30 °c;理論塔板數按葛根素計應不低于2 000;進樣量4 ulo3.2對照品溶液的制

11、備精密稱取葛根素對照品4. 05 mg,置10 ml量瓶中，用30%乙醇溶 解并稀釋至刻度，搖勻，精密移取2 ml,置10 ml量瓶中，加30%乙 醇稀釋至刻度，搖勻，即得81. 0 u g/ml的對照品溶液。3. 3供試品溶液的制備取雙根清腦顆粒，研細，取0. 45 g,精密稱定，加甲醇超聲處理 30 min,定容至25 ml,取上清液，經0. 45 u m微孔濾膜過濾，即得。3. 4空白試驗取缺葛根的陰性制劑，按供試晶溶液制備方法制成葛根陰性 對照溶液。將葛根素對照品溶液、供試品溶液和葛根陰性對照溶 液，分別注入液相色譜儀中，進行測定，得到色譜掃描圖（見圖1）, 顯示供試品與葛根素在相應位

12、置有相似的峰，而陰性對照則無, 說明其它藥味不干擾葛根素的檢測。3. 5線性關系考察取32項下的對照品溶液。分別精密吸取0. 5、0.25、0.126、0. 064 ml置1 nil容量瓶中，加30%乙醇至刻度，搖勻，進樣測定。 以對照品進樣濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，則 冋歸方程為y二13.124 93x-7. 027 8,相關系數r=0. 999 7。表明 進樣量在5. 18440. 50 ug/ml范圍內線性關系良好。3. 6精密度試驗對同一葛根素對照品溶液按上述色譜條件連續測定5次，結果rsd為0.2%。試驗表明本法精密度較好。3. 7穩定性試驗對同一供試品溶液，在12

13、h內每隔一定時間測定1次,共測定5 次，結果5次測定的平均含量為29. 8 mg/g, rsd為0. 7%。3. 8重復性試驗對同一批樣品，按上述色譜條件平行測定5份。5份測定結果的 平均值為30.0 mg/g, rsd為1. 5%。表明本法的重復性較好。3.9加樣回收率測定精密稱取已知含量的雙根清腦顆粒3份,每份約0. 45 g,分別精 密添加葛根素對照品適量，按3. 3項下方法制備供試品溶液，進樣 測定,計算回收率。結果平均回收率為99. 93%, rsd= 1.81%,符合 定量分析的要求，見表1。表1回收率測定結果（略）3. 10樣品測定取3批樣品，根據3. 3項下方法制備供試品溶液,分別精密吸取 對照品溶液及供試品溶液各4 ul,注入高效液相色譜儀，測定, 結果見表2。表2樣品測定結果（略）4討論4. 1慧戎仁薄層鑒別的展開系統曾釆用石油醞（6090 &