1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)課程教學(xué)大綱課程編號(hào)：課程名稱：分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)英文名稱：analysis technique of molecular biology課程類型：專業(yè)課 必修考查總 學(xué) 時(shí)：36 學(xué)分：2.0 理論課學(xué)時(shí)：30 實(shí)驗(yàn)課學(xué)時(shí)：6適用對(duì)象：醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)專業(yè)本科學(xué)生一、課程性質(zhì)與地位分子生物學(xué)是醫(yī)學(xué)領(lǐng)域發(fā)展最快的學(xué)科之一，日新月異的技術(shù)使它逐漸成為醫(yī)學(xué)發(fā)展的重要支柱。隨著本世紀(jì)初人類基因組計(jì)劃的完成，醫(yī)學(xué)發(fā)展進(jìn)入了一個(gè)全新的時(shí)代。疾病基因的不斷發(fā)現(xiàn)和克隆，使人們對(duì)疾病的認(rèn)識(shí)也不斷深入，而這些重大的醫(yī)學(xué)進(jìn)步離不開(kāi)技術(shù)上的更新和發(fā)展，生物芯片技術(shù)、基因測(cè)序技術(shù)、

2、毛細(xì)管電泳技術(shù)等，每一次技術(shù)的進(jìn)步都為分子生物學(xué)的發(fā)展提供了有力的保障。分子生物學(xué)技術(shù)是一門重要的基礎(chǔ)和應(yīng)用課程，教學(xué)方式目前主要以理論課程為主，分基礎(chǔ)理論和基礎(chǔ)技術(shù)兩個(gè)部分，重點(diǎn)講述分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)的基礎(chǔ)理論和基礎(chǔ)知識(shí)，并引入近年發(fā)展的新理論、新技術(shù)，使學(xué)生了解和學(xué)習(xí)最新進(jìn)展和相關(guān)內(nèi)容。同時(shí)分子生物學(xué)技術(shù)最主要的作用是作為研究醫(yī)學(xué)的一種媒介和工具，具有很強(qiáng)的實(shí)踐性，其基本知識(shí)和理論來(lái)源于科學(xué)實(shí)驗(yàn)，因此現(xiàn)針對(duì)本科學(xué)生開(kāi)展了分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課程，實(shí)驗(yàn)教學(xué)是強(qiáng)化理論課的重要方式，是培養(yǎng)醫(yī)學(xué)生實(shí)驗(yàn)科學(xué)概念和實(shí)驗(yàn)技能的重要途徑，通過(guò)綜合性的實(shí)驗(yàn)可以強(qiáng)化學(xué)生對(duì)理論的深入理解和實(shí)際運(yùn)用，可以更全面直觀的分

3、析理論知識(shí)。更重要的是，實(shí)驗(yàn)教學(xué)是培養(yǎng)學(xué)生綜合分析和解決問(wèn)題的能力以及科學(xué)創(chuàng)新能力的重要方式。二、教學(xué)環(huán)節(jié)及教學(xué)方法和手段本課程是在學(xué)生系統(tǒng)學(xué)習(xí)了前期課程的基礎(chǔ)上由檢驗(yàn)教研室負(fù)責(zé)開(kāi)設(shè)的，與本課程相關(guān)的基礎(chǔ)課程有生物化學(xué)和生化技術(shù)等。本課程分為理論課程和實(shí)驗(yàn)課程兩部分。理論課主要包括基礎(chǔ)理論和基本技術(shù)，基礎(chǔ)理論主要講授基因和基因組、原核生物和真核生物基因組、人類基因組計(jì)劃、蛋白質(zhì)組學(xué)、腫瘤分子生物學(xué)等；基本技術(shù)包括了核酸提取、DNA重組技術(shù)、核酸分子雜交、聚合酶鏈反應(yīng)、DNA芯片等。實(shí)驗(yàn)操作可以使學(xué)生將晦澀的理論知識(shí)更加融會(huì)貫通，因此針對(duì)本科學(xué)生選擇性開(kāi)設(shè)了實(shí)驗(yàn)課程 真核細(xì)胞DNA分離提取及酶切

4、電泳實(shí)驗(yàn)，本實(shí)驗(yàn)是分子生物學(xué)技術(shù)的一個(gè)重要的基本技術(shù)，在分子生物學(xué)研究中，獲得相當(dāng)純度和完整性的基因組DNA，是在基因組DNA水平上進(jìn)行研究和分析的基本前提，基因組DNA樣品質(zhì)量的好壞將直接關(guān)系到后續(xù)實(shí)驗(yàn)的成敗。基因組DNA通常用于構(gòu)建基因組文庫(kù)、Southern雜交、多態(tài)性分析以及用PCR方法擴(kuò)增克隆目的基因組片斷等方面的研究，是其它許多分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)中要求學(xué)生按照相應(yīng)的理論知識(shí)獨(dú)立完成 DNA分離提取與純化的各種技術(shù)和操作。通過(guò)實(shí)驗(yàn)教學(xué)，一方面使學(xué)生鞏固所學(xué)理論，另一方面培養(yǎng)學(xué)生實(shí)踐操作技能和方法，同時(shí)也訓(xùn)練了學(xué)生運(yùn)用綜合技能的能力。三、教學(xué)內(nèi)容及要求第一章 緒論【了解】分子生

5、物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)在實(shí)驗(yàn)診斷中的應(yīng)用。第二章 原核生物基因組和病毒基因組第一節(jié) 原核生物基因組【掌握】基因的分子生物學(xué)定義 ，原核生物基因組特征，操縱子的結(jié)構(gòu)。第二節(jié) 質(zhì)粒【掌握】質(zhì)粒的定義和用途。【熟悉】質(zhì)粒的一般性質(zhì) 。第三節(jié) 病毒基因組【掌握】病毒基因組的特點(diǎn)。【了解】HBV和HIV等病毒的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。第四節(jié) 朊病毒【自學(xué)】本節(jié)內(nèi)容思考題：1、名詞解釋：基因、質(zhì)粒、操縱子2、問(wèn)答題：簡(jiǎn)述原核細(xì)胞基因組特點(diǎn)。第三章 真核生物基因組第一節(jié) 真核生物基因組特點(diǎn)【掌握】真核生物基因組的特點(diǎn)，單拷貝序列、中度重復(fù)序列和高度重復(fù)序列的概念。第二節(jié) 基因組結(jié)構(gòu)與疾病。【熟悉】染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)和主要成分、核小體是染

6、色質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單位。【了解】染色體形態(tài)、功能研究中所用術(shù)語(yǔ)與新技術(shù)簡(jiǎn)介。第三節(jié) 人類基因組與人類基因組計(jì)劃【自學(xué)】本節(jié)內(nèi)容思考題：1、名詞解釋：?jiǎn)雾樂(lè)醋印⑼怙@子、內(nèi)含子、單拷貝序列、中度重復(fù)序列、高度重復(fù)序列2、問(wèn)答題：真核生物基因組的特點(diǎn)。第四章 癌基因和抑癌基因第一節(jié) 癌基因【掌握】癌基因的概念，原癌基因激活的機(jī)制。【熟悉】sis家族、src家族、myc和myb家族、P53、RB家族及其表達(dá)產(chǎn)物。第二節(jié) 抑癌基因【掌握】抑癌基因的概念，抑癌基因失活的機(jī)制。【熟悉】抑癌基因的檢測(cè)。【了解】腫瘤發(fā)生的步驟。第三節(jié) 原癌基因和抑癌基因的檢測(cè)及評(píng)價(jià)【熟悉】原癌基因和抑癌基因的檢測(cè)。思考題：1、名詞

7、解釋：癌基因、抑癌基因2、問(wèn)答題：原癌基因的激活的機(jī)制。第五章 蛋白質(zhì)組和蛋白質(zhì)組學(xué)第一節(jié) 蛋白質(zhì)組學(xué)研究特點(diǎn)【掌握】蛋白質(zhì)組概念。【了解】蛋白質(zhì)組學(xué)研究特點(diǎn)。第二節(jié) 蛋白質(zhì)組的研究范疇【掌握】二維電泳。【熟悉】蛋白質(zhì)組的研究范疇，研究蛋白質(zhì)組的基本方法（如酵母雙雜交、凝膠滯后電泳等）。第三節(jié) 蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)及其應(yīng)用。【了解】 蛋白質(zhì)的數(shù)據(jù)庫(kù)。第四節(jié) 蛋白質(zhì)組研究在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用【了解】蛋白質(zhì)的醫(yī)學(xué)應(yīng)用。思考題：一、名詞解釋：蛋白質(zhì)組、凝膠滯后實(shí)驗(yàn)二、問(wèn)答題：1、蛋白質(zhì)和核酸相互作用的研究方法有哪些？2、二維電泳的基本原理是什么？第六章 核酸的分離和純化第一節(jié) 核酸分離與純化的設(shè)計(jì)與原則【掌握】核

8、酸的濃度和純度鑒定。第二節(jié) 基因組DNA的分離與純化【掌握】基因組DNA的分離方法和原理。第三節(jié) 質(zhì)粒DNA的提取與純化【掌握】質(zhì)粒DNA分離方法和原理。第四節(jié) RNA的分離與純化【熟悉】RNA抽提，mRNA的分離和純化。思考題：1、酚-氯仿法抽提基因組DNA的原理。2、質(zhì)粒制備的主要方法是什么？并闡明其基本原理。3、如何鑒定核酸的濃度和純度。第七章 DNA重組技術(shù)第一節(jié) 工具酶【掌握】基因重組的主要工具酶和它們的作用。第二節(jié) DNA重組載體【掌握】DNA重組的主要載體和它們各自的優(yōu)點(diǎn)。第三節(jié) DNA重組與鑒定【熟悉】克隆和DNA重組的概念，基因重組的基本步驟，載體的概念及特征，載體的篩選標(biāo)志

9、和篩選方法，轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)導(dǎo)的概念、感受態(tài)菌的概念。【了解】基因重組的發(fā)展歷史，重組DNA技術(shù)意義。第四節(jié) 外源基因的蛋白表達(dá)【掌握】啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、終止子、p因子的概念和作用;融合蛋白的概念以及表達(dá)融合蛋白的優(yōu)點(diǎn)，真核細(xì)胞表達(dá)元件，哺乳動(dòng)物基因轉(zhuǎn)移的遺傳選擇性標(biāo)記。【了解】原核和真核生物表達(dá)的區(qū)別;表達(dá)產(chǎn)物的分離與純化。第五節(jié)DNA序列測(cè)定【了解】雙脫氧末端終止法測(cè)序的原理。思考題：一、名詞解釋：非融合型表達(dá)蛋白、融合表達(dá)蛋白、包涵體載體、基因克隆、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染、轉(zhuǎn)導(dǎo)、感受態(tài)二、問(wèn)答題：1、基因重組中主要的工具酶有哪些？它們的基本作用是什么？2、什么是限制性內(nèi)切酶？有幾種限制性內(nèi)切酶？基因工程

10、中常使用的是哪一種？為什么？3、真核表達(dá)體系和原核表達(dá)體系的主要區(qū)別。第八章 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)及其在基因診斷中的應(yīng)用第一節(jié) 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)【掌握】PCR反應(yīng)的概念和原理，PCR反應(yīng)體系的組成成分。第二節(jié) 以PCR為基礎(chǔ)的相關(guān)技術(shù)【掌握】逆轉(zhuǎn)錄PCR原理和方法。第三節(jié) PCR 產(chǎn)物的檢測(cè)【掌握】限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性，單鏈構(gòu)象多態(tài)性。第四節(jié) PCR 技術(shù)在分子診斷中的應(yīng)用【了解】PCR技術(shù)在臨床醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用。思考題：一、名詞解釋：PCR、RT-PCR二、問(wèn)答題：1、PCR的基本原理是什么？PCR反應(yīng)體系中基本的反應(yīng)成分有哪些？2、PCR產(chǎn)物的檢測(cè)方法有哪些？第九章 核酸分子雜交技術(shù)與應(yīng)用【掌握】雜交

11、的基本原理，融解溫度，分子雜交的分類和應(yīng)用，Southern印跡雜交的基本過(guò)程。【熟悉】分子雜交過(guò)程，影響探針雜交的因素，探針標(biāo)記的方法，雜交信號(hào)檢測(cè)的方法。思考題：1、名詞解釋：分子雜交、探針、原位雜交、融解溫度、Southern雜交2、問(wèn)答題：分子雜交的探針的種類和特點(diǎn)。第十章 蛋白質(zhì)分析技術(shù)【自學(xué)】本章內(nèi)容第十一章 生物芯片技術(shù)與應(yīng)用【了解】生物芯片技術(shù)的應(yīng)用。思考題：1、名詞解釋：生物芯片2、問(wèn)答題：簡(jiǎn)述生物芯片的醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值第十二章 細(xì)胞凋亡和檢測(cè)技術(shù)【掌握】細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖和細(xì)胞凋亡的基本概念及其與醫(yī)學(xué)研究、醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的關(guān)系。思考題：一、名詞解釋：細(xì)胞周期、細(xì)胞周期控制點(diǎn)、細(xì)胞凋亡

12、、細(xì)胞壞死二、問(wèn)答題：1. 細(xì)胞壞死和凋亡的區(qū)別是什么?2. 如何檢測(cè)細(xì)胞凋亡的情況。四、實(shí)驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)名稱】真核細(xì)胞DNA的分離提取及酶切電泳【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?、以人外周血為原料，進(jìn)行基因組DNA的提取，從而掌握真核細(xì)胞DNA的原理、原則、提取方法，進(jìn)而掌握外源基因的基本制備方法。2、明確提取中各試劑的作用及各環(huán)節(jié)的注意事項(xiàng)。3、掌握瓊脂糖凝膠電泳分離鑒定DNA的原理和技術(shù)。【實(shí)驗(yàn)原理】真核細(xì)胞DNA分子是以核蛋白形式存在于細(xì)胞核中，制備DNA既要將其與蛋白質(zhì)、脂類和糖類等分離，又要保持DNA的完整性，因此，從全血中制備基因組DNA時(shí)，首先用去污劑Triton X-100 直接破裂紅細(xì)胞和白細(xì)胞膜，

13、使之釋放出血紅蛋白及細(xì)胞核，通過(guò)離心分離即可獲得白細(xì)胞核；用SDS破壞核膜；用EDTA抑制Dnase的活性；用酚/氯仿抽提除去蛋白質(zhì)，再用氯仿除去DNA溶液殘存的蛋白質(zhì)；最后用無(wú)水乙醇沉淀，即可獲得基因組DNA。【實(shí)驗(yàn)材料】1、器材：恒溫水浴箱，臺(tái)式冷凍高速離心機(jī)，紫外分光光度計(jì)，電泳儀，電泳槽，離心管，1.5ml Eppendorf管，剪刀，牙簽，寬口移液管(5ml、10ml)，移液器，吸頭，錐形瓶，簡(jiǎn)易凝膠紫外觀察儀或凝膠成像系統(tǒng)等。2、試劑：磷酸鹽緩沖液(PBS)、 DNA提取緩沖液、苯酚、TE緩沖液(pH8.0)、5×TBE電泳緩沖液、蛋白酶K(20mgm1)，溴化

14、乙錠(ethidium bromide，EB)溶液，氯仿，異戊醇，瓊脂糖，95乙醇，75乙醇，lkb梯度DNA分子量參照物，加樣緩沖液等。【實(shí)驗(yàn)學(xué)時(shí)】6學(xué)時(shí)【實(shí)驗(yàn)要求】掌握操作步驟【實(shí)驗(yàn)操作】1、取0.3ml抗凝血，加入1.5ml Eppendorf管中，加入1ml的細(xì)胞裂解緩沖液，充分混勻使其溶血，轉(zhuǎn)入1.5ml 離心管中，加入蛋白酶K （500ug/ml）20l，混勻。在65恒溫水浴鍋中水浴30min，也可轉(zhuǎn)入37水浴1224h，間歇振蕩離心管數(shù)次。于臺(tái)式離心機(jī)以12000 rpm離心5min，取上清液入另一離心管中。2、加2倍體積異丙醇，倒轉(zhuǎn)混勻后，可以看見(jiàn)絲狀物，用100ul 吸頭挑出

15、，晾干，用200ul TE 重新溶解。（可進(jìn)行PCR反應(yīng)等，需要進(jìn)一步純化的按下列步驟進(jìn)行）3、加等量的酚/氯仿/異戊醇振蕩混勻， 12000 rpm離心，5min。4、取上層溶液至另一管，加入等體積的氯仿/異戊醇，振蕩混勻， 12000 rpm離心，5min。5、取上層溶液至另一管，加入1/2體積的7.5mol/L乙酸氨加入2倍體積的無(wú)水乙醇，混勻后室溫沉淀2min ,12000 rpm離心,10min。6、小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上，將附于管壁的殘余液滴除掉。7、用1ml 70%乙醇洗滌沉淀物1次， 12000 rpm離心， 5min。8、小心倒掉上清液，將離心管倒置于吸水紙上

16、，將附于管壁的殘余液滴除掉，室溫干燥。9、加200ul TE重新溶解沉淀物。10、1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。【思考題】如何檢測(cè)DNA濃度及完整性？五、各教學(xué)環(huán)節(jié)學(xué)時(shí)及進(jìn)度分配表課 程 內(nèi) 容理論課時(shí)實(shí)驗(yàn)課時(shí)小計(jì)（一）緒論、原核生物基因組與病毒基因組2（二）真核生物基因組4（三）癌基因與抑癌基因2（四）蛋白質(zhì)組與蛋白質(zhì)組學(xué)2（五）核酸的分離與純化4（六）DNA重組技術(shù)6（七）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)及其在基因診斷中的應(yīng)用4 （八）核酸分子雜交技術(shù)與應(yīng)用2（九）生物芯片技術(shù)與應(yīng)用2（十）細(xì)胞凋亡和檢測(cè)技術(shù)2總 計(jì)30636六、考核方式本課程為必修考查課，考核采用形成性考試加終結(jié)性考試相結(jié)合的方式。考核要求主要是教學(xué)大綱要求的基本知識(shí)和基本理論，適當(dāng)考核學(xué)生分析問(wèn)題和解決問(wèn)題的能力，簡(jiǎn)要考核學(xué)生對(duì)前沿知識(shí)的了解程度。考核方式：理論課出勤和課堂表現(xiàn)、實(shí)驗(yàn)課考核、課程結(jié)業(yè)理論考試（閉卷）。課程結(jié)業(yè)理論考試（閉卷）題型及所