1、爐甘石薄荷腦洗劑微生物限度檢查方法建立及驗證摘要采用離心沉淀法與培養基稀釋法，對爐甘石薄荷腦 洗劑進行微生物限度檢查，結果表明各驗證菌回收率在70% 以上，表明該方法可行。關鍵詞爐甘石薄荷腦洗劑微生物限度g爐甘石薄荷腦洗劑是常用的醫院制劑，其成分為爐甘 石、氧化鋅、薄荷腦、苯酚、甘油等。具有止癢、輕度收斂、 保護皮膚的作用，用于濕疹、皮炎、皮膚瘙癢癥等，應對微 生物限度進行控制。儀器與試藥儀器:hh.bii. 420電熱恒溫培養箱,lrh-250a生化培 養箱，sartorius bs 2002s電子天平，sa-1480-ii凈化工作 臺，tdl80-2b離心機。培養基：(中檢所)營養瓊脂培養

2、基，玫瑰紅鈉瓊脂培 養基，膽鹽乳糖培養基，營養肉湯培養基，mug培養基，曙 紅亞甲藍瓊脂培養基，漠化十六烷基三甲鐵瓊脂培養基，甘 露醇氯化鈉瓊脂培養基。方法與結果菌種：枯草芽鞄桿菌cmcc(b)63501,金黃色葡萄球菌 cmcc(b)26003 .大腸埃希菌cmcc(b)44102.白色 念珠菌cmcc(f)98001.黑曲霉cmcc(f)98003 (以上菌株均為第三 代)。菌液制備：取經3035°c培養1824小時的大腸埃希 菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽胞桿菌營養肉湯培養液lml, 加0. 9%無菌氯化鈉至每毫升含菌50100cfu/ml,備用。取經2328"培養244

3、8小時的白色念珠菌改良馬丁 培養液lml,加0.9%無菌氯化鈉至每毫升含菌50 100cfu/ml,備用。取經232&c培養57天的黑曲霉改良馬丁營養瓊脂 斜面，用0. 9%無菌氯化鈉35ml將胞子洗脫，加0.9%無菌 氯化鈉至每毫升含菌50100cfu/ml,備用。供試液的制備：取供試品原液10ml,加ph7. 0氯化鈉- 蛋白月東緩沖液至100ml,混勻。吸取上述混合液30ml,以500 轉/分的速度離心5分鐘，取上清液，以3000轉/分的速度 離心20分鐘，棄去上清液，沉淀加ph7.0氯化鈉-蛋白豚緩 沖液補至30ml,作為1 ： kg-*210的供試液。方法驗證過程：驗證試驗進

4、行3次獨立的平行試驗，并 分別計算各試驗菌的回收率。試驗組：細菌，取1 : kg-*2 10供試液1ml及50 loocfu試驗菌至同一平皿中，立刻傾注營養瓊脂培養基，每 株菌株(大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽胞桿菌)做 2份平行試驗。霉菌及酵母菌：取1 ： kg-*210供試液1ml 及50loocfu試驗菌至同一平皿中，立刻傾注玫瑰紅鈉瓊 脂培養基，每株菌株（白色念珠菌、黑曲霉）做2份平行試 驗。菌液組：取菌液lml加入平皿中，立刻加入相應的瓊脂, 各菌株做2份平行試驗。供試品對照組：按試驗組的方法不加菌液，測定供試品 的本底菌數。稀釋劑對照液：取上述菌液（枯草芽鞄桿菌、金黃色葡 萄球

5、菌、大腸埃希菌）各30ml,以500轉/分的速度離心5 分鐘，取上清液，以3000轉/分的速度離心20分鐘，棄去 上清液，沉淀加ph7. 0氯化鈉-蛋白豚緩沖液補至30ml,取 lml至平皿中，立刻傾注營養瓊脂培養基，每株菌株（大腸 埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽范桿菌）做2份平行試驗。計算公式：結果：細菌、霉菌及酵母菌回收率試驗采用離心沉淀法, 稀釋劑對照組及試驗組的回收均在70%以上，表明可用上述 方法檢查細菌、霉菌及酵母菌（見表1、2）o控制菌（金黃色葡萄球菌、銅綠假單匏菌）檢查方法的 驗證：菌種，銅綠假單胞菌cmcc（b） 10104.金黃色葡萄球菌 cmcc（b）26003.大腸埃希

6、菌cmcc（b）44102 （以上菌株均為第 三代）。菌液的制備：取經3035°c培養1824小時的大腸埃 希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌營養肉湯培養液lml, 加0. 9%無菌氯化鈉至每毫升含菌10100cfu/ml,備用。供試液的制備：取供試品原液10ml,加ph7. 0氯化鈉- 蛋白豚緩沖液至100ml,混勻。金黃色葡萄球菌：試驗組：取供試液10ml及金黃色 葡萄球菌10loocfu加入營養肉湯培養基100ml中，置35t 培養箱中培養1824小時。陰性對照組：取供試液10ml 及大腸埃希菌10loocfu加入營養肉湯培養基100ml中， 置351培養箱中培養1824小時。

7、結果：取兩組培養物分別劃線于甘露醇氯化鈉瓊脂培養 基中，試驗組檢出金黃色葡萄球菌，陰性對照組未檢出大腸 埃希菌，表明上述方法可用于檢查金黃色葡萄球菌（見表2）o 銅綠假單胞菌：試驗組：取供試液10ml及金黃色葡 萄球菌10loocfu加入膽鹽乳糖培養基100ml中，置35°c 培養箱中培養1824小時。陰性對照組：取供試液10ml 及大腸埃希菌10loocfu加入膽鹽乳糖培養基100ml中， 置35°c培養箱中培養1824小時。結果：取兩組培養物分別劃線于漠化十六烷基三甲錢瓊 脂培養基中，試驗組檢出銅綠假單胞菌，陰性對照組未檢出 大腸埃希菌，表明上述方法可用于檢查銅綠假單胞