1、項目負責人:驗證類別：方法驗證驗證領導小組審查匯簽:姓名部門職務或崗位簽字日期總經理質量受權人質量部經理生產技術部經理設備動力部經理物料管理部經理質量部QA主管質量部QC主管生產技術部提取車間主任生產技術部制劑車間主任1. 主題內容細菌、霉菌及酵母菌計數用的培養基應進行培養基的適用性檢查。本次驗證的目的是確認營養瓊脂培養基和玫瑰紅鈉瓊脂培養基適合細菌、霉菌及酵母菌數測定。2. 適用范圍本方案適用于我公司培養基適用性檢查方法的驗證。3. 簡介3.1概述：細菌、霉菌及酵母菌計數用的培養基應進行培養基的適用性檢查，成品培養基、由脫水培養基或按處方配制的培養基均應檢查。為保證營養瓊脂培養基和玫瑰紅鈉瓊

2、脂培養基適合細菌、霉菌及酵母菌數測定，故對該培養基的適用性進行驗證。3.2驗證依據驗證依據驗證與確認管理規程、驗證與確認SOP、中國藥典2010版一部附錄XM C微生物限度檢查法。4. 驗證目的確認營養瓊脂培養基和玫瑰紅鈉瓊脂培養基適合細菌、霉菌及酵母菌數測定。5. 實施驗證人員及職責部門人員姓名職責及分工質量部QC主管負責起草驗證方案并組織實施，總結驗證結果、起草驗證 報告。質量部經理負責審核驗證方案及報告，負責驗證工作的組織實施。確認/驗證管理員負責驗證工作的組織與協調。6.變更和偏差處理驗證過程中如果出現偏差和變更，應立即通知確認與驗證小組并對偏差和變更進行詳細記錄（參見偏差處理單，變更

3、處理單），分析偏差產生的根本原因并提出解決方法。所有偏差和變更得到有效處理后，驗證方可進入 下一步驟。偏差處理單和變更處理單經過批準后其原件必須附在驗證報告中。變更和偏差處理記錄出現階段變更和偏差說明處理措施處理結果備注本次驗證無變更和偏差情況本次驗證發生變更和偏差差情況檢查人/日期：復核人/日期:7.驗證內容7.1試驗材料被驗證產品：營養瓊脂培 養基、 玫瑰紅鈉瓊脂培 養基7.2儀器設備立式壓力蒸汽滅菌器722 BSC-1300- H -A2 生物安全柜723 SW-CJ-1D單人凈化操作臺7.2.4 SPX-250B-Z生化培養箱7.2.5 DH-400電熱恒溫培養箱7.2.6 Kxh-2

4、02-2A恒溫干燥箱7.3驗證用培養基名稱生產廠家批號營養瓊脂培養基營養肉湯培養基玫瑰紅鈉瓊脂培養基改良馬丁培養基改良馬丁瓊脂培養基營養瓊脂對照培養基玫瑰紅鈉瓊脂對照培養基酵母浸出粉胨匍萄糖瓊脂培養基7.4驗證用菌株：（第代）驗證菌株申羔甘 培養基培養溫度培養時間（小時）大腸埃希菌營養肉湯3035 C1824金黃色葡萄球菌營養肉湯3035 C1824枯草芽孢桿菌營養肉湯3035 C1824白色念珠菌改良馬丁培養基2328 C2448黑曲霉菌改良馬丁瓊脂培養基2328 C57 （天）7.577.5培訓驗證方案起草人在方案批準后對本次驗證相關人員進行培訓，并記錄在相關附件中。如果在驗證中涉及到其他

5、培訓，培訓記錄的復印件附在驗證報告中。培訓內容培養基適用性檢查驗證方案培訓老師單位是否外聘老師是否職稱或職務培訓開始時間培訓結束時間序號受訓人簽至U序號受訓人簽至U1熊丹82楊澤明93王淇104顏敏11512613714應到人數實到人數授課人意見（培訓是否達到效果、對下次培訓有何建議等）：授課人簽名:日期：7.6驗證方法761菌液制備761.1接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、與枯草芽孢桿菌的新鮮培養物至營養肉湯培養基中，于3035 C培養1824小時。取經3035C培養1824小時的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、與枯草芽孢桿菌營養肉湯新鮮培養物1ml加入到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀

6、釋至10-610-7約為50100cfu / ml的菌懸液備用。761.2接種白色念珠菌的新鮮培養物至改良馬丁培養基中，于2328C培養2448小時。取經2328C培養2448小時的白色念珠菌改良馬丁液體培養物1ml加入到9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍稀釋至10-5約為50100cfu / ml的菌懸液備用。接種黑曲霉菌的新鮮培養物至改良馬丁瓊脂斜面培養基上，于2328C培養57天，加入35ml含0.05% （ ml/ml ）聚山梨脂80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，用適宜方法吸出孢子懸液至無菌試管內，用含0.05% （ ml/ml ）聚山梨脂80的0.9%無菌氯化鈉溶液

7、制成每1ml含孢子數50100cfu / ml的菌懸液備用。7.7菌液計數：（每種菌液接種2個平皿）大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌與枯草芽孢桿菌分別取1ml接種至營養瓊脂培養基中，置3035C培養48小時；白色念珠菌、黑曲霉分別取1ml接種至玫瑰紅鈉瓊脂培養基，置2328C培養72小時。菌落計數結果（2個平皿計數取平均值）見下表菌落計數結果（cfu / ml）試驗次數10-5稀釋10-6稀釋10-7稀釋123123123大腸埃希菌金黃色葡萄球菌枯草芽孢桿菌白色念珠菌黑曲霉7.8適用性檢查：取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的菌液（50100cfu/ml ）各1ml，分別注入無菌平皿中，立即

8、傾注營養瓊脂培養基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置 3035C培養48小時，計數；取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（50100cfu/ml ）各1ml，分別注入無菌平皿中， 立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂培養基，每株試驗菌平行制備 2個平皿，混勻，凝固，置 2328C培養72小時，計數。782取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的菌液（50100cfu/ml ）各1ml，分別注入無菌平皿中，立即傾注營養瓊脂對照培養基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置 3035C培養48小時，計數;取白色念珠菌、黑曲霉菌的菌液（50100cfu/ml ）各1ml，分別注入無菌平皿中，立即傾注玫瑰紅鈉瓊脂對照培養基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置 2328 C培養72小時，計數。結果見附表7.9.驗證周期原檢驗條件發生改變時，檢查方法應重新驗證。附表：計數培養基適用性檢查驗證記錄試驗時間 年月日完成時間 年月日驗證菌株平皿號供試品組cfu