1、去卵巢大鼠端腦皮質和海馬病理改變及氨基胍和補腎方藥的防治效應【摘要】 目的 探討去卵巢大鼠端腦皮質和海馬病理改變及氨基胍和補腎方藥的防治效應，為阿爾茨海默病防治藥物篩選提供參考。方法 將36只雌性SD大鼠隨機分為假切除組、去卵巢組、氨基胍防治組和補腎方藥防治組，各9只。去卵巢組、氨基胍防治組和補腎方藥防治組行背部切口切除雙側卵巢，假切除組切除腹腔等體積的脂肪組織。切除卵巢4周后氨基胍防治組飲用1鹽酸氨基胍水溶液，劑量為鹽酸氨基胍50 mg/(kg·d)；補腎方藥防治組予補腎方藥灌胃，劑量為生藥6.3 g/(kg·d)；去卵巢組和假切除組予與補腎方藥防治組相應容積自來水灌胃。

2、喂養16周后，取腦組織觀察端腦皮質和海馬的病理改變。結果 去卵巢組大鼠端腦皮質及海馬組織出現神經元顆粒變性和神經原纖維纏結等，氨基胍防治組和補腎方藥防治組神經元的變性現象及神經原纖維纏結明顯改善，且在受損區周圍有致密的神經纖維網出現。結論 去卵巢大鼠可出現阿爾茨海默病樣腦病理改變，氨基胍和補腎方藥均可防治上述病理改變且促進腦受損區周圍致密神經纖維網形成。 【關鍵詞】 阿爾茨海默病 補腎藥 動物 實驗 端腦 海馬 【Abstract】 Objective To explore the pathological changes of brain in ovariectomied rats and

3、the preventive effects of both aminoguanidine and TKR, supply some experimental references for preventive drugs screening of AD. Methods Thirty-six Sprague-Dawley female rats (nine months of age) were randomly divided into four groups: Sham group, OVX group, AG group and TKR group. After 16 weeks, w

4、e got the brain tissues of the rats and observed the pathological changes of both cerebral cortex and hippocampus. Results There was neuronal granular degeneration and the tangles of nerve fiber in cerebral cortex and hippocampus of ovariectomized rats. AG and TKR could improve the neuronal granular

5、 degeneration, decrease the tangles of nerve fiber in cerebral cortex and hippocampus and increase the compliance of neuron synapse. Conclusion There are some AD-like pathological changes in the brain of ovariectomized rats. Nerve fiber of cerebral cortex and hippocampus formation was thickened, and

6、 both AG and TKR have preventive effects on the brain above mentioned, and can shape. 【Key words】 Alzheimer's disease (AD); Tonifying kidney recipe (TKR); Telencephalon; Hippocampus阿爾茨海默病（alzheimer's disease，AD）是一種中樞神經系統退行性病變，女性患病率為男性的1.53倍，且提示雌激素缺乏在女性AD發生發展中具有重要意義1。本實驗采用摘除大鼠雙側卵巢模擬絕經后狀態，通過對腦

7、組織病理改變的研究，探討AD的發病機制和篩選防治藥物。1 材料與方法1.1 材料1.1.1 實驗動物 9個月齡SD雌性大鼠36只，體質量320380 g，由河北省實驗動物中心提供，動物合格證號：609068。普通大鼠飼料常規喂養。1.1.2 藥物及試劑 補腎方藥由熟地黃、淫羊藿、肉蓯蓉、川芎等組成，由石家莊樂仁堂醫藥集團股份有限公司中藥飲片廠提供，經河北醫科大學藥用植物教研室鑒定為純品。熟地黃、淫羊藿、肉蓯蓉、川芎按3321比例配伍，水煎取汁，藥物濃度為1 g生藥/mL。鹽酸氨基胍（aminoguanidine, AG）為Sigma公司產品。1.2 實驗方法1.2.1 造模及給藥方法 將SD雌

8、性大鼠36只隨機分為假切除組、去卵巢組、氨基胍防治組和補腎方藥防治組，每組9只。去卵巢組、氨基胍防治組和補腎方藥防治組行背部切口切除雙側卵巢，假切除組切除腹腔等體積的脂肪組織。切除卵巢4周后，氨基胍防治組飲用1鹽酸氨基胍水溶液，劑量為50 mg/（kg·d）鹽酸氨基胍3；補腎方藥防治組中藥灌胃，每日1次，劑量為6.3 g/kg體質量；去卵巢組和假切除組予補腎方藥防治組相應容積自來水灌胃。1.2.2 大鼠組織的灌注固定 給藥16周后，將大鼠用4的4多聚甲醛灌注液灌注固定，直到鼻尖變硬。取出灌注固定后的大腦，浸于4%多聚甲醛中備用。1.2.3 腦組織形態學檢查 將固定的腦組織經常規脫水、

9、透明、浸蠟、包埋、切片、脫蠟，分別進行HE染色和嗜銀（改良的Bielschow-sky法）染色，光鏡下觀察端腦皮質及海馬各區的病理變化。2 結果 假切除組大鼠端腦皮質和海馬結構正常，神經元胞膜、核膜完整，海馬錐體細胞排列整齊，層次清楚。去卵巢組端腦皮質、海馬彌漫性萎縮，腦溝變寬，腦室擴大，神經元胞體出現大小不同的空泡，嗜銀染色可見神經原纖維纏結。氨基胍防治組和補腎方藥防治組端腦皮質、海馬組織錐體細胞、顆粒細胞核仁清楚可見，胞膜、核膜完整，細胞排列比較整齊，顆粒變性細胞減少，且在受損區周圍有致密的神經纖維網出現（見封3圖13）。3 討論 AD是中樞神經系統進行性退變，通常以進行性記憶能力減退和喪

10、失為首發癥狀，典型的病理特征是端腦皮質出現神經元細胞外老年斑，細胞內神經原纖維纏結和神經元顆粒空泡變性。AD婦女血漿中雌激素水平較同齡婦女低，手術絕經常伴有亞臨床認知功能障礙等1，提示雌激素缺乏在AD的發病中具有重要意義1,2。 本實驗研究顯示，切除卵巢后，去卵巢組大鼠端腦皮質和海馬神經細胞廣泛變性，有大小不同的空泡，神經原纖維纏結，錐體細胞排列紊亂等，這些表現與AD的特征性病理改變有相似之處。氨基胍為高級糖化終末產物(AGEs)特異性抑制劑，經其干預后，端腦皮質和海馬病理明顯改善，顆粒變性細胞減少，在受損區周圍有致密的神經纖維網出現，提示氨基胍可能抑制腦組織中高級糖化終末產物的形成，對維持腦

11、組織正常蛋白更新和降低異常蛋白蓄積，增加神經元突觸的可塑性具有重要作用4。據報道，在動物幼年過后，它們的大腦開始表現出與成年動物相似的結構，可塑性減少5。 中醫學認為，腎主藏精和生殖。醫學心悟曰“腎主智”，腎虛則智不足，說明腦髓有賴于腎精不斷化生和充養，如果腎中精氣不足，氣血兩虧則腦失滋養而枯萎，萎則神機失用，愚笨呆癡，遇事遺忘。因此，對于老年性癡呆患者，中醫藥多采用補腎壯陽、填補精血法治療。補腎方藥方中熟地黃、淫羊藿益腎填精，為君；肉蓯蓉溫補腎陽，為臣；川芎既能辛通活血，同時可消除熟地黃滋膩之弊，為佐。諸藥合用，共奏溫腎壯陽、填補精血之功。現代藥理學研究表明，熟地黃具有性激素樣作用，能降低血

12、清膽固醇和甘油三酯，并能改善腦灌流量，降低血清中過氧化脂質含量，具有清除自由基作用6；淫羊藿具有提高動物耐缺氧能力；肉蓯蓉含有雌二醇類似物6；川芎具有清除自由基的作用7。補腎方藥干預后，腦組織病理變化明顯好轉，提示補腎中藥能抑制切除卵巢或絕經導致的腦退化，其機制可能與補腎中藥能增加尿中可溶性AGE-肽的含量，降低腦組織AGEs積累，從而使腦組織-淀粉樣肽含量減少，改善學習記憶，改善神經元的變性和神經纖維的纏結有關8。【參考文獻】 1 Yue Y,Hu L,Tian QJ,et al.Effects of long-term,low-dose sex hormone replacement th

13、erapy on hippocampus and cognition of postmenopausal women of different apoE genotypesJ.Acta Pharmacol Sin,2007,28(8):1129-1135.2 郭蓉.絕經后雌激素水平與阿爾茨海默病的關系分析J.實用老年醫學,2007,21(1):45-46.3 Soulis-Liparota T,Cooper M,Papazoglou D,et al.Retardation by aminoguanidine of development of albuminuria, mesangial ex

14、pansion, and tissue fluorescence in streptozocin-induced diabetic rat J.Diabetes,1991,40(10)：1328-1334.4 王悅芬,李恩,薛智權,等.氨基胍對去卵巢大鼠大腦皮質、海馬晚期糖化終末產物及-淀粉樣肽含量的影響J.基礎醫學與臨床,2004,24(2):232-233.5 He HY, Hodos W, Quinlan EM.Visual deprivation reactivates rapid ocular dominance plasticity in adult visual cortexJ.J Neurosci,2006,26(11):2951-2