1、目的與要求目的與要求1.初步掌握臨時(shí)制片技術(shù)和顯微繪圖的方法；初步掌握臨時(shí)制片技術(shù)和顯微繪圖的方法；2.熟悉光鏡下動(dòng)、植物細(xì)胞的基本形態(tài)、結(jié)熟悉光鏡下動(dòng)、植物細(xì)胞的基本形態(tài)、結(jié)構(gòu)；構(gòu)；3. 掌握活細(xì)胞計(jì)數(shù)的使用方法。掌握活細(xì)胞計(jì)數(shù)的使用方法。4.掌握顯微測微尺的使用方法。掌握顯微測微尺的使用方法。臨時(shí)制片方法及細(xì)胞形態(tài)的觀察臨時(shí)制片方法及細(xì)胞形態(tài)的觀察（一）人口腔黏膜上皮細(xì)胞制片與觀察（一）人口腔黏膜上皮細(xì)胞制片與觀察取一載玻片，夾持載玻片兩端，用清潔紗取一載玻片，夾持載玻片兩端，用清潔紗布擦凈；布擦凈；在載玻片中央滴在載玻片中央滴1滴滴0 .5%次甲基藍(lán)染液；次甲基藍(lán)染液；用消毒牙簽的鈍端輕

2、輕刮取頰部內(nèi)側(cè)的口用消毒牙簽的鈍端輕輕刮取頰部內(nèi)側(cè)的口腔黏膜上皮細(xì)胞；腔黏膜上皮細(xì)胞；將牙簽在載玻片的染液中來回滾動(dòng)數(shù)次；將牙簽在載玻片的染液中來回滾動(dòng)數(shù)次；染色染色2-3分鐘，蓋上蓋玻片，注意不要有分鐘，蓋上蓋玻片，注意不要有氣泡產(chǎn)生；氣泡產(chǎn)生；觀察。先低倍，再高倍。細(xì)胞核被染成深觀察。先低倍，再高倍。細(xì)胞核被染成深藍(lán)色。藍(lán)色。（二）洋蔥表皮細(xì)胞的制片與觀察（二）洋蔥表皮細(xì)胞的制片與觀察取一擦凈的載玻片，滴取一擦凈的載玻片，滴1滴滴1%碘液；碘液；將洋蔥嫩莖用小刀切成小塊，取將洋蔥嫩莖用小刀切成小塊，取1塊肉塊肉質(zhì)鱗葉，用鑷子在其內(nèi)表面輕輕撕下一質(zhì)鱗葉，用鑷子在其內(nèi)表面輕輕撕下一小塊表皮，再

3、用剪刀剪成小塊，置于載小塊表皮，再用剪刀剪成小塊，置于載玻片的染液中鋪平；玻片的染液中鋪平；染色染色2-3分鐘，蓋上蓋玻片；分鐘，蓋上蓋玻片；先低倍，再高倍。細(xì)胞核被染成深黃色。先低倍，再高倍。細(xì)胞核被染成深黃色。細(xì)細(xì) 胞胞 計(jì)計(jì) 數(shù)數(shù)細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理細(xì)胞計(jì)數(shù)的原理 細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，先將培養(yǎng)細(xì)胞或血細(xì)胞細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，先將培養(yǎng)細(xì)胞或血細(xì)胞稀釋成細(xì)胞懸液，然后將細(xì)胞懸液滴入細(xì)稀釋成細(xì)胞懸液，然后將細(xì)胞懸液滴入細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)，計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)室四大格胞計(jì)數(shù)板內(nèi)，計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)室四大格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。根據(jù)計(jì)數(shù)室的容積及稀釋倍內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。根據(jù)計(jì)數(shù)室的容積及稀釋倍數(shù)，即可計(jì)算出細(xì)胞濃度。數(shù)，即可計(jì)算出細(xì)胞濃度。1.制

4、備血細(xì)胞懸液制備血細(xì)胞懸液 取取1只乙醚麻醉過的蟾蜍，心臟取血只乙醚麻醉過的蟾蜍，心臟取血1ml，用，用ringer液稀釋一定倍數(shù)制成液稀釋一定倍數(shù)制成細(xì)胞懸液；同時(shí)用蟾蜍血制備血涂細(xì)胞懸液；同時(shí)用蟾蜍血制備血涂片，室溫晾干備用；片，室溫晾干備用；2 . 熟悉血細(xì)胞計(jì)數(shù)板熟悉血細(xì)胞計(jì)數(shù)板 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板呈長方形，有血細(xì)胞計(jì)數(shù)板呈長方形，有2個(gè)計(jì)數(shù)室。每個(gè)個(gè)計(jì)數(shù)室。每個(gè)計(jì)數(shù)室分為計(jì)數(shù)室分為9個(gè)大正方格，每個(gè)大格邊長個(gè)大正方格，每個(gè)大格邊長1 mm,計(jì)數(shù)室的底與蓋玻片間的距離為計(jì)數(shù)室的底與蓋玻片間的距離為0.1mm，即每，即每大格的容積為大格的容積為1mm1mm 0.1mm =0.1mm3 四角的每

5、個(gè)大格被分為四角的每個(gè)大格被分為16個(gè)中格；中央的大格個(gè)中格；中央的大格被分為被分為25個(gè)中格，每個(gè)中格被分為個(gè)中格，每個(gè)中格被分為16個(gè)小格。個(gè)小格。3. 滴片滴片 將蓋玻片擦凈，蓋在血球計(jì)數(shù)板槽上，將蓋玻片擦凈，蓋在血球計(jì)數(shù)板槽上，取制備好的蟾蜍血細(xì)胞懸液取制備好的蟾蜍血細(xì)胞懸液1滴滴于血球滴滴于血球計(jì)數(shù)板的蓋玻片一側(cè)邊緣，讓細(xì)胞懸液計(jì)數(shù)板的蓋玻片一側(cè)邊緣，讓細(xì)胞懸液自然流入計(jì)數(shù)室內(nèi)。注血細(xì)胞懸液不可自然流入計(jì)數(shù)室內(nèi)。注血細(xì)胞懸液不可滴得過多，如溢出或蓋玻片內(nèi)有氣泡必滴得過多，如溢出或蓋玻片內(nèi)有氣泡必須重做，否則將影響計(jì)數(shù)結(jié)果。須重做，否則將影響計(jì)數(shù)結(jié)果。4. 計(jì)計(jì) 數(shù)數(shù) 在低倍鏡下數(shù)出計(jì)

6、數(shù)板上計(jì)數(shù)室四角大在低倍鏡下數(shù)出計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)室四角大格中的細(xì)胞數(shù)，如細(xì)胞壓在格線上時(shí)，格中的細(xì)胞數(shù)，如細(xì)胞壓在格線上時(shí)，數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。5. 細(xì)胞濃度計(jì)算細(xì)胞濃度計(jì)算 將四大格的細(xì)胞總數(shù)除以將四大格的細(xì)胞總數(shù)除以4，得出平均每大格的細(xì)，得出平均每大格的細(xì)胞數(shù)，每大格的容積為胞數(shù)，每大格的容積為0.1mm3 ，乘以，乘以10000即為即為1000mm3（1ml）。）。 不同稀釋倍數(shù)細(xì)胞懸液的細(xì)胞濃度可用下式計(jì)算：不同稀釋倍數(shù)細(xì)胞懸液的細(xì)胞濃度可用下式計(jì)算： 細(xì)胞濃度（細(xì)胞數(shù)細(xì)胞濃度（細(xì)胞數(shù)/ml)=( 四大格的細(xì)胞數(shù)四大格的細(xì)胞數(shù)/4）10000 稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)

7、 應(yīng)用顯微鏡的成像原理，同時(shí)借助顯微鏡的鏡臺測微尺和目鏡測微尺，兩尺配合使用，進(jìn)行測量和運(yùn)算，得出細(xì)胞的大小顯微測量的原理物鏡測微尺目鏡測微尺測微尺的使用操作 1. 卸下目鏡的上透鏡，將目鏡測微尺有刻度一面向下裝在目鏡鏡面上，再旋上目鏡的上透鏡。2. 將鏡臺測微尺有刻度一面朝上放在載物臺上夾好，使測微尺刻度位于視野中央。調(diào)焦至看清鏡臺測微尺的刻度。3. 小心移動(dòng)鏡臺測微尺和目鏡測微尺(如目鏡測微尺刻度模糊，可轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡上透鏡進(jìn)行調(diào)焦)，使兩尺左邊的“0”點(diǎn)一直線重合，然后由左向右找出兩尺另一次重復(fù)的直線(圖)。4.記錄兩條重合線間目鏡測微尺和鏡臺測微尺的格數(shù)。按下式計(jì)算目鏡測微尺每格的長度等于多

8、少m目鏡測微尺每格的長度/ m=鏡臺測微尺的格數(shù)/目鏡測微尺的格數(shù) 目鏡測微尺量測倍率比照表目鏡測微尺量測倍率比照表 細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)繪圖方法與要求 1在仔細(xì)觀察的基礎(chǔ)上，選擇典型結(jié)構(gòu)進(jìn)行描繪，要求真實(shí)、準(zhǔn)確（注意各部結(jié)構(gòu)的比例關(guān)系）。2用鉛筆繪圖，線條要明確清晰，圖的深淺明暗一律以點(diǎn)的疏密來表示，點(diǎn)要圓而一致，不得用涂暗影或進(jìn)行其他美術(shù)加工。3各部結(jié)構(gòu)名稱要在一側(cè)引直線注明。各引線要平行不得交叉。4每幅圖的大小、位置在紙面上必須安排得當(dāng)并注意紙面的清潔。實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)報(bào)告在低倍鏡下數(shù)出計(jì)數(shù)板四角四大格中血細(xì)胞數(shù)，然后取下蓋玻片，將血細(xì)胞記數(shù)在低倍鏡下數(shù)出計(jì)數(shù)板四角四大格中血細(xì)胞數(shù)，然后取下蓋玻片

9、，將血細(xì)胞記數(shù)板沖洗干凈，重新滴片、記數(shù)，共三次。取板沖洗干凈，重新滴片、記數(shù)，共三次。取3次記數(shù)的平均數(shù)代入公式計(jì)算出結(jié)次記數(shù)的平均數(shù)代入公式計(jì)算出結(jié)果。果。一、分別求出使用低倍鏡一、分別求出使用低倍鏡(10x)，高倍鏡，高倍鏡(40x)時(shí)目鏡測微尺每格代表的長度：時(shí)目鏡測微尺每格代表的長度： 低倍鏡：目鏡測微尺每格代表的長度低倍鏡：目鏡測微尺每格代表的長度= xlo(m)= m 高倍鏡：目鏡測微尺每格代表的長度高倍鏡：目鏡測微尺每格代表的長度= xlo(m)= m 二、分別繪制所觀察的二、分別繪制所觀察的高倍鏡下人口腔黏膜上皮細(xì)胞高倍鏡下人口腔黏膜上皮細(xì)胞并注明基本結(jié)構(gòu)。并注明基本結(jié)構(gòu)。 三三、用測微尺測量不同材料各種細(xì)胞的大小后，制表格表示測量結(jié)果用測微尺測量不同材料各種細(xì)胞的大小后，制表格表示測量結(jié)果四四、計(jì)算蟾蜍紅細(xì)胞的核質(zhì)比例。、計(jì)算蟾蜍