1、生化檢驗(yàn)技術(shù)基礎(chǔ)與進(jìn)展一、比色分析波長(zhǎng)的選擇可見(jiàn)綠色帶黃深黃桔紅深紅深紫青紫紫藍(lán)藍(lán)色帶綠綠色帶藍(lán)深綠ultra-violet紫外200400深紫深紅桔紅深黃綠色帶黃暗綠綠色帶藍(lán)藍(lán)色帶綠紫藍(lán)青紫被測(cè)溶液顏色顏色750800610750595610560580580595500560490500480490435480400435波長(zhǎng)(nm)比色法舉例蛋白質(zhì)中的肽鍵+cu 2+ 堿性條件 紫紅色絡(luò)合物引起在波長(zhǎng)540二、分光光度計(jì) 雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)三、酶法分析酶催化特點(diǎn)高度的特異性高催化效率作用條件溫和酶的活性部位底物結(jié)合部位催化部位酶的輔助因子金屬離子輔基和輔酶nad ，nadp酶的分類(lèi)1. 氧

2、化還原酶2. 轉(zhuǎn)移酶3. 水解酶4. 裂合酶5. 異構(gòu)酶6. 合成酶酶的系統(tǒng)命名應(yīng)將酶的一種或兩種底物以及催化反應(yīng)的性質(zhì)明確標(biāo)明。乳酸脫氫酶 l-乳酸：nad+氧化還原酶肌酸激酶 atp：肌酸磷酸轉(zhuǎn)移酶酶的活性單位一國(guó)際單位為在一分鐘內(nèi)催化轉(zhuǎn)變1個(gè)微摩爾的反應(yīng)物的酶量.iuu u/l1katal為每秒鐘轉(zhuǎn)化1mole底物的酶量1國(guó)際單位=16.67nkatal1katal=6107國(guó)際單位酶活性測(cè)定影響酶活性測(cè)定：底物、激活劑、抑制劑、緩沖液、ph、溫度、酶濃度。在最適條件下以求達(dá)到最大的反應(yīng)速度。但由于底物的溶解度低，或售價(jià)太高，或需連鎖的酶反應(yīng)，則必須對(duì)測(cè)定條件作修正。酶活性測(cè)定的最適條件

3、酶促反應(yīng)的兩個(gè)階段 反應(yīng)級(jí)數(shù) 0級(jí) 1級(jí) p 酶反應(yīng)進(jìn)程和酶濃度曲線 酶量e 40 1.e越大，線性反 產(chǎn) 應(yīng)期越短 物 2.e相同，s越小， p 20 線性反應(yīng)期越短 10 5 0 5 10 15 20 時(shí)間(min)酶反應(yīng)時(shí)間曲線 時(shí)間(min) 5(t0) 反應(yīng)時(shí)間越短， 10(t1) 線性范圍越大 15(t2) 20(t3) 0 10 20 30 40 酶量e米氏方程e + sese + pkkkk+1+2-2-1v=vskm+sv v2s km米氏曲線svvmaxkmvmax 2kmkm酶活性測(cè)定的基本知識(shí)連續(xù)監(jiān)測(cè)法的測(cè)定時(shí)間 吸 光 度 a3 a2 a1 t1 t2 t3 t4 時(shí)間定時(shí)法與連續(xù)法比較（一）工具酶及酶偶聯(lián)反應(yīng)ab 酶1 cdc（或d）e 酶2 fgf（或g）h 酶3 ij酶1：待測(cè)酶酶2：輔助酶酶3：指示酶e、h：輔助底物 （二）常用監(jiān)測(cè)物質(zhì)的特性max ：340nmmax：405nm（三）酶法分析的類(lèi)型例：測(cè)定血清中肝素（2）偶聯(lián)反應(yīng)的基本動(dòng)力學(xué) s ex p1 ei p2 a 延遲期 恒態(tài)期 非恒態(tài)期 1.5 1.0 （四）酶活性濃度的計(jì)算 a常數(shù)k值的意義和設(shè)置常數(shù)k值的檢驗(yàn)單試劑、雙試劑、液體試劑自動(dòng)生化分析儀主要參數(shù)四、免疫濁度分析法抗原-抗體沉淀反應(yīng)的特征五、方法學(xué)評(píng)價(jià)