1、1,11微生物的培養和應用,2,一、微生物培養基的配制,1、培養基定義： 培養基（培養液）是為人工培養微生物而制備的，提供適合微生物生長、繁殖或積累代謝產物的營養基質。,思考：微生物細胞的元素組成是什么？,3,2類型,（1）按物理狀態分：固體培養基、液體培養基、半固體培養基。,區別：加入瓊脂的量決定培養基的形態。 熔點：96度 凝固點：40度 注意：一般細菌不能利用瓊脂。,應用微生物分離、鑒定、計數和 菌種保存等方面,4,微生物在固體培養基表面生長,可以形成肉眼可見的菌落,用途：純化、計數、鑒定,5,液體培養基：工業生產,表面生長,均勻混濁生長,沉淀生長,6,半固體培養基：觀察運動,無動力 有

2、動力(彌散),7,例、下列敘述不正確的是 A 培養基是為微生物的生長繁殖提供營養的基質 B 液體培養基和固體培養基所含的最基本物質不相同 C 微生物在固體培養基上生長時，可以形成肉眼可見的單個細菌,B.C.,8,（2）按成分分：天然培養基、合成 培養基和半合成培養基。,依據：成分是否明確 判斷下列培養基按成分屬于何種培養基？ 牛肉膏、蛋白胨培養基 葡萄糖銨鹽培養基 馬鈴薯蔗糖培養基,9,（3）按功能分：基礎培養基、選擇培養基和鑒別培養基。,基礎培養基：含有微生物生長所需的基本物質。 選擇培養基：培養基加入某種物質或缺少某種營養物質而抑制不需要的微生物生長，促進需要微生物生長。 舉例說明：加鏈霉

3、素培養基作用 加青霉素培養基作用 無氮培養基作用 鑒別培養基：區別微生物 伊紅美藍 產氣桿菌菌落大、灰棕色 大腸桿菌菌落小、綠色金屬光澤,抗生素，抑制細菌,10,按功能狀態分,選擇培養基 鑒別培養基 基礎培養基,從眾多微生物中分離所需的微生物,鑒別不同種類的微生物,加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌,伊紅美籃培養基使大腸桿菌的菌落呈深紫色，可以鑒別大腸桿菌,11,幾種選擇培養基：,加入青霉素的培養基: 分離酵母菌、霉菌等真菌 加入高濃度食鹽的培養基: 分離金黃色葡萄球菌 不加氮源的無氮培養基: 分離固氮菌 不加含碳有機物的無碳培養基: 分離自養型微生物,12,微生物生長需要條件 1、夏天為什么食物

4、容易腐??？ 如何處理可以防止腐??？ 2、為什么真空包裝的食品不容易腐??？ 3、醋酸是否具有殺菌作用？ 以上反應了微生物生長受到哪些條件影響？,細菌3037 霉菌2528 放線菌2528 12d 34d 57d,大腸桿菌 乳酸菌 破傷風桿菌 大多數細菌為好氧型,霉菌 5.06.0 細菌6.57.5 放線菌 7.58.5,13,微生物的類群,原生生物：,原核生物:,真菌:,病毒:,如酵母菌、霉菌,單細胞的動植物 如草履蟲、單細胞藻類等,微生物包含了除植物界和動物界以外的所有生物,無細胞結構,真核細胞,細菌、藍藻等,原核細胞,14,3.培養基營養成分：,不管哪種培養基，一般都含有水、碳源、和氮源、

5、無機鹽等營養物質。,討論：為什么大多數培養基 都含有這四類物質？,？,（1）基本成分：,15,碳源,無機碳源：,有機碳源：,CO2、CO32-、HCO3-,牛肉膏、蛋白胨等,自養微生物,異養微生物,氮源,無機氮源：,有機氮源：,NH4、NO3-,牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等,自養微生物,異養微生物,16,1000mL牛肉膏蛋白胨固體培養基配方,（2）特殊營養：,細菌生長必需，而往往自身不能合成的化合物，如維生素、某些氨基酸、堿基等,（3）pH、氧氣等要求,17,碳源,可作為碳源的物質有: 含碳無機物: 含碳有機物：,蛋白質,脂肪酸,不同微生物所利用的碳源不同 異養型微生物的碳源為 自養型微生

6、物的碳源為,碳酸鹽、碳酸氫鹽、二氧化碳,糖類（主要）,含碳有機物（有機碳）,含碳無機物（無機碳）,18,氮源,可作為氮源的物質有: 含氮無機物： b.含氮有機物：,蛋白胨,牛肉膏,尿素,氮氣,氨氣,硝酸鹽,銨鹽,19,二、無菌操作,1、獲得純凈培養物的關鍵： 2、無菌操作,防止外來雜菌的入侵,20,1、下列細菌中，能利用含碳無機物作碳源的是 A 光合細菌 B 根瘤菌 C 硝化細菌 D 乳酸菌 2、培養大腸桿菌的培養基中，必需含有的碳源和氮源是 A 糖、有機酸等 B 二氧化碳、碳酸鹽 C 蛋白質 D 無機氮化物,A.C,A.C,二. 無菌技術（思考）,1. 什么是無菌技術？包括哪些方面？ 2.

7、無菌技術除了用來防止實驗室的培養物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？ 3. 消毒和滅菌有何不同？ 4. 常用的消毒和滅菌方法有哪些？ 5哪些地方有菌可能導致菌體感染？ 操作者 培養基、接種工具、器皿 空間,無菌技術：泛指培養微生物操作中，所有防 止雜菌污染的方法。,無菌技術還能有效避免操作者自身被微生物感染。,22,1、滅菌和消毒 1.）滅菌：強烈的因素殺死所有微生物，包括芽孢和孢子。 思考：哪些因素可以滅菌、消毒？ 物理高溫、紫外線 化學酒精、氯氣、石碳酸 2.）消毒：溫和的因素殺死一部分對人體有害的微生物。 舉例：煮沸 問題：一段時間后為什么會腐?。?不包括芽孢和孢子,3）. 常用的消

8、毒方法：,煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外線或化學藥劑消毒法,4）常用的滅菌方法：,灼燒滅菌 干熱滅菌 高壓蒸汽滅菌 ：100kPa 121 15-30min,牛奶,接種室、接種箱或超凈工作臺,接種工具，接種環、接種針或其他金屬用具,玻璃器皿（吸管、培養皿）,24,思考：以下應當用何種方法滅菌、消毒？ 操作者 培養基 接種工具 器皿 空間 牛奶,手用酒精消毒,高壓蒸汽滅菌,灼燒,干熱滅菌,紫外線,巴氏消毒 7075度30min 80度15min,25,灼燒滅菌,微生物的接種工具 (接種環、接種針)或其他金屬用具直接在火焰的充分燃燒層灼燒,26,干熱滅菌 160170 ；12h,能耐高溫的需要保持干

9、燥的物品( 玻璃器皿),高壓蒸汽滅菌 100kPa 121 15-30min,通常用于培養基的滅菌,27,總結：無菌技術 1、實驗操作空間、操作者、衣著和手要 和 。 2、將用于微生物培養的器皿、接種工具和培養基等進行 。 3、為了避免周圍環境中微生物污染，實驗操作應在 附近進行。 4、實驗操作時應避免已經滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。,清潔,滅菌,酒精燈,消毒,28,例：下列關于腐乳制作的描述中，錯誤的是 A在腐乳制作過程中必須有能產生蛋白酶的微生物參與B含水量大于85%的豆腐利于保持濕度，適宜制作腐乳C加鹽和加酒都能抑制微生物的生長D密封瓶口前最好將瓶口通過火焰以防雜菌污染,29,六

10、、培養基的配制,（一）、細菌培養基的配制,1.計算: 100ml蒸餾水中各物質的量。,2.稱量：注意牛肉膏的粘稠度大。,3.溶化： 牛肉膏連同稱量紙一同放入 不斷攪拌 4.調節pH: 7.07.2 思考：判斷該培養基的作用是什么？,30,31,32,5.分裝： 培養基高度1/5 不要污染試管口 棉塞塞緊,33,6、包扎,34,7 .滅菌： 思考：滅菌的溫度、壓力、時間分別是多少？,8 .擱置斜面/倒平板,35,圖中哪些措施是防止雜菌污染的？,36,培養基滅菌后，需要冷卻到50度左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養基的溫度？ 剛剛不燙手。 為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 防止瓶口附

11、近的微生物污染培養基,37,平板冷凝后，為什么要將平板倒置？ 使培養基表面的水更好的揮發，防止皿蓋上水珠落入培養基 在倒平板的過程中，不小心將培養基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養微生物嗎？為什么？ 空氣中的微生物會在皿蓋與皿底之間的培養基上滋生，最好不要用該培養基培養微生物。,38,六、接種技術 無菌條件下將微生物接入培養基的操作過程稱為接種。,1、接種工具,39,常用的接種方法,斜面劃線法,40,41,問題：上述結果反應了什么情況？ 問題：可對菌液如何處理？,42,稀釋涂布平板法VS稀釋混合平板法,43,菌種的保存,1、臨時保藏：接種到固體斜面培養基，菌落長成后置于4冰箱保存

12、。 2、長期保存：甘油冷凍管藏法,44,從哪里可以獲得微生物呢？ 微生物的大本營：土壤 從眾多微生物中分離某種微生物有什么方法？ 根據微生物所需營養物質、氧氣、pH不同利用選擇性培養基選擇。 對微生物進行分離的培養基是？ 固體培養基 固體培養基上不同菌的區別是什么？ 菌落 菌落作用：分類、鑒定的依據,七、微生物的分離、數量測定,45,菌落,細菌的菌落特征因種而異 菌苔：菌落連成片,46,主題：分離土壤中分解尿素的微生物,1、原理： 分離：以尿素為唯一氮源的選擇性培養 基進行選擇。 計數：稀釋倒平板法,47,48,2、實驗步驟：,49,50,51,52,問題：統計細菌和統計分解尿素所用的細菌的稀釋倍數相同嗎？ 細菌：4、5 、6 放線菌：3、4、5 真菌 2、3、4 問題：統計的菌落數往往比活菌實際數目偏低？,每克樣品中的菌落數 =C（菌落數）* M （稀釋倍數）/ V（涂布體積）,53,本課題知識小結:,54,做什么準備？ 點燃酒精燈 斜面向上,55,斜面用什么接種？ 接種環如何滅菌？,56,取棉塞（不放到桌面？） 試管口滅菌,57,挑取少量菌體,58,輕輕劃“S”，