槐花米黃酮苷元的提制和鑒定 槐花米系豆科槐屬植物Sophora japonica L.的花蕾。歷來用作止血藥物治療痔瘡、子宮出血、吐血、鼻血等癥，其主要化學成分為蘆丁（亦稱蕓香苷Rutin），含量可高達23.5%。藥理證明蘆丁有調節毛細血管滲透作用，臨床上用作毛細血管性止血藥，作為高血壓癥的輔助用藥。蘆丁廣泛存在于植物中。現已發現含有蘆丁的植物達70種以上。由槐米提取蘆丁的方法有水或醇浸取法，熱、冷堿浸取酸沉淀法，本實驗采用堿提酸沉法提取蘆丁。一、主要黃酮類成分的物理性質1蕓香苷（Rutin）淡黃色針狀結晶，熔點：含三分子結晶水物174178，無水物為188。溶解度： 溶劑 溶解度（%）注水MeOHEtOH吡啶冷0.00131.00.368.5熱0.5511.23.5易溶不溶于乙醚、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等溶劑。易溶于堿液中呈黃色，酸化后復析出。可溶于濃硫酸和濃鹽酸呈棕黃色。加水稀釋后又析出。2槲皮素（quercetin）黃色結晶。熔點：含兩分子結晶水物3134。無水物316。溶解度：乙醇1：290，無水乙醇1：23（沸時）。可溶于MeOH、EtOH、冰HAc、吡啶、丙酮等溶劑。不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。二、實驗目的1通過實驗了解堿提酸沉法的原理及方法。2了解黃酮類化合物的一般性質。3學習聚酰胺TLC法在黃酮類化合物中的應用。4掌握由黃酮苷水解制取黃酮類苷元的方法。三、實驗原理1利用蘆丁易溶于堿溶液，但是在酸溶液中易析出的性質進行提取。2黃酮苷可通過酸水解，得到苷元及糖，并可通過TLC、PC及乙酰化物制備進行鑒識。3不同類酮類化合物對紫外光有特定吸收，可利用此特點對其進行定性、定量測定。四、實驗流程 槐米研碎加沸水和硼砂攪拌加熱至微沸飽和石灰水調pH值8-9微沸30分鐘，過濾藥渣濾液（合并）60-70時濃鹽酸調PH值4-5室溫時冰箱沉淀12h抽濾濾液（棄去） 沉淀 洗至中性 干燥蘆丁粗品 重結晶精制蘆丁五、實驗方法1蘆丁的提取稱取槐花米120g（分3次分別進行提取），研碎后置500ml燒杯中，加十倍沸水和適量硼砂攪拌，于石棉網上加熱至微沸，用飽和石灰水（用藥匙取適量生石灰放入燒杯，并加入蒸餾水溶解得到懸濁液，抽濾得到澄清濾液即為飽和石灰水），溶液調PH值8-9之間，并不斷攪拌。微沸30分鐘后，過濾并收集濾液。以同法再次收集濾液合并，濃縮至約300ml，濾液溫度降至6070之間以濃鹽酸酸化至PH45之間，室溫時放入冰箱12h，使沉淀完全。抽濾，沉淀用蒸餾水洗至中性，得粗品蘆丁。2 蘆丁的精制上述沉淀稱重后加入3040倍量的熱水溶解，趁熱過濾，放冷析出結晶、過濾、結晶自然干燥（或在紅外燈下干燥），得蘆丁精品。再取蘆丁水精制品用MeOH重結晶（1：1015）得蘆丁精品。3. 蘆丁的鑒定蘆丁水解法：取1g 精制蘆丁，加入80mL 0.5%稀硫酸，加熱回流水解1h，冷卻，過濾，沉淀用蒸餾水沖洗至中性。把沉淀加入到95%乙醇中，加熱使完全溶解，趁熱抽濾。濾液加入等量蒸餾水重結晶，過濾，得槲皮素和蘆丁水解液。參考文獻可知：由蘆丁水解生產槲皮素，在水溶液中比在甲醇溶液中收率高，生產成本較低；使用鹽酸或者硫酸收率幾乎不變；酸的濃度為0.5%，加熱1h，即可水解完全，收率為91.0%。3.1 化學法鑒定本品為黃色結晶粉末，熔程為188190(梯勒熔點管法)，鹽酸鎂粉反應呈陽性；氨性氯化鍶反應呈陽性顯示有鄰二酚羥基；鋯鹽枸櫞酸反應呈陽性顯示有3及5一羥基存在。水解液用薄層層析鑒定，顯示有葡萄糖及鼠李糖存在。薄層層析鑒定用3 cmX 5 cm的聚酰胺膜，選3種展開劑：分別為A，丙酮：水(3：1)；B，氯仿：甲醇(5：4)；C，醋酸乙酯：甲酸：水(8：1：1)。氨熏后噴顯色劑3的三氯化鋁顯色，經重結晶的蘆丁樣品在上述3種展開劑中均只顯一個斑點。4蘆丁，槲皮素的聚酰胺層析樣品：1%蘆丁，槲皮素甲醇液展開劑：80%乙醇顯色方法：用濃氨水或1%AlCl3醇溶液顯色后，日光及熒光燈下觀察。5蘆丁的定性反應A. 樣品制備：取蘆丁精制品少許用MeOH溶解。B. 定性試驗：取上述試液1ml于小試管中，按下列方法進行試驗。觀察反應情況。Molish反應加10% 萘酚溶液1ml，振搖后斜置試管。沿管壁滴加0.5ml濃H2SO4靜置觀察液面交界處顏色變化。鹽酸鋅粉（Mg粉）蘆丁于支試管中加濃HCl，再加入Mg粉和鋅粉，觀察顏色變化。FeCl3反應加FeCl3醇溶液12滴，觀察顏色。Mg(Ac)2紙片反應取兩張濾紙條，分別滴2滴蘆丁，然后各加1% Mg(Ac)2甲醇溶液2滴。于紫外燈下觀察熒光變化。AlCl3紙片反應1條紙片上滴加蘆丁后，加1% AlCl3乙醇溶液2滴，紫外燈下觀察熒光變化。鋯鹽檸檬酸反應加入2%ZrOCl2甲醇溶液34滴，觀察顏色，然后加入2%檸檬酸甲槨溶液34滴，觀察顏色。六、思考題1為什么必須熱水提取？水提取多用煎煮法而不用回流提取法，為什么？2一般提取液需經適當濃縮才可析出結晶，為什么蘆丁未經濃縮就析出結晶？3一般需經分離凈化才能得到化合物粗品，為什么蘆丁未經這些處理就得到了粗品？4酸水解常用什么酸，為什么用H2SO4比用HCl水解后處理更方便。5為什么定性反應有的在試管中做，有的在紙片上做。6當反應試劑組成是2個以上時，常需考慮