? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 第 ? 卷第 ? 期 ? 年 ? 月 ? 水?產(chǎn)?學(xué)?報(bào) ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文章編號(hào)? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 收稿日期? ? ?修回日期? ? ? 資助項(xiàng)目?安徽省?十一五?重大科技攻關(guān)項(xiàng)目?國家大學(xué)生創(chuàng)新性實(shí)驗(yàn)計(jì)劃項(xiàng)目?國家星火計(jì)劃項(xiàng)目 ? ? ? 通訊作者?陸劍鋒? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 斑點(diǎn)叉尾魚骨膠原多肽螯合鈣的制備及其特征 陸劍鋒?孟昌偉?李?進(jìn)?宮子慧?林?琳?葉應(yīng)旺?姜紹通 ?合肥工業(yè)大學(xué)生物與食品工程學(xué)院?安徽 合肥? 摘要? 以斑點(diǎn)叉尾魚骨酶解膠原多肽液和氯化鈣為原料?螯合率為指標(biāo)?在一定條件下制備 膠原多肽螯合鈣?并考察溫度? ?時(shí)間?多肽與鈣的質(zhì)量比對(duì)螯合率的影響? 在單因素實(shí)驗(yàn) 結(jié)果的基礎(chǔ)上?采用 ? ? ? ? ? ? 中心組合設(shè)計(jì)和響應(yīng)面分析法?確定最佳螯合工藝條件為溫 度? ? ?時(shí)間 ? ? ?質(zhì)量比 ? ?此條件下?螯合率達(dá) ? ? 紫外吸收和傅里葉變 換紅外光譜掃描的結(jié)果表明?骨膠原多肽與鈣形成了螯合物?且其氨基酸組成符合典型的膠原 樣蛋白特征? 關(guān)鍵詞? 斑點(diǎn)叉尾? 魚骨? 膠原多肽? 鈣? 螯合率 中圖分類號(hào)? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼? ?斑點(diǎn)叉尾? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?是一種原產(chǎn) 于北美洲的大型淡水魚類?擁有廣泛的國際市場? 我國斑點(diǎn)叉尾養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速? 年產(chǎn)量達(dá) ? 萬 ? 左右?被農(nóng)業(yè)部列為重點(diǎn)產(chǎn)業(yè)化開發(fā)對(duì) 象? 近年來?隨著斑點(diǎn)叉尾魚片出口量的不 斷攀升?加工產(chǎn)生的副產(chǎn)物或下腳料?魚皮?魚 骨?內(nèi)臟等?逐漸增多?其中魚骨?包括魚頭部分? 占了較大的比例?約 ? 動(dòng)物骨骼?如牛骨 等?通常含有豐富的蛋白?多肽?氨基酸及鈣?磷 等礦物質(zhì)?且骨骼蛋白以膠原蛋白為主?約占總蛋 白 ?左右? 而水產(chǎn)動(dòng)物膠原蛋白由于其優(yōu) 良的理化性質(zhì)和生理活性功能?已受到國內(nèi)外學(xué) 者的廣泛關(guān)注? 吳緹等?從斑點(diǎn)叉尾魚骨 中提取和純化了骨膠原蛋白?并對(duì)其特性進(jìn)行了 研究? ? ? ? 等?對(duì)多種魚骨膠原蛋白進(jìn)行了提 取和特性研究?并認(rèn)為魚骨膠原蛋白可以廣泛應(yīng) 用于食品?藥品和化妝品中? 目前?鈣質(zhì)缺乏是全球性的營養(yǎng)問題?我國人 民由于以植物性膳食為主?缺鈣的現(xiàn)象更加嚴(yán)重? 因此補(bǔ)鈣成為我國膳食營養(yǎng)研究中的重要課 題? 研究表明?動(dòng)物體內(nèi)存在著獨(dú)立的小肽 轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)?是攝入氨基酸的主要途徑?當(dāng)金屬離子 和一個(gè)小肽螯合后能防止肽的水解?同時(shí)因?yàn)榻?屬離子在消化道經(jīng)過胃及小腸中離子的吸收部位 時(shí)都以螯合態(tài)存在?因此吸收速度較快? 將骨膠 原多肽與鈣在一定條件下進(jìn)行螯合?制備出的骨 膠原多肽螯合鈣不僅可以補(bǔ)充人體需要的氨基酸 和鈣?還可以大大提高魚類等下腳料的附加值? 付文雯等?利用胃蛋白酶酶解的酸性環(huán)境使牛 骨中的鈣轉(zhuǎn)變成利于吸收的鈣離子?并將膠原蛋 白初步水解?再進(jìn)一步調(diào)節(jié) ?值后?添加 ? ? 中性蛋白酶使膠原蛋白得到深度水解?同時(shí)也促 進(jìn)了兩者的螯合? ? ? 等? ? ?利用提取的肉食 性魚腸道酶對(duì)鱈魚骨進(jìn)行酶解?并從酶解液中分 離出魚骨磷酸肽?使其與鈣進(jìn)行螯合?此法得到的 螯合鈣被認(rèn)為是一種新穎的營養(yǎng)性食品?之后又 對(duì)螯合鈣進(jìn)行小鼠實(shí)驗(yàn)?證明其可以阻止骨質(zhì)疏 松模型小鼠體內(nèi)礦物質(zhì)的流失? 采用堿性蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶?兩步酶解 法?可以制備出純度較高且適用于企業(yè)規(guī)模化 批量生產(chǎn)的膠原多肽水解液? 在此基礎(chǔ)上?本 文以自制的斑點(diǎn)叉尾魚骨膠原多肽與氯化鈣進(jìn) 行螯合反應(yīng)?同時(shí)結(jié)合 ? ? ? ? ? ? 組合設(shè)計(jì)和 響應(yīng)面分析法優(yōu)化斑點(diǎn)叉尾魚骨膠原多肽鈣的 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 期陸劍鋒?等?斑點(diǎn)叉尾魚骨膠原多肽螯合鈣的制備及其特征? 制備條件?這不僅可以改善水產(chǎn)動(dòng)物膠原蛋白資 源的營養(yǎng)及功能特性?而且可以減少由于斑點(diǎn)叉 尾魚骨廢棄造成的環(huán)境污染?也有助于企業(yè)產(chǎn) 生良好的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益? ?材料與方法 ? ?材料與試劑 骨膠原多肽水解液?實(shí)驗(yàn)室自制?氯化鈣? 氫氧化鈉?鹽酸?無水乙醇等均為分析純? ? ?儀器與設(shè)備 ? ? ? ? ?精密 ?計(jì)?上海大普儀器有限公 司? ?數(shù)顯恒溫水浴鍋?江蘇金壇市金城國勝 實(shí)驗(yàn)儀器廠? ? ? ? ? 精密恒溫鼓風(fēng)干燥箱 ?上海三發(fā)科學(xué)儀器有限公司? ? ? ?臺(tái)式高 速冷凍離心機(jī)?上海天美生化儀器設(shè)備工程有限 公司? ? ? ? ? ? 冷凍干燥機(jī)?北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀 器有限公司? ? ?旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器?上海亞榮 生化儀器廠? ? ? ? ? ? ? 傅里葉紅外光譜?美國 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 公司? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 氨基酸全自動(dòng)分析儀?德國 ? ? ?公 司? ? ?骨膠原多肽水解液的制備 稱取 ? ? 或一定量的骨粉?過 ? 目篩?先用 堿性蛋白酶初步酶解?料液比? ? ? ?加酶 量 ?溫度 ? ?酶解 ? ?再用風(fēng)味蛋白 酶在溫度 ? ?加酶量 ? ?酶解 ? ? 的 條件下進(jìn)一步酶解?即通過采用兩步酶解法制備 膠原多肽水解液? ? ?螯合實(shí)驗(yàn) 工藝流程?骨膠原多肽 ? 氯化鈣?調(diào)節(jié)溶 液 ?值?攪拌?水浴?濃縮?無水乙醇? 倍體積?洗滌 ? 次?抽濾?真空冷凍干燥? 螯合率的測定?待螯合反應(yīng)結(jié)束后?準(zhǔn)確 移取? ? ?反應(yīng)液于? ? ?離心管中?加入? ? ? 無水乙醇?震蕩?離心? ? ? ? ? ? ? ? ? ?測定 沉淀物?螯合鈣?中的鈣含量?同時(shí)再準(zhǔn)確 移取 ? ? ?反應(yīng)液?直接測定總鈣含量? 螯 合率 ? ? 鈣含量的測定參照 ? ? ? ? ? ?食品中鈣的測定? ? ?單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 單因素實(shí)驗(yàn)的基本條件定為溫度? ?時(shí)間 ? ?質(zhì)量比 ? ? 改變其中一個(gè)條件?固定 其它條件以分析各單因素對(duì)螯合率的影響? 各因 素水平梯度分別為?溫度 ? ? ?時(shí)間 ? ? ? ? ? ?質(zhì) 量比 ? ? ? ? ? ? ? 每個(gè)水平重復(fù) 試驗(yàn)兩次?結(jié)果取平均值? ? ?響應(yīng)面法優(yōu)化螯合工藝 在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上?采用 ? ? ? ? ? ? 中 心組合方法進(jìn)行三因素三水平試驗(yàn)設(shè)計(jì)? 以 ? ? 時(shí)間?骨膠原多肽與鈣離子質(zhì)量比 ? 個(gè)因素為自 變量?并以自變量的編碼值 ? ?分別代表自 變量的高?中?低水平?螯合率 ?為響應(yīng)值?自變量 因素水平及編碼見表 ? 采用 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析? 表 ? ? ? ? ? ? ? ? ?設(shè)計(jì)試驗(yàn)因素?水平及編碼 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 自變量因素 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 編碼 ? ? ? 編碼水平 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 時(shí)間? ? ? ? ? ? ? ? 質(zhì)量比 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?氨基酸組成分析 稱取冷凍干燥后的樣品 ? ? ?放入消化管 中?加入 ? ? ? ? ? ? ?的 ? ? ? ?充入氮?dú)夂笮o 管蓋?置于? ?烘箱中水解? ? 水解結(jié)束冷卻 后移至坩堝?于 ? ?水浴鍋揮發(fā)鹽酸?再加入少 量雙蒸水蒸干?重復(fù)兩次?用適量 ? ? 的磷酸 鹽緩沖溶液溶解稀釋?最后用 ? ? ? ?微孔濾膜 抽濾?濾液采用氨基酸全自動(dòng)分析儀進(jìn)行測定? ? ?紫外光譜? ? ? ? ? ? ?分析 取適量冷凍干燥樣品?用蒸餾水溶解?同時(shí) 以蒸餾水作為對(duì)照?在 ? ? ? ? 波長范圍 內(nèi)進(jìn)行紫外掃描?分辨率 ? ? ? ?傅里葉紅外光譜? ? ? ? ? ?分析 取適量冷凍干燥樣品?用紅外光譜儀對(duì)樣品 進(jìn)行紅外掃描?掃描范圍為 ? ? ? ? ? ? ?采 用 ? ? ? ? ? ? ? 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析? ?結(jié)果 ? ?單因素實(shí)驗(yàn) 溫度對(duì)螯合率的影響?隨著溫度的逐漸增 加?螯合率隨之增加?但增幅不大? ?時(shí)螯合率 達(dá)到最高?當(dāng)溫度升高至 ? ?以上時(shí)?螯合率隨 著溫度的升高反而下降?表明高溫不利于螯合反 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?水?產(chǎn)?學(xué)?報(bào)? 卷 應(yīng)的進(jìn)行? 但當(dāng)溫度低于? ?時(shí)?對(duì)螯合率的影 響也不顯著?所以將螯合溫度設(shè)定為 ? ?不帶 入后續(xù)的響應(yīng)面優(yōu)化試驗(yàn)?圖 ? 圖 ?溫度對(duì)鰲合率的影響 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?時(shí)間對(duì)螯合率的影響?時(shí)間對(duì)螯合率影響 較大? 當(dāng)螯合時(shí)間在 ? ? ? ? ? 內(nèi)?螯合率隨著反 應(yīng)時(shí)間的延長而快速增加?這也說明螯合反應(yīng)較 為快速? 當(dāng)反應(yīng)時(shí)間為 ? ? 時(shí)? 螯合率達(dá)到 ? ?但反應(yīng)時(shí)間大于 ? ? 后?隨著時(shí)間延長? 螯合率增加不明顯?基本趨于平緩?故螯合時(shí)間以 ? ? 為最佳?圖 ? 圖 ?時(shí)間對(duì)鰲合率的影響 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?對(duì)螯合率的影響?螯合率隨著 ?的 升高而增大?當(dāng) ?為 ? ? ? ? ? 時(shí)?螯合率達(dá)到 最大?此后又隨著 ?的上升而下降?圖? 當(dāng)溶 液在 ?值較低的酸性條件下?大量的 ?將會(huì)與 ? ? ? ?爭奪供電子基團(tuán)?不利于螯合物的生成?當(dāng) 溶液在 ?值較高的條件下?羥基可能會(huì)爭奪鈣 離子而優(yōu)先生成氫氧化鈣沉? 本實(shí)驗(yàn)中?當(dāng) ?在 ? ? ? ? ? 時(shí)?觀察到反應(yīng)體系中有沉淀慢 慢析出? 螯合率在 ? ? ? ? ? 附近時(shí)達(dá)到最 大?此時(shí)有較多的酸性多肽物質(zhì)處于等電點(diǎn)附近? 受氫離子和羥基影響較小?可以提供充分的供電 子基團(tuán)?從而有利于與鈣離子通過配位鍵形成螯 合物?故螯合反應(yīng)的最佳 ?為 ? ? ? ? ? 圖 ? ?對(duì)鰲合率的影響 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?質(zhì)量比對(duì)螯合率的影響?膠原多肽和鈣離 子的質(zhì)量比與螯合率的大小密切相關(guān)? 隨著質(zhì)量 比的增大?螯合率增加?當(dāng)達(dá)到 ? ? 時(shí)?螯合率最 高?質(zhì)量比再增加?螯合率基本不變? 物料的配比 是影響金屬離子與多肽螯合反應(yīng)的一個(gè)重要因素 ?圖 ? 如果配位比太小?螯合反應(yīng)即使顯著也 不能形成穩(wěn)定的環(huán)狀結(jié)構(gòu)?即螯合物不穩(wěn)定?若配 位比太高?則導(dǎo)致多肽利用率下降?即造成多肽的 浪費(fèi)?不經(jīng)濟(jì)? 綜合考慮選擇質(zhì)量比 ? ? 較 適宜? 圖 ?質(zhì)量比對(duì)鰲合率的影響 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?響應(yīng)面分析 本試驗(yàn)安排了 ? 個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)?可分為兩類?其 一是析因點(diǎn)?自變量取值在 ? ?所構(gòu)成的三 維頂點(diǎn)?共有 ? 個(gè)析因點(diǎn)?其二為零點(diǎn)?為區(qū)域的 中心點(diǎn)?零點(diǎn)試驗(yàn)重復(fù) ? 次?用以估計(jì)試驗(yàn)誤差? 試驗(yàn)安排及結(jié)果見表 ? 對(duì)表 ? 中的試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合回歸?以 ? ? ?時(shí)間?質(zhì)量比?為自變量?螯合率 ? ?為因變量?響應(yīng)值?建立二次多元回歸方程 模型? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 期陸劍鋒?等?斑點(diǎn)叉尾魚骨膠原多肽螯合鈣的制備及其特征? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?對(duì)回歸方程進(jìn)行方差分析?結(jié)果見表 ? 回 歸方程中各變量對(duì)指標(biāo)?響應(yīng)值?影響的顯著性? 由 ?檢驗(yàn)來判定?概率 ? ? ? ? ? ?的值越小?則相應(yīng) 變量的顯著程度越高? 由表 ? 可知?回歸方程 達(dá)到極顯著水平? ?且失擬項(xiàng)不顯著 ? ? 表明該方程對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)擬合較 好? 總決定系數(shù) ? ? ? ? ? ?表明自變量與 響應(yīng)值之間線性關(guān)系顯著?即該模型預(yù)測值與實(shí) 際試驗(yàn)值擬合較好?因此可利用該回歸方程代替 試驗(yàn)真實(shí)點(diǎn)對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析? 回歸方程各項(xiàng)系數(shù)的顯著性分析結(jié)果表明? 因素 ? ?的線性效應(yīng)和平方效應(yīng)對(duì)螯合率的影響 極顯著? ? ? ? 的線性效應(yīng)對(duì)螯合率的影 響顯著? ? ? 利用 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 軟件 在設(shè)定的因素水平內(nèi)對(duì)回歸方程進(jìn)行數(shù)學(xué)規(guī)劃? 得到螯合率最高的優(yōu)化組為 ? ?時(shí)間 ? ? ? 膠原多肽與鈣的質(zhì)量比為 ? ? 此條件下?螯合 率的理論值達(dá)到 ? ? 表 ?響應(yīng)面試驗(yàn)方案及結(jié)果 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 試驗(yàn)號(hào) ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 螯合率? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 表 ?回歸方程的方差分析 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 方差來源 ? ? ? ? 自由度 ? 平方和 ? ?均方 ? ? ? ? ? ? ? ? 顯著性 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 模型 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 殘差 ? ? ? ? ? ? ? ? 失擬 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 純誤差 ? ? ? ? ? ? ? 總和 ? ? ? ? ? ? 注?顯著水平為 ? ? ?極顯著水平為 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?驗(yàn)證試驗(yàn) 在最佳螯合條件?溫度 ? ? ?時(shí)間 ? ? ?膠原多肽與鈣的質(zhì)量比為 ? ?下?螯合率 的理論值達(dá)到 ? ? 當(dāng)膠原多肽與鈣的質(zhì)量 比設(shè) 為 ? ? 時(shí)? 螯 合 率 的 理 論 值 雖 略 低 ? ?但膠原多肽和鈣的螯合利用率較高 ?見單因素試驗(yàn)? 故采用質(zhì)量比為 ? ? 進(jìn)行驗(yàn) 證試驗(yàn)?螯合率的實(shí)際值達(dá)到 ? ?與理論值 相符?且與質(zhì)量比為 ? ? 的理論值相差不大? ? ?螯合物的氨基酸組成分析 除色氨酸由于酸水解的破壞而未能正常檢測 外?斑點(diǎn)叉尾魚骨膠原多肽螯合鈣的氨基酸含 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?水?產(chǎn)?學(xué)?報(bào)? 卷 量非常豐富?其中以甘氨酸含量最高? ? 谷氨酸?丙氨酸?脯氨酸?天冬氨酸和羥脯氨酸含 量相對(duì)較高?而半胱氨酸?蛋氨酸?異亮氨酸?酪氨 酸?苯丙氨酸和組氨酸含量相對(duì)較少? 因此其符 合典型的膠原蛋白氨基酸組成特征?表明螯合 試驗(yàn)所用的膠原多肽含量相當(dāng)高?表 ? 表 ?螯合物的氨基酸組成 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 氨基酸 ? ? ? ? ? ? ? ? 含量? ? ? ? ? ? 氨基酸 ? ? ? ? ? ? ? ? 含量? ? ? ? ? ? 天冬氨酸 ? ? ? ?蛋氨酸 ? ? ? 蘇氨酸 ? ? ?異亮氨酸 ? ? ? ? 絲氨酸 ? ? ? ?亮氨酸 ? ? ? ? 谷氨酸 ? ? ? ?酪氨酸 ? ? ? 甘氨酸 ? ? ? ?苯丙氨酸 ? ? ? 丙氨酸 ? ? ? ?組氨酸 ? ? ? ? 半胱氨酸 ? ? ?賴氨酸 ? ? ? 纈氨酸 ? ? ? ?精氨酸 ? ? ? ? 脯氨酸 ? ? ? ?羥脯氨酸 ? ? ? 注?由于酸水解導(dǎo)致 ? ? ? 被破壞?所以未能檢測到 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?螯合物的紫外吸收光譜分析 在螯合物中?不僅過渡金屬離子會(huì)吸收可見 ?或紫外?區(qū)的某一部分波長的光而發(fā)生躍遷?配 合體內(nèi)部也可能因吸收可見?或紫外?區(qū)的光而 發(fā)生電子的躍遷? 形成螯合物時(shí)中央離子與配位 體的鍵合使配位體內(nèi)部有關(guān)軌道的能量改變?因 此螯合物中的配合體內(nèi)部電子的躍遷與游離配位 體內(nèi)部電子的躍遷時(shí)要求的能量不相同?即吸收 光的波長不相同? 周元臻等?研究了殼聚糖與 ? ? ? ?之間的 配合作用?結(jié)果表明其產(chǎn)物的紫外吸收光譜發(fā) 生了紅移? 同時(shí)指出在反應(yīng)過程中可以根據(jù)螯 合物最大吸收峰的大小來判斷反應(yīng)程度?而利 用分光光度法還可以測定螯合物的穩(wěn)定常數(shù)? 判斷螯合物的配位比? 由圖 ? 可知?螯合后的骨 膠原多肽?即膠原多肽螯合鈣?的紫外吸收光譜 同樣存在紅移現(xiàn)象?表明有新物質(zhì)生成?這也證 實(shí)骨膠原多肽與鈣離子之間可能發(fā)生了螯合 反應(yīng)? ? ?螯合物的紅外吸收光譜分析 在膠原多肽溶液中主要是氨基酸殘基之間的 酰胺鍵?也有少量的末端或側(cè)鏈氨基和羧基存在? 因此在紅外光譜中存在氨基的伸縮振動(dòng)?變角振 動(dòng)和羧基的伸縮振動(dòng)等吸收峰?而當(dāng)膠原多肽與 ? ? ? ?螯合后?必然會(huì)引起其吸收峰位的偏移或 變化? 由圖 ? 可知?骨膠原多肽紅外光譜圖的特征 區(qū)中? ? ? ? ?的吸收峰在 ? ? ? ? ? ?是由 ? ? 的伸縮振動(dòng)引起? ? ? ? ? ?屬于酰胺?帶? 是由 ?的伸縮振動(dòng)引起? ? ? ? ? ?屬 于酰 胺 ? 帶? 是 由 ?的 變 形 振 動(dòng) 引 起? ? ? ? ? ? ?處出現(xiàn)? ? ? ? ? 吸收峰? ? ? ? ?處則是由 ?面外變形振動(dòng)引起? 加入 鈣離子后?氨基的伸縮振動(dòng)吸收峰出現(xiàn)偏移?向 高波位移動(dòng) ? 個(gè)波數(shù)?且吸收峰變強(qiáng)? 酰胺? 帶吸收變得很弱?可能是由于和鈣結(jié)合后 ? 的伸縮振動(dòng)受到遏制?這意味著 ? ?和鈣離子 之間存在某種化學(xué)作用?配合鍵形成的可能性 最大? 在 ? ? ? ? ? ?處的? ? ? ? ? 吸收 峰向低波位發(fā)生了偏移?且吸收峰增強(qiáng)?推測 ? ? ? ?與 ? ? ? ? 之間存在較強(qiáng)的結(jié)合作用?這 也與米蛋白態(tài)鋅的紅外吸收光譜相似? 由紅 外吸收峰的偏移或變化?進(jìn)一步證實(shí)骨膠原多 肽和鈣離子之間形成了螯合物? 圖 ?紫外吸收光譜圖 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 圖 ?傅里葉紅外光譜圖 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 期陸劍鋒?等?斑點(diǎn)叉尾魚骨膠原多肽螯合鈣的制備及其特征? ?結(jié)論 通過單因素和響應(yīng)面優(yōu)化實(shí)驗(yàn)?得到膠原多 肽液和鈣離子的最佳螯合條件為溫度 ? ? ? ?時(shí)間 ? ? ?膠原多肽與鈣的配比為 ? ?此 條件下的鈣螯合率為 ? ? 對(duì)螯合物進(jìn)行氨 基酸分析?其甘氨酸?丙氨酸?脯氨酸和羥脯氨酸 含量較高?符合典型的膠原樣蛋白氨基酸組成特 征?即該螯合物在補(bǔ)充鈣的同時(shí)也能起到補(bǔ)充膠 原蛋白的作用? 對(duì)骨膠原多肽及其鈣螯合物進(jìn)行 紫外吸收和傅里葉變換紅外光譜掃描?結(jié)果表明? 螯合前后兩者在化學(xué)結(jié)構(gòu)上存在一定的變化?較 好地證明了鈣螯合物的形成? 參考文獻(xiàn)? ? ? ?張偉偉?陸劍鋒?焦道龍?等? 鉀法提取斑點(diǎn)叉尾 內(nèi)臟油的工藝研究? ? 食品科學(xué)? ? ? ? ? ? ?胡軍景?劉景圣?張大力?等? 復(fù)合酶分步酶解法提 取牛骨膠原蛋白工藝的研究? ? 肉類研究? ? ? ? ? ? ?焦道龍?陸劍鋒?張偉偉?等? 水產(chǎn)動(dòng)物膠原蛋白的 研究現(xiàn)狀及發(fā)展趨勢(shì) ? ? ? 食品科學(xué)? ? ? ? ? ? ?吳緹?陳舜勝? 斑點(diǎn)叉尾魚骨制取膠原蛋白和骨 粉的試驗(yàn)研究? ? 南方水產(chǎn)? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?宋俊梅?曲靜然? 促進(jìn)骨鈣生物可利用性的研究 ? ? 食品科技? ? ? ? ? ?謝靜?李宗軍? 補(bǔ)鈣理論創(chuàng)新?膠原多肽與鈣結(jié)合 物? ? 國際中醫(yī)中藥雜志? ? ? ? ? ?付文雯?馬美湖?蔡朝霞? 牛骨蛋白分步酶解制取 膠原多肽螯合鈣的研究? ? 食品工業(yè)? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?孟昌偉?陸劍鋒?宮子慧?等? 斑點(diǎn)叉尾魚骨膠原 多肽的制備工藝研究? ? 肉類工業(yè)? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?張紅漫?儀明君?陸小華?等? 復(fù)合氨基酸銅螯合物的 研究? ? 氨基酸和生物資源? ? ? ?孫莉潔?梁金鐘? 響應(yīng)面法優(yōu)化大豆肽與鈣離子螯 合的研究? ? 中國糧油學(xué)報(bào)? ? ? ?楊?yuàn)檴? 羅非魚皮多肽鋅螯合鹽的制備及性質(zhì)研 究? ? 南昌?南昌大學(xué)? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?管海躍? 甘氨酸微量元素螯合物的合成與表征研 究? ? 杭州?浙江大學(xué)? ?周元臻?魏永鋒?張維平?等? 殼聚糖? ? ? ?配位 聚合物的合成及其性能表征? 食品科學(xué)? ? ? ? ?付文雯?馬美湖?蔡朝霞? 牛骨蛋白酶解制取肽鈣 的研究進(jìn)展? ? 食品與發(fā)酵科技? ? ? ? ?祝德義? 利用灰堿皮廢料制備膠原多肽鈣? ? 濟(jì) 南?山東輕工業(yè)學(xué)院? ?夏松養(yǎng)?謝超?霍建聰?等? 魚蛋白酶水解物的鈣螯 合修飾及其功能活性? ? 水產(chǎn)學(xué)報(bào)? ? ? ? ?張全才? 米蛋白態(tài)鋅的制備工藝及產(chǎn)品特性研究 ? ? 南昌?南昌大學(xué)? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?水?產(chǎn)?學(xué)?報(bào)? 卷 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?