專題2微生物培養(yǎng)與應(yīng)用課題1微生物試驗室培養(yǎng)第1頁㈠.微生物類群微生物原核類:真核類非細胞類：細菌、支原體、放線菌、藍藻個體微小、結(jié)構(gòu)簡單酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：顯微藻類、原生生物（如：草履蟲、變形蟲等）病毒、類病毒、朊病毒◆微生物共同特點：一.微生物基礎(chǔ)知識第2頁1.細菌形態(tài)球菌弧菌桿菌第3頁二分裂2.細菌繁殖3.細菌菌落⑴.定義：單個或者少數(shù)細菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，會形成一個肉眼可見、含有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)子細胞群體，叫做菌落。⑵.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等。⑶.功效：每種細菌在一定條件下所形成菌落，能夠作為菌種判定主要依據(jù)。為抵抗不良環(huán)境可形成細菌休眠體——芽孢第4頁幾個菌落及其形態(tài)第5頁幾個菌落及其形態(tài)第6頁微生物需要五大類營養(yǎng)要素物質(zhì)是：㈡.微生物需要營養(yǎng)物質(zhì)及功效1.碳源2.氮源3.生長因子4.無機鹽5.水：凡是能為微生物提供所需碳元素營養(yǎng)物質(zhì)。①無機碳源：CO2；NaHCO3等②有機碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等①組成細胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物②異養(yǎng)微生物能源⑴.概念⑵.起源：⑶.作用：1.微生物碳源第7頁①無機氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有機氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能夠為微生物提供N元素營養(yǎng)物質(zhì)。主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含N代謝產(chǎn)物。2.微生物氮源⑴.概念：⑵.起源：⑶.作用：3.生長因子⑶.常見生長因子：⑴.概念：⑵.作用：微生物生長不可缺乏微量有機物。酶和核酸組成成份。維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。第8頁㈢.培養(yǎng)基1.概念：培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成，專供微生物生長繁殖使用營養(yǎng)基質(zhì)。3.培養(yǎng)基類型和用途2.培養(yǎng)基成份：普通都含有水、碳源、氮源、無機鹽等營養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣等要求。P14P15第9頁劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點用途物理性質(zhì)化學(xué)成份天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基用途判別培養(yǎng)基培養(yǎng)基種類不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物運動、分類判定微生物分離、判定、活菌計數(shù)、保藏菌種含化學(xué)成份不明確天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成份明確分類、判定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要微生物生長,促進所需要微生物生長培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以判別不一樣種類微生物判別不一樣種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基P84第10頁液體培養(yǎng)基：表面生長均勻混濁生長沉淀生長back半固體培養(yǎng)基：(是否運動)

無動力有動力(彌散)固體培養(yǎng)基：菌落第11頁幾個選擇培養(yǎng)基加入青霉素培養(yǎng)基分離酵母菌、霉菌等真菌不加氮源無氮培養(yǎng)基分離固氮菌不加含碳有機物無碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物back加入高濃度食鹽培養(yǎng)基分離金黃色葡萄球菌第12頁練習(xí)1.不能作為異養(yǎng)微生物碳源是（

）A．牛肉膏B．含碳有機物C．石油D．含碳無機物D第13頁2.自養(yǎng)型微生物與異養(yǎng)型微生物培養(yǎng)基主要差異是（

）A．碳源B．氮源C．無機鹽D．生長因子A第14頁3.以下關(guān)于生長因子說法中，不正確一項是（

）A．是微生物生長不可缺乏微量有機物B．是微生物生長不可缺乏微量礦質(zhì)元素C．主要包含維生素、氨基酸和堿基等D．普通是酶和核酸組成成份B第15頁

4.經(jīng)過選擇培養(yǎng)基能夠從混雜微生物群體中分離出所需微生物。在碳源為纖維素培養(yǎng)基上，大部分微生物無法生長；在培養(yǎng)基中加入青霉素，能夠抑制細菌和放線菌。利用上述方法能從混雜微生物群體中分別分離出（）①大腸桿菌②霉菌③放線菌④纖維素分解菌

A.④②

B.①②

C.①③

D.③④

解析：選A。本題考查了微生物分離知識。纖維素分解菌能夠利用纖維素，大部分微生物卻不能；培養(yǎng)基中加入青霉素能夠抑制細菌和放線菌，但霉菌能夠生長。第16頁編號成份含量①粉狀硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml5．右表是某微生物培養(yǎng)基成份，請據(jù)此回答：（1）右表培養(yǎng)基可培養(yǎng)微生物類型是

。（2）若不慎將過量NaCl加入培養(yǎng)基中。如不想浪費此培養(yǎng)基，可再加入

，用于培養(yǎng)

，

自養(yǎng)型微生物

含碳有機物

金黃色葡萄球菌

第17頁（3）若除去成份②，加入（CH2O），該培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)

。（4）表中營養(yǎng)成份共有

類。（5）不論何種培養(yǎng)基，在各種成份都溶化后分裝前，要進行是

。（6）右表中各成份重量確定標(biāo)準(zhǔn)是

。（7）若右表培養(yǎng)基用于菌種判定，應(yīng)該增加成份

。固氮微生物

3調(diào)整pH

依微生物生長需要確定

瓊脂（或凝固劑）

編號成份含量①粉狀硫10g②（NH4）2SO40.4g③K2HPO44.0g④MgSO49.25g⑤FeSO40.5g⑥CaCl20.5g⑦H2O100ml第18頁思索：1.取得純凈培養(yǎng)物關(guān)鍵？2.無菌技術(shù)除了用來預(yù)防試驗室培養(yǎng)物被其它外來微生物污染外，還有什么目標(biāo)？（P15旁欄思索）3.消毒和滅菌有何不一樣？4.慣用消毒和滅菌方法有哪些？無菌技術(shù)還能有效防止操作者本身被微生物感染。㈣.無菌技術(shù)預(yù)防外來雜菌入侵第19頁比較項理化原因作用強度毀滅微生物數(shù)量芽孢和孢子能否被毀滅消毒較為溫和部分生活狀態(tài)微生物不能滅菌強烈全部微生物能消毒與滅菌比較第20頁①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。③化學(xué)藥劑消毒法：用75%酒精、新潔爾滅等進行皮膚消毒；氯氣消毒水源。④紫外線消毒。⑴.消毒方法：3.慣用消毒與滅菌方法第21頁表面滅菌和空氣滅菌等使用

紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。照射30min，可先噴灑石炭酸或煤酚皂溶液加強消毒效果。第22頁（2）滅菌a灼燒滅菌b干熱滅菌c高壓蒸汽滅菌灼燒滅菌微生物接種工具(接種環(huán)、接種針)或其它金屬用具直接在火焰充分燃燒層灼燒注意適用范圍第23頁干熱滅菌160－170℃；1－2h能耐高溫需要保持干燥物品(玻璃器皿)高壓蒸汽滅菌100kPa121℃15-30min通慣用于培養(yǎng)基滅菌第24頁請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。假如需要，請選擇適當(dāng)方法。⑴培養(yǎng)細菌用培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿⑵玻棒、試管、燒瓶和吸管⑶試驗操作者雙手答：（1）、（2）需要滅菌；（3）需要消毒。P16旁欄思索第25頁二.試驗操作(以培養(yǎng)大腸桿菌為例)㈠.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1.計算2.稱量3.溶化4.滅菌:將錐形瓶放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。5.倒平板:待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種。第26頁倒平板操作第27頁答：能夠用手觸摸盛有培養(yǎng)基錐形瓶，感覺錐形瓶溫度下降到剛才不燙手時，就能夠進行倒平板了。2.為何需要使錐形瓶瓶口經(jīng)過火焰？答：經(jīng)過灼燒滅菌，預(yù)防瓶口微生物污染培養(yǎng)基。問題討論1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么方法來預(yù)計培養(yǎng)基溫度？第28頁3.平板冷凝后，為何要將平板倒置？4.在倒平板過程中，假如不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為何？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后培養(yǎng)基表面濕度也比較高，將平板倒置，既能夠使培養(yǎng)基表面水分更加好地揮發(fā)，又能夠預(yù)防皿蓋上水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。答：空氣中微生物可能在皿蓋與皿底之間培養(yǎng)基上滋生，所以最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。第29頁

關(guān)于制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基敘述中，錯誤是（）

A.操作次序為計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌

B.牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻棒取出稱量紙

C.待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右時，進行倒平板

D.待平板冷卻凝固約5min～10min后，將平板倒過來放置

解析：選A。本題考查了牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備過程。其次序為：計算→稱量→溶化→滅菌→倒平板，故A項錯誤。第30頁㈡.純化大腸桿菌平板劃線法和稀釋涂布平板法。微生物接種慣用接種方法有：1.平板劃線操作方法視頻第31頁第32頁答：操作第一步灼燒接種環(huán)是為了防止接種環(huán)上可能存在微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上菌種直接起源于上次劃線末端，從而經(jīng)過劃線次數(shù)增加，使每次劃線時菌種數(shù)目逐步降低，方便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留菌種，防止細菌污染環(huán)境和感染操作者。問題討論1.為何在操作第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，依然需要灼燒接種環(huán)嗎？為何？第33頁2.在灼燒接種環(huán)之后，為何要等其冷卻后再進行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后劃線操作時，為何總是從上一次劃線末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細菌數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線末端開始，能使細菌數(shù)目伴隨劃線次數(shù)增加而逐步降低，最終能得到由單個細菌繁殖而來菌落。第34頁答：應(yīng)從操作各個細節(jié)確保“無菌”。比如，酒精燈與培養(yǎng)皿距離要適當(dāng)、吸管頭不要接觸任何其它物體、吸管要在酒精燈火焰周圍等等。問題討論涂布平板全部操作都應(yīng)在火焰附近進行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)怎樣進行無菌操作？2.稀釋涂布平板操作方法視頻第35頁4.菌種保留固體斜面培養(yǎng)基上4℃保留，菌種易被污染或產(chǎn)生變異3.微生物恒溫培養(yǎng)⑵.長久保留：－20℃甘油管在冷凍箱中保藏⑴.暫時保藏：第36頁三.結(jié)果分析與評價第37頁本課題知識小結(jié):第38頁【典例解析】例:關(guān)于微生物營養(yǎng)物質(zhì)敘述中，正確是()A.是碳源物質(zhì)不可能同時是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外無機物只提供無機鹽D.無機氮源也能提供能量解析：不一樣微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差異，要針對微生物詳細情況分析。對于A、B選項，它表示是不完整。有碳源只能是碳源，如二氧化碳；有碳源可同時是氮源，如NH4HCO3；有碳源同時是能源，如葡萄糖；有碳源同時是氮源，也是能源，如蛋白胨。對于C選項，除水以外無機物種類繁多，功效也多樣。如二氧化碳，可作為自養(yǎng)型微生物碳源；NaHCO3，可作為自養(yǎng)型微生物碳源和無機鹽；而NaCl則只能提供無機鹽。對于D選項，無機氮源提供能量情況還是存在，如NH3可為硝化細菌提供能量和氮源。D第39頁

例2.下面對滅菌了解不正確是()A.預(yù)防雜菌污染B.毀滅雜菌C.培養(yǎng)基和發(fā)酵設(shè)備都必須滅菌D.滅菌必須在接種前B第40頁練習(xí)1.取得純凈培養(yǎng)物關(guān)鍵是A將用于微生物培養(yǎng)器皿，接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌B接種純種細菌C適宜環(huán)境條件下培養(yǎng)D預(yù)防外來雜菌入侵第41頁練習(xí)1.取得純凈培養(yǎng)物關(guān)鍵是A將用于微生物培養(yǎng)器皿，接種用具和培養(yǎng)基等器具進行滅菌B接種純種細菌C適宜環(huán)境條件下培養(yǎng)D預(yù)防外來雜菌入侵第42頁練習(xí)2.以下操作與無菌技術(shù)無關(guān)是A接種前用肥皂洗雙手,再用酒精擦拭雙手B接種前用火焰燒灼接種針C培養(yǎng)在50℃左右時擱置斜面D在酒精燈火焰旁完成第43頁練習(xí)2.以下操作與無菌技術(shù)無關(guān)是A接種前用肥皂洗雙手,再用酒精擦拭雙手B接種前用火焰燒灼接種針C培養(yǎng)在50℃左右時擱置斜面D在酒精燈火焰旁完成第44頁練習(xí)3.外科手術(shù)器械和罐頭食品處理，要以能夠殺死什么為標(biāo)準(zhǔn)A球菌B桿菌C螺旋菌D芽孢第45頁練習(xí)3.外科手術(shù)器械和罐頭食品處理，要以能夠殺死什么為標(biāo)準(zhǔn)A球菌B桿菌C螺旋菌D芽孢第46頁

例1某小組同學(xué)為了調(diào)查湖水中細菌污染情況而進行了試驗。試驗包含制備培養(yǎng)基、滅菌、接種及培養(yǎng)、菌落觀察計數(shù)。請回答與此試驗相關(guān)問題。（1）培養(yǎng)基中含有蛋白胨、淀粉分別為細菌培養(yǎng)提供了

和

。除此之外，培養(yǎng)基還必須含有基本成份是

和

。（2）對培養(yǎng)基進行滅菌，應(yīng)該采取方法是

。（3）為了盡快觀察到細菌培養(yǎng)試驗結(jié)果，應(yīng)將接種了湖水樣品平板置于

中培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度設(shè)定氮源碳源無機鹽水高壓蒸汽滅菌恒溫箱第47頁在37℃。要使該試驗所得結(jié)果可靠，還應(yīng)該同時在另一平板上接種

作為對照進行試驗。（4）培養(yǎng)20小時后，觀察到平板上有形態(tài)和顏色不一樣菌落，這說明湖水樣品中有

種細菌。普通說來，菌落總數(shù)越多，湖水遭受細菌污染程度越

。（5）假如提升培養(yǎng)基中NaCl濃度，能夠用于篩選耐

細菌，這種培養(yǎng)基被稱為

。無菌水多高選擇培養(yǎng)基鹽第48頁練習(xí)4.某學(xué)校打算開辟一塊食用菌栽培基地,以豐富學(xué)生勞動技術(shù)課內(nèi)容,首先對食用菌試驗室進行清掃和消毒處理,準(zhǔn)備食用菌栽培所需各種原料和用具,然后從菌種站購來各種食用菌菌種.請回答以下問題:第49頁練習(xí)①對買回來菌進行擴大培養(yǎng),首先制備試管培養(yǎng)基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需原料：_________________________________其中提供氮源主要是_______；提供能源主要物質(zhì)是_______；瓊脂作用是_______，它不提供營養(yǎng)。第50頁練習(xí)①對買回來菌進行擴大培養(yǎng),首先制備試管培養(yǎng)基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需原料：_________________________________其中提供氮源主要是_______；提供能源主要物質(zhì)是_______；瓊脂作用是_______，它不提供營養(yǎng)。牛肉膏、蛋白胨、水、無機鹽、瓊脂第51頁練習(xí)①對買回來菌進行擴大培養(yǎng),首先制備試管培養(yǎng)基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需原料：_________________________________其中提供氮源主要是_______；提供能源主要物質(zhì)是_______；瓊脂作用是_______，它不提供營養(yǎng)。牛肉膏、蛋白胨、水、無機鹽、瓊脂蛋白胨第52頁練習(xí)①對買回來菌進行擴大培養(yǎng),首先制備試管培養(yǎng)基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需原料：_________________________________其中提供氮源主要是_______；提供能源主要物質(zhì)是_______；瓊脂作用是_______，它不提供營養(yǎng)。牛肉膏、蛋白胨、水、無機鹽、瓊脂蛋白胨牛肉膏第53頁練習(xí)①對買回來菌進行擴大培養(yǎng),首先制備試管培養(yǎng)基,寫出制備固體牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基所需原料：_________________________________其中提供氮源主要是_______；提供能源主要物質(zhì)是_______；瓊脂作用是_______，它不提供營養(yǎng)。牛肉膏、蛋白胨、水、無機鹽、瓊脂蛋白胨牛肉膏凝固劑第54頁練習(xí)②微生物在生長過程中對各種成份所需量不一樣,故制備培養(yǎng)基時各成份要有適當(dāng)_____,在燒杯加入瓊脂后要不停地_____,預(yù)防_____________________.第55頁練習(xí)②微生物在生長過程中對各種成份所需量不一樣,故制備培養(yǎng)基時各成份要有適當(dāng)_____,在燒杯加入瓊脂后要不停地_____,預(yù)防_____________________.百分比第56頁練習(xí)②微生物在生長過程中對各種成份所需量不一樣,故制備培養(yǎng)基時各成份要有適當(dāng)_____,在燒杯加入瓊脂后要不停地_____,預(yù)防_____________________.百分比攪拌第57頁練習(xí)②微生物在生長過程中對各種成份所需量不一樣,故制備培養(yǎng)基時各成份要有適當(dāng)_____,在燒杯加入瓊脂后要不停地_____,預(yù)防_____________________.百分比攪拌瓊脂糊底引發(fā)燒杯破裂第58頁練習(xí)③將配制好培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入___________中滅菌，壓力為________，溫度為______，時間__________，滅菌完成拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力____________，將試管取出。第59頁練習(xí)③將配制好培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入___________中滅菌，壓力為________，溫度為______，時間__________，滅菌完成拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力____________，將試管取出。高壓滅菌鍋第60頁練習(xí)③將配制好培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入___________中滅菌，壓力為________，溫度為______，時間__________，滅菌完成拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力____________，將試管取出。高壓滅菌鍋100KPa第61頁練習(xí)③將配制好培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞后包上牛皮紙并用皮筋勒緊放入___________中滅菌，壓力為________，溫度為______，時間__________，滅菌完成拔掉電源，待鍋內(nèi)壓力____________，將試管取出。高壓滅菌鍋100KPa