--鱉甲配方顆粒Biejiapeifangkeli【來源】本品為鱉科動物鱉TrionyxsinensisWiegmann的背甲經炮制并按標準湯劑的主要質量指標加工制成的配方顆粒。【制法】取鱉甲飲片10000g，加水煎煮，濾過，濾液濃縮成清膏（干浸膏出膏率為2.5%~7%），加入輔料適量，干燥（或干燥，粉碎），再加入輔料適量，混勻，制粒，制成1000g，即得。【性狀】本品為類白色至黃白色的顆粒；氣微腥，味微咸。【鑒別】（1）取本品適量，研細，取1g，加甲醇5ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液作為供試品溶液。另取鱉甲對照藥材3g，加水70ml，煎煮30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣自“加甲醇5ml”起，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2020年版通則0502）試驗，吸取供試品溶液2μl、對照藥材溶液8μl，分別點于同一用3%醋酸鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以正丁醇-乙醇-冰醋酸-水（4∶1∶1∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。（2）取本品適量，研細，取0.1g，加1%碳酸氫銨溶液50ml，超聲處理30分鐘，用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液1ml，置進樣瓶中，加胰蛋白酶溶液50μl（取序列分析用胰蛋白酶，加1%碳酸氫銨溶液制成每1ml中含1mg的溶液，臨用時配制），搖勻，37℃恒溫酶解12小時，作為供試品溶液。另取鱉源多肽Ⅰ對照品、鱉源多肽Ⅱ對照品，加1%碳酸氫銨溶液制成每1ml含鱉源多肽Ⅰ3μg和鱉源多肽Ⅱ6μg的混合溶液，作為對照品溶液。照高效液相色譜-質譜法（中國藥典2020年版通則0512和通則0431）試驗，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（柱長為100mm，內徑為2.1mm，粒徑為1.7μm或1.8μm）；以乙腈為流動相A，以0.05%甲酸溶液為流動相B，按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫；流速為每分鐘0.35ml。采用質譜檢測器，電噴霧正離子模式化（ESI）正離子模式下進行多反應監(jiān)測（MRM），選擇質荷比（m/z）784.90（雙電荷）→872.46和m/z784.90（雙電荷）→1028.55作為鱉源多肽Ⅰ的檢測離子對；質荷比（m/z）834.09（三電荷）→743.38和m/z834.09（三電荷）→953.52作為鱉源多肽Ⅱ的檢測離子對。取上述混合對照品溶液，進樣2μl，按上述檢測離子對測定的MRM色譜峰的信噪比均應大于3∶1。時間（分鐘）流動相A（%）流動相B（%）0~28→992→912~149→1091→9014~2510→1790→8325~2617→8083→2026~288020吸取供試品溶液2μl，注入高效液相色譜-質譜聯(lián)用儀，測定。以質荷比（m/z）784.90（雙電荷）→872.46、m/z784.90（雙電荷）→1028.55和以質荷比（m/z）834.09（三電荷）→743.38、m/z834.09（三電荷）→953.52離子對提取的供試品離子流色譜中，應同時呈現(xiàn)與相應對照品色譜保留時間相一致的色譜峰。【特征圖譜】照高效液相色譜法（中國藥典2020年版通則0512）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗同【含量測定】項。參照物溶液的制備取鱉甲對照藥材0.1g，置氨基酸水解管中，加9mol/L鹽酸溶液10ml，密塞，150℃水解3小時，放冷，搖勻，濾過，量取濾液5ml，置蒸發(fā)皿中，蒸干，殘渣用0.1mol/L鹽酸溶液使溶解，并轉移至25ml量瓶中，用0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對照藥材參照物溶液。另取【含量測定】項下的對照品溶液，作為對照品參照物溶液1。再取絲氨酸對照品、精氨酸對照品、異亮氨酸對照品、亮氨酸對照品、L-賴氨酸對照品適量，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1ml各含50μg的混合溶液，作為對照品參照物溶液2。供試品溶液的制備同【含量測定】項。精密量取上述參照物溶液與供試品溶液各5ml，分別置25ml量瓶中，各加0.1mol/L異硫氰酸苯酯（PITC）的乙腈溶液2.5ml和1mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5ml，搖勻，室溫放置1小時，用50%乙腈稀釋至刻度，搖勻。取10ml，加正己烷10ml，振搖，放置10分鐘，取下層溶液，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取衍生化后的參照物溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。供試品色譜中應呈現(xiàn)8個特征峰，并應與對照藥材參照物色譜中的8個特征峰保留時間相對應，且應分別與相應對照品參照物峰保留時間相對應。對照特征圖譜峰1：絲氨酸；峰2：甘氨酸；峰3：精氨酸；峰4：脯氨酸；峰5：纈氨酸；峰6：異亮氨酸；峰7：亮氨酸；峰8：L-賴氨酸參考色譜柱：Kromasil100-5C18；4.6mm×250mm，5μm【檢查】應符合顆粒劑項下有關的各項規(guī)定（中國藥典2020年版通則0104）。【浸出物】取本品適量，研細，取約2g，精密稱定，精密加入乙醇100ml，照醇溶性浸出物測定法（中國藥典2020年版通則2201）項下的熱浸法測定，不得少于4.0%。【含量測定】照高效液相色譜法（中國藥典2020年版通則0512）測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.lmol/L醋酸鈉溶液（用醋酸調節(jié)pH值至6.5）（7∶93）的混合溶液為流動相A，以乙腈-水（4∶1）的混合溶液為流動相B；按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫；柱溫為30°C；檢測波長為254nm。理論板數(shù)按脯氨酸峰計算應不低于4000。時間（分鐘）流動相A（%）流動相B（%）0~9100→970→39~2297322~2397→833→1723~3283→8217→1832~3882→7018→3038~4570→6630→3445~4766→034→10047~550100對照品溶液的制備取甘氨酸對照品、脯氨酸對照品、纈氨酸對照品適量，精密稱定，加0.1mol/L鹽酸溶液制成每1ml含甘氨酸0.54mg、脯氨酸0.32mg、纈氨酸70μg的混合溶液，即得。供試品溶液的制備取本品適量，研細，取約0.2g，精密稱定，置氨基酸水解管中，精密加入9mol/L鹽酸溶液10ml，密塞，稱定重量，150℃水解3小時，放冷，再稱定重量，用9mol/L鹽酸溶液補足減失重量，搖勻，濾過，精密量取濾液5ml，置蒸發(fā)皿中，蒸干，殘渣用0.1mol/L鹽酸溶液使溶解，并轉移至25ml量瓶中，用0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。精密量取上述對照品溶液與供試品溶液各5ml，分別置25ml量瓶中，各加0.1mol/L異硫氰酸苯酯（PITC）的乙腈溶液2.5ml和1mol/L三乙胺的乙腈溶液2.5ml，搖勻，室溫放置1小時，用50%乙腈稀釋至刻度，搖勻。取10ml，加正己烷10ml，振搖，放置10分鐘，取下層溶液，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取衍生化后的對照品溶液與