ICS65.020.20CCSB612301IDB2301/T212—2024前言 2規范性引用文件 3術語和定義 4外植體的采集與消毒 4.1外植體采集 4.2外植體的消毒 5培養基制備 5.1培養基配比 5.2培養基滅菌 5.3培養基保存 6培養程序 6.1初代培養 6.2繼代培養 6.3生根培養 7煉苗與移栽 7.1煉苗 7.2移栽 9生產檔案 DB2301/T212—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由哈爾濱市農業農村局提出并歸口。本文件起草單位：黑龍江省農業科學院鄉村振興科技研究所、中國科學院東北地理與農業生態研究所、哈爾濱市農業技術推廣總站、黑龍江省林業科學院、雙鴨山市寶清縣龍頭鎮農業鄉村振興服務發展中心、雙鴨山市寶清縣朝陽鎮農業鄉村振興服務發展中心、伊春市農業綜合服務中心。本文件主要起草人：趙文博、段亞東、孫嬡麗、李靖彤、張鹍、宋鵬慧、周春薇、周雙、毛俊瑩、劉爭、侯帥、溫智鈞、梁海婷、許志偉、肖珩、呂德寶、郝淑榮、張甜甜。DB2301/T212—20241越桔組織培養技術規程本文件規定了越桔（Vacciniumvitis-idaeaL.）組織培養育苗技術的外植體的采集與消毒、培養基制備、培養程序、煉苗與移栽、出圃和生產檔案等。本文件適用于越桔的組織培養育苗。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T8321（所有部分）農藥合理使用準則LY/T1882—2010林木組織培養育苗技術規程NY/T1276農藥安全使用規范總則3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4外植體的采集與消毒4.1外植體采集4月～7月份的晴天剪取葉片表面無露水、生長健壯且無病蟲害的當年生嫩枝，去掉葉片并留1mm~2mm葉柄作為外植體。4.2外植體的消毒4.2.1將剪成帶1個芽的外植體莖段用流水沖洗10min～20min。4.2.2用75%酒精對雙手及手腕消毒，將外植體置于已滅菌的燒杯中，先用75%酒精浸泡30s，無菌水清洗3次，每次30s。4.2.3再用10%次氯酸鈉溶液滅菌10min，無菌水清洗3次，每次30s。4.2.4用無菌濾紙吸干外植體表面的水分備用。4.2.5藥劑應符合GB/T8321和NY/T1276的規定。5培養基制備5.1培養基配比5.1.1基礎培養基基礎培養基為WPM，基礎培養基配制方法按LY/T1882中4.2.1規定執行。DB2301/T212—202425.1.2初代培養基初代培養基按WPM1L+ZT2.0mg～4.0mg＋蔗糖30g＋瓊脂7g進行配置，pH值5.2～5.4。5.1.3繼代培養基繼代培養基按WPM1L+IBA0.1mg～0.2mg+ZT2.0mg～4.0mg＋蔗糖30g＋瓊脂7g進行配置，pH值5.2～5.4。5.1.4生根培養基生根培養基按WPM1L+IBA3.0mg～4.0mg＋NAA0.4mg+蔗糖60g＋瓊脂14g進行配置，pH值5.2～5.4。5.2培養基滅菌培養基在壓力0.105MPa、溫度121℃的條件下滅菌20min。滅菌物應不超過滅菌鍋容積的3/4。5.3培養基保存滅菌后的培養基放入接種室，應避免陽光直射，在18℃~22℃條件下存放不宜超過7d。6培養程序6.1初代培養6.1.1接種在超凈工作臺上將已消毒的外植體莖段垂直插入初代培養基，每個培養瓶接種3個～5個莖段，均勻分布，接種后將培養瓶瓶口在酒精燈火焰上灼燒1s～2s，迅速蓋好瓶蓋，放入培養室培養。6.1.2培養條件白天25℃±2℃,夜間不低于15℃。黑暗培養7d后，轉入光照培養。相對空氣濕度70%～80%，光照強度為2000Lux～3000Lux，光照時間為12h/d～16h/d。待嫩芽長出后，進行繼代培養。6.2繼代培養6.2.1接種將初代培養后長出的嫩莖剪成1cm左右的莖段，插入新鮮的增殖培養基中進行繼代培養。6.2.2培養條件白天25℃±2℃,夜間不低于15℃。相對空氣濕度70%～80%，光照強度為2000Lux～3000Lux，光照時間為12h/d～16h/d。6.3生根培養6.3.1接種選取由繼代培養獲得的生長健壯、高度大于2cm的無菌不定芽接入生根培養基上進行生根培養。6.3.2培養條件DB2301/T212—20243繼續按6.2.2的要求培養。待生根后2周～3周，選取根長1.5cm～2.5cm、須根不少于3條的瓶苗，將其放置溫室進行煉苗。7煉苗與移栽7.1煉苗先將培養瓶置于溫度在20℃~30℃的溫室進行閉瓶煉苗3d，再打開培養瓶蓋煉苗2d，煉苗期間避免強光直射和高溫灼傷瓶苗。7.2移栽7.2.1基質配置以草炭土、蛭石配比為1:1混合作為移栽基質，可加入多菌靈消毒基質，備用。藥劑應符合GB/T8321和NY/T1276的規定。7.2.2移栽方法7.2.2.1將組培苗從瓶中取出，用流水沖洗掉粘附于根部的培養基，將瓶苗移入準備好的穴盤或營養缽中，扶正，使根系盡量舒展，用基質將根埋好并壓緊。7.2.2.2移栽后，在遮蔭且通風條件下栽培，每天向葉面噴水，