ICS65.120DB13B46河北省地方標準DB13/T1384.9—2011飼料中伊維菌素的測定Determinationoftylosininfeed河北省質量技術監督局發布DB13/T1384.9—2011前言本標準按照GB/T1.1－2009給出的規則起草。本標準由河北省質量技術監督局提出。本標準起草單位：河北省食品質量監督檢驗研究院、石家莊市疾病預防控制中心、河北醫科大學、北京出入境檢驗檢疫技術中心、河北省飼料產品質量監督檢驗站。本標準主要起草人：張巖、張宏、李揮、叢斌、盧曉宇、呂品、楊立學、李志平、賈茜、馬春玲、米振杰、張敬軒、沈磊、高振同、武英利。IDB13/T1384.9—2011飼料中伊維菌素的測定1范圍本標準規定了飼料中伊維菌素的液相色譜-串聯質譜測定方法。本標準適用于飼料中伊維菌素的測定。本標準的方法檢出限為10μg/kg。2規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法（GB/T6682－1992，neqISO3696:1987)3原理試樣中的伊維菌素，采用丙酮-水提取。提取液經用異辛烷進行液-液分配使被測物進入異辛烷層。濃縮，用正己烷與乙腈浸出，并進行第二次液-液分配使被測物進入乙腈層。濃縮，加水，使成水溶液。水溶液再經Sep－Pak小柱凈化，用乙腈洗脫。洗脫液經蒸干，甲醇浸出并定容，溶液經液相色譜-串聯質譜定性定量檢測。丙酮：經高錳酸鉀回流lh，重蒸餾。4.10伊維菌素標準儲備液：準確稱取0.1g（準確至0.000lg）的伊維菌素標準品于100mL容量瓶中，用少量的甲醇溶解，然后再用甲醇稀釋至刻度，混勻。配制成伊維菌素濃度為1.0mg/mL的標準儲備液。4.11伊維菌素標準工作液：根據需要，準確移取適量標準儲備液，用甲醇稀釋成適當濃度的標準工作液，標準工作液需每周配制一次。1DB13/T1384.9—20114.130.1％甲酸水溶液：準確量取1mL甲酸至1000mL容量瓶中，用水定容，混勻即可。5儀器和設備5.1液相色譜-串聯質譜儀：配有電噴霧離子源。5.2電子天平：感量精確至0.01g。5.3離心管：50mL。5.45.55.65.7離心機。旋轉蒸發器。超聲波浴。旋渦混勻器。6測定步驟6.1提取稱取約5g（精確至0.0lg）試樣于燒杯中，加入10mL丙酮-水（1+1），旋渦混勻2min。移至50mL離心管中，用20mL異辛烷洗滌燒杯，合并入離心管中。旋渦混勻1min，于5000r/min離心10min，取異辛烷層氮吹至2mL。6.2凈化取上述濃縮液加入8mL正己烷和10mL乙腈，于超聲波浴中超聲振搖5min。移至50mL離心管中，于5000r/min離心5min。移乙腈層于50mL離心管中。再用10mL乙腈提取一次，離心5min，合并乙腈層。加入20mL水，于60℃旋轉蒸發濃縮至約6mL，加入6mL水。取上述溶液緩慢注入經預處理過的C18Sep－Pak小柱中，棄去流出液，減壓干燥。用3×5mL乙腈洗脫，收集洗脫液于具塞刻度離心管中。氮氣吹干，用1.0mL甲醇－乙腈－水溶液（9+9+2）溶解，待測。2DB13/T1384.9—2011表1梯度洗脫程序時間（min）0A（％）B（％）606090951010606040401051.002.0011.0011.1012.5012.6015.00909040606.3.2色譜測定根據試樣中被測樣液的含量情況，選取響應值相近的標準工作液進行色譜分析。標準工作液和樣液中待測物的響應值均應在儀器線性響應范圍內。伊維菌素標準品多反應監測（MRM）色譜圖見附錄A。6.4定性、定量按照液相色譜-串聯質譜條件測定樣品和標準工作溶液，如果檢測的質量色譜峰保留時間與標準品一致，定量測定時采用標準曲線法。定性時應當與濃度相當標準工作溶液的相對豐度一致，相對豐度允許偏差不超過表2規定的范圍，則可判斷樣品中存在對應的被測物。表2定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差除不加試樣外，均按上述操作步驟進行。m——最終樣液代表的試樣質量，單位為克（g）。