ICS65.120DB13B46河北省地方標準DB13/T1384.3—2011飼料中鏈霉素的測定Determinationofstreptomycininfeed河北省質量技術監(jiān)督局發(fā)布DB13/T1384.3—2011前言本標準按照GB/T1.1－2009給出的規(guī)則起草。本標準由河北省質量技術監(jiān)督局提出。本標準起草單位：河北省食品質量監(jiān)督檢驗研究院、石家莊市疾病預防控制中心、北京出入境檢驗檢疫局技術中心、河北省醫(yī)科大學、河北省飼料產品質量監(jiān)督檢驗站。本標準主要起草人：張巖、楊立學、李揮、叢斌、呂品、張宏、盧曉宇、李志平、賈茜、張敬軒、馬春玲、米振杰、沈磊、高振同、武英利。IDB13/T1384.3—2011飼料中鏈霉素的測定12范圍本標準規(guī)定了飼料中鏈霉素的液相色譜-串聯(lián)質譜測定方法。本標準適用于飼料中鏈霉素的測定。本標準的方法檢出限為20μg/kg。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法（GB/T6682－1992，neqISO3696:1987)3原理試樣經提取，高速離心后再用陽離子交換柱凈化，液相色譜串聯(lián)質譜測定，子離子豐度比定性，外4.2七氟丁酸酐（HFBA）：優(yōu)級純。4.6二水合乙二胺四乙酸二鈉（Na2EDTA·2H2O）。4.7樣品提取液（10mmol/LKH2PO4溶液，含0.4mmol/LEDTA和2％三氯乙酸）：準確稱量1.36gKH2PO4于1000mL容量瓶中，加入少量水，用鹽酸調pH至4.0，再加入1.5gNa2EDTA·2H2O和20g三氯乙酸，用水定容至刻度，混勻即得。4.10鏈霉素標準儲備溶液：分別稱取經折算相當于0.0100g鏈霉素的標準品，用水溶解定容至100mL，溶液濃度為100g/mL。1℃～4℃冷藏保存，保存期1個月。4.11空白樣品提取液：用不含鏈霉素的樣品，按照6.1和6.2制備空白樣品溶液。4.12鏈霉素標準系列工作溶液：根據(jù)需要用空白樣品溶液將標準儲備液稀釋成15ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、250ng/mL、300ng/mL的混合標準工作溶液，相當于樣品中含有6g/kg、10g/kg、20g/kg、100g/kg、120g/kg鏈霉素，現(xiàn)配。1DB13/T1384.3—20114.13CBX陽離子交換柱，或相當者：500mg，6mL。4.14乙酸。10％乙酸甲醇溶液：準確量取10mL乙酸于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混勻即可。4.154.16100mmol/LHFBA水溶液：準確量取6.5mL七氟丁酸酐，用水稀釋至500mL（4℃避光保存6個月）。4.1720mmol/LHFBA水溶液：準確量取100mmol/LHFBA溶液50mL，用水稀釋至250mL（4℃避光保存6個月）。4.185mmol/LHFBA水溶液：準確量取20mmol/LHFBA溶液25mL，用水稀釋至100mL（4℃避光保存6個月）。4.1920mmol/LHFBA乙腈溶液：準確量取1.3mL七氟丁酸酐，用乙腈稀釋至500mL（4℃避光保存6個月）。5儀器和設備5.1液相色譜-串聯(lián)質譜儀：配有電噴霧離子源。5.2微孔濾膜。5.3pH計。5.4高速離心機。5.5旋渦混勻器。5.6固相萃取裝置。準確稱取樣品1g（精確到0.01g）至10mL離心管中，加樣品提取液10mL，旋渦混勻10min，12000r/min離心10min，移出上清液。重復提取一次，合并上清液，調pH至8.0，12000r/min離心10min，取上清液備用。將上清液移入CBX柱（使用前分別用5mL甲醇、5mL水預處理，保持柱體濕潤）。溶液以2.0mL/min的流速過柱，然后依次用水淋洗，減壓抽干20min。用10％乙酸甲醇溶液5mL洗脫，收集洗脫液于40℃下氮氣吹干。用5mmol/LHFBA水溶液0.5mL溶解殘渣，15000r/min離心10min，經0.22μm濾膜過濾后，待測。梯度：0min～10.0min5％～60％B，10.0min～10.1min60％～5％B，10.1min～15.0min5％2DB13/T1384.3—2011離子源：電噴霧離子源。掃描方式：正離子掃描。檢測方式：多反應監(jiān)測。電噴霧電壓、碰撞電壓等自動優(yōu)化至最佳值。定性離子對：582.7/263.1，582.7/246.3。定量離子對：582.7/263.1。6.3.2色譜測定根據(jù)試樣中被測樣液的含量情況，選取響應值相近的標準工作液進行色譜分析。標準工作液和樣液中待測物的響應值均應在儀器線性響應范圍內。鏈霉素標準品多反應監(jiān)測{MRM〉色譜圖參見附錄A.6.4定性、定量按照液相色譜-串聯(lián)質譜條件測定樣品和標準系列工作溶液，如果檢測的質量色譜峰保留時間與標準品一致，定量測定時采用標準曲線法。定性時應當與濃度相當標準工作溶液的相對豐度一致，相對豐度允許偏差不超過表1規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在對應的被測物。表1定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度/(％)＞50±20＞20至50±25＞10至20±30≤10±50允許的相對偏差/(％)除