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廣東省種子協(xié)會團體標準

T/XXXXXXX—XXXX

國家甘薯種質(zhì)資源圃（廣州）脫毒試管苗

保存技術(shù)規(guī)程

TechnicalregulationsforpreservationofVirus-freetubeseedlingsinNational

SweetpotatoGermplasmResourcesNursery(Guangzhou)

（征求意見稿）

在提交反饋意見時，請將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實施

廣東省種子協(xié)會發(fā)布

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國家甘薯種質(zhì)資源圃（廣州）脫毒試管苗

保存技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了國家甘薯種質(zhì)資源圃（廣州）脫毒試管苗保存的程序和技術(shù)要求。

本文件適用于國家甘薯種質(zhì)資源圃（廣州）甘薯種質(zhì)資源的安全保存，其他地區(qū)甘薯種質(zhì)資源圃資

源保存可參考執(zhí)行。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

NY/T3757-2020農(nóng)作物種質(zhì)資源調(diào)查收集技術(shù)規(guī)范

NY/T4263-2023農(nóng)作物種質(zhì)資源庫操作技術(shù)規(guī)程種質(zhì)圃

NY/T2939-2016甘薯種質(zhì)資源描述規(guī)范

NY/T1320-2007農(nóng)作物種質(zhì)資源鑒定技術(shù)規(guī)程甘薯

NY/T402-2000脫毒甘薯種薯(苗)病毒檢測技術(shù)規(guī)程

NY/T1200-2006甘薯脫毒種薯

DB51/T905-2009甘薯脫毒種薯(苗)質(zhì)量標準

DB34T185.1-1999脫毒甘薯生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程良種繁育規(guī)程

DB34T185.2-1999脫毒甘薯生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程栽培技術(shù)規(guī)程

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

試管苗保存invitropreservation

采用組織培養(yǎng)技術(shù)，在試管中保持無性繁殖的作物種質(zhì)材料。

組織培養(yǎng)tissueculture

在無菌和人工控制條件下，對生物的原生質(zhì)體、細胞、組織和器官進行離體培養(yǎng)，并控制其生長發(fā)

育的技術(shù)過程。

繼代培養(yǎng)sub-culture

把原始培養(yǎng)物的一部分組織或器官無菌轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)基上，重新培養(yǎng)形成新的一代組織或植株。

脫毒試管苗virus-freetubeseedlings

經(jīng)過嚴格病毒檢測確認不含病毒，且經(jīng)過株系評選而中選的優(yōu)良試管苗以及用它離體快繁或防好

蟲條件下速繁后得到的甘薯苗。

莖尖組培苗meristem-tipseedlingcultivation

由甘薯莖尖分生組織培養(yǎng)誘導而成的再生小苗。

復份保存duplicatestorage

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將同一份種質(zhì)分別在不同保存設(shè)施中進行備份保存，以避免因戰(zhàn)爭或自然災害可能給種質(zhì)資源造

成的毀滅性損失。

4種質(zhì)材料獲得

獲得途徑

收集、征集、引進的種質(zhì)、資源圃內(nèi)需復份保存的種質(zhì)。

材料要求

4.2.1收集獲得的種質(zhì)材料應是健壯、健康的母體植株或塊根。

4.2.2在野外采集時，可將相關(guān)器官組織直接收集帶回，或是經(jīng)表面消毒后，接種到加有殺真菌劑和

抗菌素的培養(yǎng)基上再帶回。

4.2.3在獲得種質(zhì)材料時應同時登記種質(zhì)的基本資料信息。

必要信息

名稱、原產(chǎn)地、種質(zhì)類型、材料類型（塊根、幼苗）、數(shù)量、狀態(tài)、原單位編號、采集號。

5種質(zhì)材料預處理

預處理步驟

把植株、塊根等種質(zhì)材料表面沖洗干凈，放在比較干凈的環(huán)境中發(fā)芽，然后進行溫室種植或田間種

植成苗，以便獲得較多的外植體材料。

取材

取材時要注意選擇表現(xiàn)該種質(zhì)典型特性，且生長健壯，無明顯病毒性、真菌性、細菌性病害癥狀的

植株或其健康塊根等作為試材。

6莖尖培養(yǎng)與增殖

外植體消毒

按以下方法進行：

a)選取生長健壯植株，自頂端剪取約3厘米的苗頭，除去葉柄，用約2%的洗衣粉水泡洗10分鐘，

自來水沖洗5分鐘，除去表面攜帶的污漬；

b)70%酒精消毒30秒，殺死表層細菌，無菌水沖洗1次；

c)0.1%升汞消毒6分鐘，進一步殺死外質(zhì)體攜帶的微生物，無菌水泡洗4次，除去升汞。

莖尖剝?nèi)?/p>

在12X解剖鏡下用解剖針逐漸剝?nèi)ネ饷娴娜~原基，直到露出白色的生長點，用解剖針將生長點取下，

剝?nèi)〉纳L點大小約0.5毫米。

培養(yǎng)與增殖

將剝?nèi)〉纳L點放入分化培養(yǎng)基中28℃光照培養(yǎng)，光照周期為12小時/24小時。待分化成苗后轉(zhuǎn)入

MS培養(yǎng)基中，28℃光照培養(yǎng)光照周期為12小時/24小時。

7病毒檢測

將再生苗按株系進行擴繁，取其中一部分進行病毒檢測，篩選出表現(xiàn)陰性的脫毒苗，以備用于種質(zhì)

無毒化保存和種質(zhì)典型性鑒定。甘薯脫毒苗病毒檢測方法按NY/T402-2000脫毒甘薯種薯(苗)病毒檢測

技術(shù)規(guī)程種的方法進行。

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8擴繁

典型性鑒定

脫毒苗擴繁前，首先進行種質(zhì)典型性鑒定。采用形態(tài)標記、同工酶生化標記和分子標記技術(shù)相結(jié)合

的方法，鑒定結(jié)果未發(fā)生變異時，再進行擴大繁殖。

增殖

經(jīng)過病毒檢測呈陰性反應的脫毒植株且經(jīng)鑒定未發(fā)生變異后，用單節(jié)切段的方法，轉(zhuǎn)接到MS或含有

多種附加物的固體培養(yǎng)基的試管內(nèi)進行增殖。繁殖出的試管苗可用作試管保存，或作為種質(zhì)資源交換材

料和再擴繁后提供生產(chǎn)上應用。

9入庫保存

試管苗保存

將繁殖試管苗切段轉(zhuǎn)入保存培養(yǎng)基上生長15～30天，然后放人試管苗保存庫進行保存。每份種質(zhì)保

存時應選用5個株系，每株系取3個帶芽節(jié)段，每個芽段接種在一個試管內(nèi)，每份種質(zhì)保存總數(shù)為14～15

支管。保存培養(yǎng)基一般采用固體培養(yǎng)基。選擇適宜的試管苗低溫保存條件將有效延長更新繼代培養(yǎng)的間

期。

編號與記錄

存放種質(zhì)前應對保存庫的保存架進行架、層的編號，種質(zhì)材料放到保存架后，應記錄所存放種質(zhì)的

種類、份數(shù)、架、層的編號、人庫時間。每份種質(zhì)必須攜帶雙標簽，并標明品種名稱和全國統(tǒng)一編號，

并放在每份材料的燒杯里或泡沫塑料盤上。

10監(jiān)測管理

定期監(jiān)測檢查

試管苗進入試管苗庫保存后，進行每月一次定期觀察并記錄，發(fā)現(xiàn)污染要及時消除，保持清潔，防

止丟失。

觀察檢查內(nèi)容

管中苗高，葉子變化，根(系)發(fā)育狀況，氣生根狀況，培養(yǎng)基變化狀況，污染情況，試管苗存活率，

繼代保存期限。

遺傳穩(wěn)定性監(jiān)測

可采用形態(tài)標記、同工酶生化標記和分子標記技術(shù)相結(jié)合的方法進行遺傳穩(wěn)定性檢測。

11保存條件

試管苗庫的清潔

11.1.1種質(zhì)入庫之前庫房的清潔：可采用高錳酸鉀（少量）加甲醛為熏蒸劑，熏蒸24h。

11.1.2種質(zhì)保存過程中的清潔：定期清洗和消毒制冷設(shè)備和除濕設(shè)備上的過濾網(wǎng)，以防止病原菌附著

在上面而成為污染源，同時保持操作人員進出庫時的清潔。

保存條件的穩(wěn)定

11.2.1維護好保存庫設(shè)備的正常運轉(zhuǎn)。

11.2.2在夏天高溫高濕季節(jié)更要確保溫濕度、通風透氣、光照條件的穩(wěn)定，尤其是將保存庫濕度控制

在50％以下，以防止病原菌的滋生而減少污染。

11.2.3定期檢查通風換氣系統(tǒng)，確保通風換氣系統(tǒng)的正常工作，或定期進行通風換氣。

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12更新繼代

更新標準

更新培養(yǎng)的標準為保存的試管苗存活率降到50％左右。

更新步驟

更新時取出植株轉(zhuǎn)接在新配制的保存培養(yǎng)基上，常規(guī)培養(yǎng)15～30天后再轉(zhuǎn)人庫房內(nèi)保存。

注意事項

每株存活苗都要切取一定數(shù)量莖段接種，以保持品種的種性或遺傳完整性。

13信息資料管理

基本信息

基本信息包括全國統(tǒng)一編號、原保存單位編號、種質(zhì)名稱、提供者、原產(chǎn)地等。每份離體種質(zhì)的原

始信息和農(nóng)藝特性檢測信息，由提供者提供，以便查詢母體植株的信息。

管理信息

管理信息包括入庫初始信息、監(jiān)測信息、更新信息和利用信息。入庫初始信息有入庫保存日期、庫

編號、庫位號、保存量、種質(zhì)典型性鑒定、培養(yǎng)基污染情況等。

數(shù)據(jù)庫管理

利用計算機建立離體種質(zhì)保存信息數(shù)據(jù)庫，包括基本信息資料、系統(tǒng)信息資料和管理信息資料、莖

尖培養(yǎng)試驗記錄項目、離體種質(zhì)保存觀察項目。資源信息資料、監(jiān)測數(shù)據(jù)檔案等，定為保密資料，不得

隨意轉(zhuǎn)借、抄錄、拍攝或外泄。

4

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A

A

附錄A

（規(guī)范性）

國家甘薯種質(zhì)資源圃（廣州）脫毒試管苗基本信息登記

給出國家甘薯種質(zhì)資源圃（廣州）脫毒試管苗基本信息登記表。

表A.1國家甘薯種質(zhì)資源圃（廣州）脫毒試管苗基本信息登記表

填表人：年月日

種質(zhì)名稱全國統(tǒng)一原編號原產(chǎn)地提供者種質(zhì)類型材料類型數(shù)量狀態(tài)備注

編號

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B

B

附錄B

（規(guī)范性）

國家甘薯種質(zhì)資源圃（廣州）脫毒試管苗入庫登記

給出國家甘薯種質(zhì)資源圃（廣州）脫毒試管苗入庫登記表。

表B.1國家甘薯種質(zhì)資源圃（廣州）脫毒試管苗入庫登記表

填表人：年月日

全國統(tǒng)一入庫保存種質(zhì)典型性鑒定培養(yǎng)基污染

種質(zhì)名稱原編號庫編號