美姑山羊人工授精技術規程2023-12-05發布2023-12-30實施涼山彝族自治州市場監督管理局發布I Ⅱ 12規范性引用文件 13術語和定義 14種公羊的選擇與訓練 25采精 26精液品質檢查 37精液稀釋 48母羊同期發情 49母羊發情鑒定 510輸精 5附錄A(資料性附錄)美姑山羊人工授精站所需儀器、設備 7本標準按照GB/T1.1和GB/T1.2進行編寫。本標準由涼山彝族自治州農業農村局歸口。本標準由美姑縣養殖技術推廣中心、四川農業大學、涼山彝族自治州農業科學研究院提出并起草。本標準由美姑縣養殖技術推廣中心、四川農業大學、涼山彝族自治州農業科學研究院負責解釋。本標準主要起草人：沙馬說布、王林杰、楊世忠、阿西伍牛、占思遠、阿棉、陳益、安拉扎、孟群英、吉色曲伍、范景勝、阿則曉龍、彭航馨。1DB5134/T40—2023本標準規定了美姑山羊種公羊選擇、采精、精液品質檢查、精液稀釋、母羊同期發情、母羊發情鑒本標準適用于涼山州美姑山羊種羊場、種羊生產專業戶和美姑山羊人工授精站。下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。NY/T1236綿、山羊生產性能測定技術規范DB5134/T2美姑山羊3術語和定義下列術語和定義適用于本標準。美姑山羊美姑山羊被毛黑色，以黑色為主。頭大小中等，兩耳短側立，鼻梁微拱，角多為弓形，多有胡須，有肉髯者約占30%,蹄質堅實，蹄冠黑色，短瘦尾。是指借助于專門器械，用人工方法采取公羊的精液，經體外檢查與處理后，輸入發情母羊的生殖道內，使其受胎的一種繁殖技術。同期發情用孕激素制劑處理，采用CIDR(羊用孕激素陰道栓)+PMSG法，促使母羊在同一時間發情。假陰道2采精用具，由硬橡膠外殼、柔軟橡膠內膜和帶夾層玻璃集精杯組成，簡狀結構，用前組裝。精子活力37℃溫度鏡檢，直線前進運動精子占總數的百分比。精子密度每毫升精液中所含精子數，分密、中、稀三級。4種公羊的選擇與訓練4.1種公羊的選擇種公羊的選擇應參照DB5134/T2執行，具有種用體況，達到二級以上標準。4.2采精訓練對于初次參加采精的種公羊，在配種前1個月驅除內、外寄生蟲，同時應有計劃地進行調教，每天保持3h~5h運動時間。在配種開始前1個月，定人定時，每天采精一次，兩周以后每兩天一次，每次均應取樣進行精液品質檢查，精子活力不低于0.8。5采精5.1采精場地要求采精室面積10m2~15m2、精液品質檢查室10m2和輸精室10m2,室溫保持在18℃~25℃。人工授精站要求地面平坦而防滑，環境安靜，衛生狀況良好。5.2采精前的準備5.2.1用具的準備和消毒5.2.1.1用具的準備用具準備包括顯微鏡、假陰道、集精杯等，詳見附錄A。5.2.1.2用具的消毒凡是和精液可能接觸的器械均應消毒處理。輸精器械用2%的重碳酸鈉和1.5%的碳酸鈉溶液反復沖洗后，再用清水沖2次~3次，最后用蒸餾水沖洗后懸于室內，自然干燥，使用前再用生理鹽水沖洗2次~3次。毛巾、臺布、紗布、蓋布等用肥皂水洗滌后，再用清水清洗，干燥備用。5.2.2假陰道的安裝將假陰道各部件充分洗滌干凈，用蒸餾水沖洗后，放在消毒柜中干燥，安裝前將瓷盤用75%酒精消毒。逐件檢查各部件是否有破損、漏水、針眼。首先，將內胎光面向里，向外翻到外殼上，將集精杯安3裝在假陰道上，用紗布套和皮圈固定；其次，從外殼中央小孔在內胎與夾壁間注入50℃~55℃熱水，約占1/2體積；用消毒的玻璃棒蘸取少量凡士林或石蠟油，從外口向內均勻涂抹，涂抹深度為假陰道長度的1/2;內胎充氣至壓力適當(假陰道外口的內胎呈Y型，溫度計插入時感到有一定阻力),用消毒的溫度計插入假陰道內檢查溫度，以保證采精時溫度達到40℃~42℃。5.3人工采精人工采精最好選擇發情母羊做臺羊，也可以選擇固定臺羊。采精時，采精人員右手緊握假陰道，用食指、中指夾好集精瓶，使假陰道活塞朝下，蹲于臺羊的右后側。待公羊爬跨臺羊且陰莖伸出時，采精人員用左手輕撥公羊包皮(勿觸龜頭),將陰莖導入假陰道(假陰道應與地面呈35°角)。公羊向上一沖，說明已經射精。待公羊跳下，立即放掉假陰道內空氣，并垂直放置。打開活塞上的氣嘴，放出空氣，取下集精瓶，進行精液品質檢查。種公羊每天可采精2次~3次，第一、二次采精后休息2h方可進行第三次采精，每周休息1d。采精后要及時做好種公羊采精記錄。成年公羊每次射精量為0.5mL～2mL,一般為1mL。6.1.2色澤6.1.3氣味正常的精液略有腥味。凡有腐臭味或異味者，均表示不正常，不能用于輸精。6.1.4云霧狀肉眼觀察采到的新鮮精液，可以看到由于精子活動所引起的像云霧狀似的翻騰滾動。精子的密度越大、活力越強，其云霧狀越明顯。6.2顯微鏡檢查用玻棒沾取少量原精液在載玻片上用400倍~600倍的生物顯微鏡觀察，可以評定精子的密度和活6.2.2活力指標以五級評定。100%的精子做直線前進運動者為一級；80%為二級；60%為三級；40%為四級；20%以下者為五級。三級以上者可用于輸精。以“密、中、稀”評定。“密”:精子數充滿視野，精子間無空襲；“中”:精子之間有明顯的空隙，彼此之間的距離大約1個~2個精子；“稀”:只有少數精子，精子之間的空隙超過2個以上。在4用注射用生理鹽水或經過過濾消毒的0.9%氯化鈉溶液作為稀釋液。按照1:6稀釋輸精0.3mL。7.1.2葡萄糖-卵黃稀釋液于100mL蒸餾水中加葡萄糖3g,檸檬酸鈉1.4g,溶解后過濾3次~4次，蒸汽滅菌，冷卻至室溫，加新鮮雞蛋的卵黃20mL,青霉素10萬U,鏈霉素10萬U,充分混勻。按照1:6稀釋輸精0.3mL。7.2稀釋倍數力和密度檢查，然后確定稀釋倍數。稀釋后的精液，每毫升精液的有效精子數不得少于7億個。7.3精液稀釋操作精液與稀釋液同放入30℃左右的溫水中水浴5min左右，溫度相同時再進行稀釋。用消毒過的帶有刻度7.4精液的保存和運輸同期發情通常采用放置孕激素陰道栓(CIDR)+注射孕馬血清促性腺激素(PMSG)法。8.2放置孕激素陰道栓放置陰道栓時，首先用0.2%新潔爾滅消毒劑噴灑母羊外陰部消毒。然后用止血鉗夾住羊用棉栓外栓外管緩慢向前推送，使陰道栓留于陰道內，拉線露出陰門外3cm左右，把導管抽出。8.3注射孕馬血清促性腺激素用孕激素制劑處理母羊11d,拉住陰道栓外露拉線，緩慢5激素400IU,2d~3d后被處理的大多數母羊發情，發情的當天和次日各輸精一次。9.1外部觀察法發情母羊常表現興奮不安鳴叫不止、食欲減退、不停擺尾、母羊間相互爬跨、靜立反應，外陰充血紅腫、柔軟而松弛。9.2陰道檢查法利用開腔器進行陰道發情檢查。如果發現母羊陰道粘膜充血發紅，陰道有分泌物(發情初期粘液較少而稀薄，中期粘液增多，后期變得粘稠);子宮頸松弛、充血，子宮頸口開張，即可判定為發情。輸精前應準備玻璃輸精器、開腔器、輸精管等器材。所有可能在操作中用到的器材均要消毒滅菌，其方法參照“采精前的準備”中關于器械的滅菌消毒方法。10.1.2輸精人員的準備輸精人員應穿工作服，剪短磨光手指甲，洗凈擦干雙手，用75%酒精消毒，再用生理鹽水沖洗。10.1.3母羊保定把發情母羊牽到輸精架上保定，并將其外陰部擦洗消毒。生產中可采取一人背對羊頭騎于母羊背上，抬起母羊的兩后肢，固定好母羊，以便輸精。10.1.4冷凍精液的準備對于冷凍精液，要在37℃水浴鍋中快速解凍30min,并在顯微鏡下檢查其活力，冷凍精液解凍后精子活力0.3以上才能用于輸精。每次輸精0.25mL,有效精子數不少于5000萬。10.1.5新鮮精液的準備對于鮮精，要求精子活力0.7以上才能用于輸精，鮮精每次輸入直線前進運動的精子在7500萬個以上，即原精液的輸精量為0.05mL～0.10mL,或者稀釋后精液的輸精量為0.2mL以上。10.2輸精方法輸精時間在母羊發情后12h～24h,采取開腔器方法輸精。輸精前將母羊外陰部用來蘇兒溶液擦洗消毒。輸精人員將開腔器閉合，按母羊陰門的形狀緩慢插入，然后轉動90°,打開開腔器。將輸精器前端緩慢插入子宮頸口內0.5cm~1.0cm,用拇指輕輕推動輸精器的活塞，注入精液。如果是初配母羊，陰道狹窄，采取陰道輸精，輸精的劑量加大一倍。剛輸精后的母羊應休息10min左右，不要立即驅趕或放牧，防止精液倒流。在第一次輸精后，間隔8h～12h再輸精一次。610.3做好母羊配種記錄，定期檢查受胎情況。輸精后的母羊要進行登記，包括母羊號、公羊號、輸精時間等，以便于在下一個情期來臨時觀察該母羊是否返情，計算預產期，方便飼養管理。7DB5134/T40—2023(資料性)美姑山羊人工授精站所需儀器