傳代培養(yǎng)及細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆諅鞔囵B(yǎng)的一般方法和步驟以及培養(yǎng)過程中的無菌操作技術(shù)。熟悉培養(yǎng)細(xì)胞的觀察方法。學(xué)習(xí)血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)方法。實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞在培養(yǎng)皿長成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分皿就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分皿。實(shí)驗(yàn)用品儀器：培養(yǎng)箱（調(diào)整至37℃）、培養(yǎng)皿、超凈工作臺、倒置相差顯微鏡。材料：卵巢癌細(xì)胞HO-8910。試劑：1640培養(yǎng)基（含血清10%）、0.25%胰蛋白酶、75%消毒酒精。實(shí)驗(yàn)步驟實(shí)驗(yàn)前將無血清培養(yǎng)基和含血清培養(yǎng)基分裝并進(jìn)行溫育（37℃）。以溫度計(jì)實(shí)際顯示溫度為準(zhǔn)！實(shí)驗(yàn)步驟將長滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。實(shí)驗(yàn)步驟用不含血清1640培養(yǎng)基沖洗細(xì)胞。大家應(yīng)該也有點(diǎn)累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流8實(shí)驗(yàn)步驟將無血清培養(yǎng)基吸出，加入0.25％胰蛋白酶溶液1ml，使細(xì)胞都浸入溶液中。實(shí)驗(yàn)步驟消化30-40s后，棄去胰酶，加入含血清1640培養(yǎng)基2ml，終止消化，并充分吹打。吹打后將懸浮起來的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到15ml離心管中，1000rpm離心5min。實(shí)驗(yàn)步驟離心后，棄上清，加含血清1640重懸，混勻，取50ul用于細(xì)胞計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)步驟血球計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)原理實(shí)驗(yàn)步驟根據(jù)細(xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果，用含血清的培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度到1X105個/ml。分至兩個培養(yǎng)皿中，做好標(biāo)記，繼續(xù)培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)完畢，將培養(yǎng)基瓶口迅速過酒精燈火焰消毒，擰緊后，封口膜密封。拿出超凈臺，放入冰箱。實(shí)驗(yàn)后，請將超凈工作臺內(nèi)擦拭干凈，酒精噴灑消毒，并將酒精擦干凈，打開紫外燈滅菌。用過的離心管和血球計(jì)數(shù)板須清洗干凈。各個實(shí)驗(yàn)