生物實驗報告生物實驗報告「篇一」一、實驗目的1.初步學會探索酶催化特定化學反應的方法。2.探索淀粉酶是否只能催化特定的化學反應。二、實驗原理淀粉和蔗糖都是非還原糖，它們在酶的催化作用下都能水解成還原糖，還原糖能夠與斐林試劑發生氧化還原反應，生成磚紅色的氧化亞銅沉淀。用淀粉酶分別催化淀粉溶液和蔗糖溶液，再用斐林試劑鑒定溶液中有無還原糖，就可以看出淀粉酶是否能催化這兩種化學反應。三、材料用具滴管、試管、火柴、試管架、溫度計、三腳架、石棉網、酒精燈、燒杯、質量分數為2%的新鮮淀粉酶溶液、質量分數為3%的可溶性淀粉溶液、質量分數為3%的蔗糖溶液、斐林試劑四、實驗過程（見書Ｐ47）五、討論1．制備的可溶性淀粉溶液,必須完全冷卻后才能使用。為什么？２．兩支試管保溫時,為什么要控制在60℃左右(低于50℃或高于75℃)?3．如果2號試管也產生了磚紅色沉淀,可能是由哪些原因造成的？生物實驗報告「篇二」初一生物實驗報告范文五篇篇一探索淀粉酶對淀粉和蔗糖的水解作用一、實驗目的1.初步學會探索酶催化特定化學反應的方法。2.探索淀粉酶是否只能催化特定的化學反應。二、實驗原理淀粉和蔗糖都是非還原糖，它們在酶的催化作用下都能水解成還原糖，還原糖能夠與斐林試劑發生氧化還原反應，生成磚紅色的氧化亞銅沉淀。用淀粉酶分別催化淀粉溶液和蔗糖溶液，再用斐林試劑鑒定溶液中有無還原糖，就可以看出淀粉酶是否能催化這兩種化學反應。三、材料用具滴管、試管、火柴、試管架、溫度計、三腳架、石棉網、酒精燈、燒杯、質量分數為2%的新鮮淀粉酶溶液、質量分數為3%的可溶性淀粉溶液、質量分數為3%的蔗糖溶液、斐林試劑四、實驗過程（見書Ｐ47）物理實驗報告?化學實驗報告?生物實驗報告?實驗報告格式?實驗報告模板五、討論1．制備的可溶性淀粉溶液,必須完全冷卻后才能使用。為什么？２．兩支試管保溫時,為什么要控制在60℃左右(低于50℃或高于75℃)?3．如果2號試管也產生了磚紅色沉淀,可能是由哪些原因造成的？篇二：練習使用顯微鏡目的要求1、練習使用顯微鏡，學會規范的操作方法。2、能夠獨立操作顯微鏡。3、能夠將標本移動到視野中央，并看到清晰的圖象。材料用具：顯微鏡、e字玻片（寫有上字的玻片）、動植物永久玻片、擦鏡紙、紗布方法和步驟一、取鏡和安放1．右手握住鏡臂，左手托住鏡座。2．把顯微鏡放在實驗臺上，略偏左（顯微鏡放在距實驗臺邊緣7厘米左右

處）。安裝好目鏡和物鏡。二、對光3．轉動轉換器，使低倍物鏡對準通光孔(物鏡的前端與載物臺要保持2厘

米的距離)。4．把一個較大的光圈對準通光孔。左眼注視目鏡內(右眼睜開，便于以后

同時畫圖)。轉動反光鏡，使光線通過通光孔反射到鏡筒內。通過目鏡，可以

看到白亮的視野。三、觀察5．把所要觀察的玻片標本（也可以用印有“e”字的薄紙片制成）放在

載物臺上，用壓片夾壓住，標本要正對通光孔的中心。6．轉動粗準焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標本為止（眼

睛看著物鏡，以免物鏡碰到玻片標本）。7．左眼向目鏡內看，同時反方向轉動粗準焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直

到看清物像為止。再略微轉動細準焦螺旋，使看到的物像更加清晰。注意事項1、注意安全，不要損傷顯微鏡、目鏡和物鏡。2、材料對準通光孔，用壓片夾將玻片壓好。3、下降鏡筒時，不要注視目鏡，一定要注視物鏡，以免損壞玻片標本和物鏡鏡。頭。4、取下玻片標本時要小心;5、實驗完畢，把顯微鏡的外表擦拭干凈。轉動轉換器，把兩個物鏡偏到兩旁，并將鏡筒緩緩下降到最低處。最后把顯微鏡放進鏡箱里，送回原處。篇三觀察人體的基本組織目的要求：1．觀察人體基本組織的永久切片，認識人體的四種基本組織；2．描述同一種組織中細胞的共同特點；3．描述不同組織中細胞形態上的不同之處；4．根據觀察，概述組織的共同特點，形成組織的概念。材料器具：顯微鏡；扁平上皮、立方上皮、柱狀上皮等上皮組織玻片；橫紋肌、骨骼肌、心肌等肌肉組織玻片；骨、軟骨、血液、韌帶、肌腱、脂肪等結締組織玻片；神經組織的玻片。方法步驟：1．根據教師提供的玻片，逐個在顯微鏡低倍鏡下認真觀察，注意細胞的形態特征和細胞間的聯系特點。【思考】1．上皮組織一般都分布在人體的什么位置?想一想，上皮組織有什么主要的功能?2．神經組織的主要功能是“接受刺激，產生和傳導興奮”，構成神經組織的細胞結構上有什么特點與這種功能相適應?

3．請試著用自己的語言，給組織下定義。篇四用顯微鏡觀察人血的永久涂片實驗方案一、取鏡和安放一手握鏡臂，一手托鏡座,將顯微鏡從鏡箱中取出并放在實驗臺上，略偏左。二、對光1、轉動轉換器，使低倍物鏡正對通光孔。2、轉動遮光器，選擇較大的光圈對準通光孔。3、一眼注視目鏡內，一眼睜開，同時把反光鏡轉向光源，通過目鏡看到白亮視野后并報告教師。三、觀察1、把涂片放在載物臺上，用壓片夾壓住，標本要正對通光孔的中心。2、從側面注視物鏡，轉動粗準焦螺旋，使鏡筒緩慢下降接近涂片。3、一眼注視目鏡內，同時反方向轉動粗準焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直至看到物像，再略微轉動細準焦螺旋，直至物像清晰，報告老師。4、正確填寫實驗報告。四、整理1、取下涂片并復位。2、用紗布擦拭顯微鏡外表。3、轉動轉換器，讓兩物鏡偏到兩旁，并將鏡筒降至最低位置。4、將顯微鏡放回鏡箱。篇五觀察小魚尾鰭內血液的流動一、目的要求：1.觀察血液在血管內的流動。2.嘗試分辨血管的種類以及血液在不同血管內的流動情況。二、材料用具：尾鰭色素少的小魚、顯微鏡、培養皿、滴管、棉絮。三、實驗步驟：1、檢查實驗材料用具2仔細檢查實驗材料用具是否齊全3、取放、組裝、調試顯微鏡4、取放顯微鏡的步驟、方式是否正確；組裝、調試顯微鏡的方法是否科學。四、實驗操作與觀察1、用浸濕的棉絮將小魚頭部的鰓蓋和軀干部包裹起來，露出口和尾部。2、將小魚平放在培養皿中，使尾鰭平貼在培養皿上，并在尾鰭上放載玻片。3、將培養皿放在載物臺上，用低倍顯微鏡觀察尾鰭血管內血液的流動情況。4、找到管徑最小的血管，注意觀察血液在這種血管中的流動情況。5、注意觀察管徑最小的血管是由什么血管分支而來的，它最終又匯入什么血管中。五、清潔、整理實驗用具1將顯微鏡復原，放回顯微鏡箱。2將培養皿、滴管等沖洗干凈并清潔實驗桌面。六、注意事項1、是否用浸濕的棉絮將小魚頭部的鰓蓋和軀干部包裹起來。2、是否露出小魚的口和尾部。3、小魚的尾鰭是否平貼在培養皿上。4、是否在小魚的尾鰭上放載玻片。5、是否用低倍顯微鏡觀察尾鰭血管內血液的流動情況。6、是否找到管徑最小的血管。7、實驗后是否將小魚放回魚缸生物實驗報告「篇三」實驗一練習使用顯微鏡目的要求1、練習使用顯微鏡，學會規范的操作方法。2、能夠獨立操作顯微鏡。3、能夠將標本移動到視野中央，并看到清晰的圖象。材料用具：顯微鏡、e字玻片（寫有上字的玻片）、動植物永久玻片、擦鏡紙、紗布方法和步驟一、取鏡和安放1．右手握住鏡臂，左手托住鏡座。2．把顯微鏡放在實驗臺上，略偏左（顯微鏡放在距實驗臺邊緣7厘米左右處）。安裝好目鏡和物鏡。二、對光3．轉動轉換器，使低倍物鏡對準通光孔(物鏡的前端與載物臺要保持2厘米的距離)。4．把一個較大的光圈對準通光孔。左眼注視目鏡內(右眼睜開，便于以后同時畫圖)。轉動反光鏡，使光線通過通光孔反射到鏡筒內。通過目鏡，可以看到白亮的視野。三、觀察5．把所要觀察的玻片標本（也可以用印有“e”字的薄紙片制成）放在載物臺上，用壓片夾壓住，標本要正對通光孔的中心。6．轉動粗準焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標本為止（眼睛看著物鏡，以免物鏡碰到玻片標本）。7．左眼向目鏡內看，同時反方向轉動粗準焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直到看清物像為止。再略微轉動細準焦螺旋，使看到的物像更加清晰。注意事項1、注意安全，不要損傷顯微鏡、目鏡和物鏡。2、材料對準通光孔，用壓片夾將玻片壓好。3、下降鏡筒時，不要注視目鏡，一定要注視物鏡，以免損壞玻片標本和物鏡鏡頭。4、取下玻片標本時要小心;5、實驗完畢，把顯微鏡的外表擦拭干凈。轉動轉換器，把兩個物鏡偏到兩旁，并將鏡筒緩緩下降到最低處。最后把顯微鏡放進鏡箱里，送回原處。實驗二觀察人體的基本組織目的要求：1．觀察人體基本組織的永久切片，認識人體的四種基本組織；2．描述同一種組織中細胞的共同特點；3．描述不同組織中細胞形態上的不同之處；4．根據觀察，概述組織的共同特點，形成組織的概念。材料器具：顯微鏡；扁平上皮、立方上皮、柱狀上皮等上皮組織玻片；橫紋肌、骨骼肌、心肌等肌肉組織玻片；骨、軟骨、血液、韌帶、肌腱、脂肪等結締組織玻片；神經組織的玻片。方法步驟：1．根據教師提供的玻片，逐個在顯微鏡低倍鏡下認真觀察，注意細胞的形態特征和細胞間的聯系特點。【思考】1．上皮組織一般都分布在人體的什么位置?想一想，上皮組織有什么主要的功能?2．神經組織的主要功能是“接受刺激，產生和傳導興奮”，構成神經組織的細胞結構上有什么特點與這種功能相適應?3．請試著用自己的語言，給組織下定義。實驗三用顯微鏡觀察人血的永久涂片實驗方案一、取鏡和安放一手握鏡臂，一手托鏡座,將顯微鏡從鏡箱中取出并放在實驗臺上，略偏左。二、對光1、轉動轉換器，使低倍物鏡正對通光孔。2、轉動遮光器，選擇較大的光圈對準通光孔。3、一眼注視目鏡內，一眼睜開，同時把反光鏡轉向光源，通過目鏡看到白亮視野后并報告教師。三、觀察1、把涂片放在載物臺上，用壓片夾壓住，標本要正對通光孔的中心。2、從側面注視物鏡，轉動粗準焦螺旋，使鏡筒緩慢下降接近涂片。3、一眼注視目鏡內，同時反方向轉動粗準焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直至看到物像，再略微轉動細準焦螺旋，直至物像清晰，報告老師。4、正確填寫實驗報告。四、整理1、取下涂片并復位。2、用紗布擦拭顯微鏡外表。3、轉動轉換器，讓兩物鏡偏到兩旁，并將鏡筒降至最低位置。4、將顯微鏡放回鏡箱。實驗四觀察小魚尾鰭內血液的流動一、目的要求：1.觀察血液在血管內的流動。2.嘗試分辨血管的種類以及血液在不同血管內的流動情況。二、材料用具：尾鰭色素少的小魚、顯微鏡、培養皿、滴管、棉絮。三、實驗步驟：1、檢查實驗材料用具2、仔細檢查實驗材料用具是否齊全3、取放、組裝、調試顯微鏡4、取放顯微鏡的步驟、方式是否正確；組裝、調試顯微鏡的方法是否科學。四、實驗操作與觀察1、用浸濕的棉絮將小魚頭部的鰓蓋和軀干部包裹起來，露出口和尾部。2、將小魚平放在培養皿中，使尾鰭平貼在培養皿上，并在尾鰭上放載玻片。3、將培養皿放在載物臺上，用低倍顯微鏡觀察尾鰭血管內血液的流動情況。4、找到管徑最小的血管，注意觀察血液在這種血管中的流動情況。5、注意觀察管徑最小的血管是由什么血管分支而來的，它最終又匯入什么血管中。五、清潔、整理實驗用具1將顯微鏡復原，放回顯微鏡箱。2將培養皿、滴管等沖洗干凈并清潔實驗桌面。六、注意事項1、是否用浸濕的棉絮將小魚頭部的鰓蓋和軀干部包裹起來。2、是否露出小魚的口和尾部。3、小魚的尾鰭是否平貼在培養皿上。4、是否在小魚的尾鰭上放載玻片。5、是否用低倍顯微鏡觀察尾鰭血管內血液的流動情況。6、是否找到管徑最小的血管。7、實驗后是否將小魚放回魚缸實驗五魚鰭在游泳中的作用引課：提起魚，大家都不陌生，魚在水中能自由自在的游動，既能向前游動，又能上浮，下潛，還能轉彎以及停留在一定的水層。那么，魚在游泳中各種鰭起什么作用呢？今天，我們就來探究一下魚鰭在游泳中的作用。方法一：模型模擬法（當不能用直接實驗法做實驗時，可以用模擬實驗代替實驗法，即用模型代替實驗對象進行實驗，模擬實驗的缺點是：其研究結果易受模型的局限，得出的結論不一定完全可靠。一般來說模型與實驗對象的相似程度越高，實驗的效果越好。）方法二：剪除魚鰭法（太殘忍）方法三：捆扎魚鰭法注意事項：（對實驗材料用具的選擇是實驗成敗的關鍵，如對魚體大小的選擇，捆綁魚體的夾板和線繩的選擇等。經實踐證明魚體大小以6～10cm長為宜，捆綁魚鰭用紗布較佳，捆綁鰭用輕且不易滑脫的材質為宜，如用輕的木片、塑料片等。要鼓勵學生自行完成探究實驗，培養學生動手能力。在實驗探究鰭對魚運動的作用時，應引導學生想辦法只對單一因素進行觀察，而限制其他因素的干擾，即分別探討某一種鰭對魚的作用，并作好實驗記錄。）下面我們就來開始我們的探究過程：一、提出問題：魚在游泳時，胸鰭、背鰭、尾鰭分別起什么作用二、作出假設：魚在游泳時，胸鰭、背鰭起平衡魚體的作用，其中胸鰭有轉換方向的作用，背鰭能防止魚體側翻；尾鰭產生前進的動力，決定運動的方向。三、制定計劃：實驗材料及用具：四個玻璃缸、四條大小相同的鯽魚、輕的木片或塑料片、細繩子、紗布。實驗步驟：1、在四只大玻璃缸上分別標上A、B、C、D，然后注水，水的高度為缸高的三分之二左右。2、對三條鯽魚做如下處理：用木片和繩子縛住第一條鯽魚的胸鰭后放入A缸用木片和繩子縛住第二條鯽魚的背鰭后放入B缸用木片和繩子縛住第三條鯽魚的尾鰭后放入C缸第四條鯽魚做對照，不做任何處理直接放入D缸3、觀察四條鯽魚的運動情況四、實施計劃現象：A缸中的鯽魚能夠向前運動，但左右搖擺不定，不能轉向，不能掌握平衡。B缸中的鯽魚能夠向前運動，但魚體側翻，不能維持魚體的直立狀態。C缸中的鯽魚能保持魚體平衡，但基本上沒有前進。D缸中的鯽魚既能平衡身體，又能自由自在向前游動。五、分析結果，得出結論魚游泳時，主要靠身體軀干部和尾鰭的左右擺動擊動水流產生前進的動力，其他魚鰭起輔助作用。魚在運動時，胸鰭、腹鰭和背鰭都有維持魚體的平衡的作用，尾鰭可以產生前進的動力，同時還有決定魚運動方向的作用。六、表達與交流臀鰭：協調其它各鰭，起平衡作用，若失去，身體輕微搖晃。腹鰭起到穩定流經身體的水流的作用，也有平衡和穩定的作用。生物實驗報告「篇四」關于生物技術綜合實驗報告篇一：四川大學-生物技術-綜合實驗報告-學生版生物技術綜合實驗甘薯γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的克隆和原核表達學生：學號：同實驗者：<研究背景>谷胱甘肽(glutathione,GSH)GSH具有多種重要生理功能,抗自由基和抗氧化應激作用,保護細胞膜的完整性等。γ-GCS是植物細胞中GSH生物合成的限速酶,可以調控GSH的生物合成量。GSH在生物體抵御冷害、干旱、重金屬、真菌等脅迫過程中起著重要作用,說明γ-GCS也與植物抗逆過程密切相關。實驗一甘薯葉片RNA提取一、實驗目的1.了解真核生物RNA提取的原理；2.掌握Trizol提取的方法和步驟。二、實驗原理Trizol試劑是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的單相的快速抽提總RNA的試劑，在勻漿和裂解過程中，能在破碎細胞、降解細胞其它成分的同時保持RNA的完整性。TRIzol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解細胞，使細胞中的蛋白，核酸物質解聚得到釋放。苯酚雖可有效地變性蛋白質，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中還加入了8－羥基喹啉、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇等來抑制內源和外源RNase（RNA酶）。0.1%的8－羥基喹啉可以抑制RNase，與氯仿聯合使用可增強抑制作用。異硫氰酸胍屬于解偶劑，是一類強力的蛋白質變性劑，可溶解蛋白質并使蛋白質二級結構消失，導致細胞結構降解，核蛋白迅速與核酸分離。β-巰基乙醇的主要作用是破壞RNase蛋白質中的二硫鍵。在氯仿抽提、離心分離后，RNA處于水相中，將水相轉管后用異丙醇沉淀RNA。用這種方法得到的總RNA中蛋白質和DNA污染很少。三、實驗材料1.材料甘薯（IpomoeabatatasLam）葉片，品種為徐薯182.試劑①無RNA酶滅菌水：加入0.01%的DEPC，處理過夜后高壓滅菌；②Trizol試劑；③氯仿；④異丙醇、75％乙醇；⑤TBE緩沖液；⑥上樣緩沖液（6×）3.儀器高壓滅菌鍋、微量移液器、臺式離心機、超凈工作臺、電泳儀、電泳槽、凝膠成像系統、1.5mL塑料離心管、槍頭和EP管架四、實驗方法1.將葉片取出放入研缽中，加入適量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100mg植物葉片加入1mLTrizol試劑，室溫放置5min，使樣品充分裂解；2.每1mLTrizol試劑加入200μL氯仿，用手劇烈振蕩混勻后室溫放置3-5min使其自然分相；3.4℃12,000rpm離心15min，吸取上層水相轉移到新管中；在上清中加入等體積冰冷的異丙醇，室溫放置15min；4.4℃12,000rpm離心10min，棄上清，RNA沉淀于管底；5.RNA沉淀中加入1mL75%的乙醇（用RNase-free水配制），溫和震蕩離心管，懸浮沉淀；4℃8,000rpm離心2min，棄上清；6.室溫放置10min晾干沉淀；7.沉淀中加入20μLRNase-freeddH2O，輕彈管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存；8.用1%的瓊脂糖凝膠電泳進行檢測，用EB染色并照相。五、實驗結果1.RNA提取結果依照Trizol試劑盒方法，提出的RNA較少，此部分未以圖或數據顯示。2.RNA后電泳結果如圖1.其中9a為本組實驗結果。由圖可知RNA條帶非常模糊，拖尾現象嚴重，幾乎無法分清具體條帶，亮度較大。點樣孔附近的紅色部分為雜質，在提取過程中并未很好除去。圖1.RNA提取跑膠結果。其中1泳道為樣品Marker，9a泳道為本小組RNA樣品。與標準對照可見條帶模糊，拖尾現象嚴重。六、分析與討論1.RNA的提取產量并不多，可能是因裂解樣品不充分或RNA沉淀未完全溶解所致。在實驗過程中，由于對操作時間的掌握不熟練、操作技巧不完善，留上清與棄上清時令RNA損失了部分，使最終RNA產量不理想。2.RNA電泳結果有EB存在時，電泳后28SrRNA和18SrRNA在紫外燈下應看得很清楚，另出現條由tRNA，5.8SrRNA和5SrRNA組成的較模糊、遷移較快的帶。如果RNA沒有降解，則28SrRNA的亮度應為18SrRNA的2倍，且這兩條帶都無彌散現象發生。由圖1.9a可知，RNA拖尾現象嚴重，說明RNA已大部分被降解；此外點樣孔附近出現紅色部分雜質，分析可能有并未除盡的蛋白質，同樣影響RNA電泳結果。在進行實驗時，本小組成員未嚴格戴上口罩并勤換手套，這可能使外源RNAase進入樣品，導致其降解嚴重。另外，提取出RNA后本小組未立即將樣品放入-70℃保存，也為導致結果不理想的重要原因之一。在最初用氯仿萃取分層的過程中，由于水相吸取過多，摻雜入部分蛋白質雜質而未于后續純化步驟除盡，RNA條帶拖尾嚴重可能還受該蛋白質影響。七、總結：本次試驗RNA提取非常失敗，從跑膠結果可見其降解嚴重。雖然大實驗無法避免試劑交叉污染的可能性，且電泳用膠的質量也會影響實驗結果，但從圖1.2a，3a，2b等條帶較為清晰的小組實驗結果可知，瓊脂糖凝膠質量以及試劑對結果干擾不大。那么本小組成員在提取過程中的操作一定出現了很大失誤。首先口罩、手套應該嚴格按規定佩戴，提取過程對移液槍等儀器使用需謹慎仔細，盡量避免混入雜質。其次為排除部分雜質影響可對RNA樣品用紫外線分光光度計測定吸光值檢驗，將有助于結果分析。最后，細節決定成敗，我們應汲取教訓避免接下來的實驗出現類似問題。實驗二第1鏈cDNA的合成和模板的驗證一、實驗目的1.掌握第1鏈cDNA的合成方法和步驟二、實驗原理真核生物基因多為斷裂基因，編碼區不連續，需經轉錄后加工才能成為成熟mRNA。以真核成熟mRNA為模板合成cDNA，進而獲得有連續氨基酸編碼的DNA序列，無需轉錄后加工，即可在原核細胞中表達。真核生物的mRNA都有PolyA尾巴。引物：OligodT（12-18個T）。莫洛尼氏鼠白血病毒逆轉錄酶（M-MLV）以單鏈RNA為模板，在引物的引發下合成與模板互補的DNA鏈（cDNA）。mRNA反轉錄生成的cDNA可作為PCR的模板進行擴增稱為RT-PCR，RT-PCR比Northern雜交更靈敏，對RNA的質量要求較低，操作簡便，它是在轉錄水平上檢測基因時空表達的常用方法。三、實驗材料1.材料徐薯18葉片RNA樣品2.試劑①dNTPmixture（10mMeach）；②Oligo(dT)Primer(10μM)；③TotalRNA；④RNasefreeddH2O；⑤M-MLV反轉錄酶；⑥5×First-strandBuffer；⑦0.1MDTT；⑧RibonucleaseInhibitor(40U/μL)3.儀器10μL和100μL的移液槍、0.5mL的EP管、PCR儀等四、實驗方法1.在RNasefreeMicrotube管中配制下列混合液：dNTPmixture（10mMeach）1μL*Oligo(dT)Primer(10μM)4μLTotalRNA2μL篇二：生物技術綜合實驗報告(原生質體相關)生物技術綜合實驗報告（第一部分）實驗一工作液的配制、培養基配制、器皿洗滌及滅菌一、實驗目的掌握各種工作液配制方法；了解植物培養基的構成及配制方法；掌握高溫高壓滅菌的方法。二、原理培養基是植物組織培養的基本條件，同時也是關鍵因素。濕熱條件(121℃的蒸汽，10分鐘)能夠有效地殺滅附著在玻璃器皿、器具以及溶液和培養基中的微生物達到滅菌的目的。三、器具和試劑滅菌鍋，天平，電爐，微波爐，三角瓶，封口膜，移液管，移液器，量筒，燒杯，pH試紙，培養皿，濾紙，Parafilm封口膜。瓊脂，MS培養基大量元素，無菌水，葡萄糖，2,4-D，IBA，KT（激動素），1MNaOH及HCl，卡那霉素，頭孢霉素，乙酰丁香酮。四、實驗內容PH調節劑的配制、培養基母液的配制、培養基的配制、各種相關物品的準備（一）培養基的配制步驟1、取個干凈燒杯，加入1/3-2/3左右的蒸餾水，用移液管取所需的母液加入燒杯。2、稱取定量的蔗糖加入燒杯中并不斷攪拌，直到完全溶解，定容。3、用NaOH或者稀HCL調劑酸堿值。4、稱取定量瓊脂糖加入燒杯中，加熱煮沸攪拌，待瓊脂完全溶解，分裝。5、高壓滅菌（121℃,15min-20min)。6、冷卻，取出，備用。（二）棉花無菌苗培養基的制備1、取25mlMS大量元素母液，稱取葡萄糖15g、于1升的燒杯中，定容后調pH值為6.0，加入7.5g/l瓊脂煮沸。2、然后將其分裝到100毫升的三角瓶中，每瓶40毫升。3、用封口膜封口后在滅菌鍋中滅菌15分鐘。4、滅菌后Z于水平的工作臺上冷卻即可。要求：配制1L（三）擬南芥無菌苗培養基的制備1、擬南芥無菌苗培養基：1/2MS大量元素+蔗糖10g/L，PH值6.0；加入7.5g瓊脂高溫高壓滅菌。2、0.1%瓊脂糖：0.1g瓊脂糖/100ml蒸餾水；無菌苗培養基和0.1%瓊脂糖均121°高壓滅菌15分鐘。3、另準備20套9cm培養皿，滅菌。要求：配制0.5L，裝1瓶滅菌，滅菌后培養基倒皿。五、注意事項1、為了盡量減少人為的誤差，必須嚴格按實驗步驟進行操作，嚴格按照要求的量來配制工作液、母液及培養基。2、應當把培養基中的各種成分都寫在紙上，加進去一個以后即劃掉一個。3、所有裝著培養基的試管、玻璃罐、玻璃瓶和培養皿等都應當清楚地做上標記。4、每小組的操作的具體事項請參照黑板上貼的任務分組。5、愛護實驗儀器及耗材，小心使用玻璃器皿，合理滅菌，因為滅菌耗時較長。實驗二無菌苗的制備一、原理化學滅菌：0.1%升汞(Hgcl2)溶液浸泡10分鐘可以對棉花種子等外植體進行滅菌，84消毒液（2%的次氯酸鈉）浸泡3分鐘可以對擬南芥等小種子外植體進行消毒。物理消毒：紫外燈消毒、酒精燈火焰或高溫燒灼5min左右可有效殺死鑷子、剪刀等不銹鋼操作器具的菌類達到消毒的目的。二、實驗材料、器具和試劑棉花品種YZ1;擬南芥col-0野生型滅菌鍋，天平，電爐，三角瓶，封口膜，鑷子，酒精燈，剪刀，移液管，超凈工作臺。0.1%升汞溶液，84消毒液，75%酒精三、實驗內容（一）擬南芥無菌苗培養基倒皿1.取上次滅菌好的擬南芥培養基（500ml裝），稍微擰松瓶蓋，微波爐煮沸，邊煮邊搖動，至全部融化。2.將上次滅菌好的9cm培養皿分開放Z超凈工作臺（超凈工作臺需先打開）上。3.將融化好的培養基分裝于培養皿中（500ml/18-20皿），將皿至于超凈臺上吹干。（二）共培養培養基的配制成分數量成分數量MS大量元素(20倍）50ml2,4-D(0.1mg/ml)1mlNH4NO3(20倍)50ml甘氨酸(1000倍)1ml微量元素(100倍)10mlKT(0.1mg/ml)1ml鐵鹽(100倍)10ml葡萄糖30g/L微生素(1000倍)1mlPH值5.85-5.90肌醇(100倍)1ml依次加入上述物質，調PH值5.85-5.90，然后分裝至2個500ml藍蓋瓶，每瓶加入4g瓊脂，滅菌，滅菌后倒皿。（三）選擇培養基的配制共培養培養基+卡那霉素50mg/L+頭孢霉素400mg/L滅菌后，待培養基涼至60度左右加入，混勻，倒皿。（四）棉花無菌苗的制備1、將棉籽用手術剪刀去殼（每人3顆，飽滿無病蟲害種子）。2、用0.1%的升汞滅菌13分鐘。3、無菌水沖洗三遍，接種于無菌苗培養基中。4、28℃條件下暗培養7天（304培養箱）。（五）擬南芥無菌苗的制備大量法滅菌：將擬南芥種子放入1.5ml離心管中，加入84消毒液：無菌水=1:1的混合液1ml，上下搖晃滅菌2min，棄消毒液；加入1ml75%的酒精混勻1min，然后無菌水清洗4次；加入0.1%瓊脂糖溶液懸浮種子，用移液槍涂布于擬南芥無菌苗培養基。吹干，封口。弱光培養兩天至種子萌發，轉至光照培養室培養兩周（304培養箱）。五、注意事項所有操作（除數種子）均在超凈工作臺上進行。六、實驗結果一周后觀察無菌苗的生長狀況1、六瓶接種的棉花無菌苗中有一瓶被輕度污染，其余五瓶生長狀況良好。2、擬南芥的無菌苗因涂布不均勻長勢一般，幼苗較其他小組要弱小，葉片顏色較深。實驗三愈傷組織的誘導及農桿菌介導的棉花遺傳轉化一、實驗目的掌握植物體細胞胚胎發生的基本理論；了解植物愈傷組織在誘導和分化過程中的形態學、細胞學特征；進一步鞏固植物離體培養和無菌操作的步驟；掌握植物遺傳轉化的方法、理論；掌握根癌農桿菌介導的植物遺傳轉化技術。二、實驗原理植物細胞全能性：植物的每個細胞都包含著該物種的全部遺傳信息，從而具備發育成完整植株的遺傳能力。愈傷組織：胚性愈傷：呈淡黃色或者黃綠色，質地較均勻；細胞球狀或近球狀，細胞核大，細胞質濃非胚性愈傷：呈褐色、白色粉末狀或白色、綠色堅硬塊狀；細胞一般為長柱狀等非規則形狀，細胞核小，細胞質較稀。農桿菌介導轉基因的原理：植物細胞在受傷后，創傷分子誘導農桿菌Vir區各種基因的激活和表達，導致T-DNA被剪切，加工，形成T-鏈蛋白復合體（T-復合體），通過農桿菌和植物細胞的細胞膜，細胞壁進入植胞內，T-復合體上的核靶向序列可引導T-DNA整合到植物基因組。三、材料與用品1、實驗材料：棉花材料YZ1（上周做的無菌苗）、農桿菌菌株LBA4404。2、用具：超凈工作臺，顯微鏡，載玻片，天平，三角瓶，封口膜，橡皮筋，鑷子，酒精燈，培養皿，濾紙，剪刀，醫用手術刀，搖床。3、藥品：誘導、共培養培養基，卡寶品紅染色液，MGL活化培養基，LB培養基，乙酰丁香酮（AS）。四、實驗步驟（一）棉花愈傷組織的誘導及觀察1、愈傷誘導培養基的配制（第1周已做）2、無菌苗的制備3、無菌苗的切取：選取培養7天左右健壯的無菌苗Z于墊有濾紙的培養皿上，用解剖刀切掉子葉及生長點，切掉胚根及相連的約1/4的下胚軸，余下的下胚軸用作愈傷組織誘導的外植體，用解剖刀將下胚軸切成～0.7cm小段。4、外植體接種及離體培養：將切離好的外植體接種于愈傷誘導培養基上（每瓶約7段），平行放Z，28℃光照培養，每天14小時光照，進行愈傷組織誘導及增殖培養。5、愈傷組織繼代（一個月后）：待培養一個月左右，將增殖后的愈傷組織連同下胚軸切斷繼代到分化培養基上，進行胚性愈傷組織的分化。6、愈傷組織形態觀察：分別挑取少量非胚性愈傷和胚性愈傷組織，Z于載玻片上，滴幾滴清水用鑷子搗碎愈傷組織，然后滴加一滴卡寶品紅染色數秒鐘后，在顯微鏡下觀察比較兩者細胞學特征。（二）農桿菌介導的棉花下胚軸的遺傳轉化1、共培養及選擇培培養基的配制（第2周已做，沒倒皿的組倒皿）2、無菌苗的制備（第2周已做）3、農桿菌的活化（研究生幫忙做）：從超低溫冰箱內取出保存菌株的甘油管在冰上融化；按1:100的體積加入20mlLB液體培養基里搖菌，28℃暗培養36-48hr；將渾濁的農桿菌液涂布于LB平皿上，28℃暗培養36-48hr；把培養基表面菌落刮入裝有20mlMGL培養基的三角瓶中（按1/1000比例加入AS），28℃、200rpm搖30min；OD值在0.5-1.5之間（估計）即可用于侵染。4、下胚軸與農桿菌共培養：把無菌苗切成~7mm莖段（同誘導程序），用鑷子夾到經活化的菌液中進行侵染，搖勻，侵染10分鐘；倒掉菌液，將下胚軸轉入裝有濾紙的滅菌培養皿中，吹5分鐘使表面稍為干燥；再將下胚軸分散布于墊有濾紙的共培養培養基中，19-21℃,暗培養48-60小時結束共培養。5、選擇培養（48-60小時后）：把經過共培養的下胚軸用鑷子轉入選擇培養基中，培養30天左右繼代一次轉入相同的選擇培養基中。五、注意事項1、在切無菌苗時，一定要使用鋒利的刀片,盡量做到一刀能切斷，避免擠壓莖段。2、無菌苗培養時間不宜過長（培養七天最好）。3、從超低溫冰箱內取出的甘油管，應盡量減少其在冰箱外的時間，用完后盡快放回冰箱。4、侵染時下胚軸稍為干燥可以增加農桿菌的吸附。5、共培養后第一次進行選擇培養時應盡量使培養的環境保持干燥，可以減少農桿菌的污染。6、整個過程均為無菌操作環境。六、實驗結果：1．錐形瓶與平皿中的下胚軸生長狀況均良好，觀察到平皿中農桿菌介導轉化的下胚軸有發黑的現象，而錐形瓶中誘導的愈傷組織則無發黑現象。2．兩個平皿中的擬南芥均生長緩慢且幼葉發黃，推測原因可能與雜菌感染有關。篇三：生物技術制藥綜合實驗報告生物技術制藥實驗報告人表皮生長因子（hEGF）在大腸桿菌中的表達與純第一節引言1.1表皮生長因子(EGF)概述生長因子在人體中的信號傳導部分起著關鍵的作用，它可通過與細胞表面的蛋白質受體結合，參與細胞的各種生命活動。生長因子可以是維生素，堿基，多肽等。所研究的表皮生長因子，就是一種人機體細胞合成的一種多肽。在生物體內，每個細胞的生長狀態不同，在不同組織中的細胞的表皮生長因子參與生長、增值、死亡等過程。目前，表皮生長因子已得到廣泛應用。在許多公司已經開始研發甚至是生產出EGF，多種疾病的誘發原因很多