2.2.2動物細胞融合技術與單克隆抗體第二章第1節動物細胞培養思考?討論動物細胞融合雜交瘤細胞擴大培養單克隆抗體既能迅速大量增殖，又能產生專一抗體骨髓瘤細胞（癌細胞）能無限增殖一個B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體，不能無限增殖123正常細胞124癌細胞1.若要生產一種只對癌細胞起作用的抗體，應該選哪種抗原蛋白分子？2.什么細胞能產生抗蛋白4的抗體？它能大量增殖嗎？怎樣才能獲得這樣的細胞？3.什么細胞能無限增殖？怎樣才能獲得一種既能分泌特定抗體且無限增殖的細胞？細胞融合37℃40min1、概念：2、原理：3、方法：使兩個或多個動物細胞結合形成一個細胞的技術細胞膜具有一定的流動性物理法：電融合法化學法：聚乙二醇（PEG)生物法：滅活病毒誘導法形成的雜交細胞具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息。4、結果：5、優點：突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能動物細胞融合項目植物體細胞雜交動物細胞融合原理細胞融合前的處理方法誘導細胞融合的方法細胞融合成功的標志主要用途意義細胞膜具有一定的流動性、植物細胞的全能性細胞膜具有一定的流動性用果膠酶和纖維素酶去除細胞壁剪碎+胰蛋白酶或膠原蛋白酶使細胞分散成單個細胞電融合法、離心法；PEG、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法、電融合法滅活病毒誘導法再生出細胞壁細胞核的融合獲得完整的雜種植株主要用于制造單克隆抗體打破生殖隔離，實現遠緣雜交育種突破了有性雜交的局限，使遠緣雜交成為可能動物細胞融合技術與植物體細胞雜交的比較融合的具有同種核的細胞、單克隆抗體給小鼠注射特定抗原脾中提取多種B淋巴細胞骨髓瘤細胞未融合親本細胞、雜交瘤細胞多種雜交瘤細胞產生所需抗體的雜交瘤細胞融合篩選1篩選2體外培養注射到小鼠腹腔內方法：方法：PEG、電融合、滅活病毒應用到的技術：原理：細胞膜的流動性、細胞增殖動物細胞融合技術動物細胞培養技術選擇培養基克隆化培養、抗體檢測從腹水中提取從培養液中提取任務一：閱讀課本單克隆抗體制備，思考以下問題1.給小鼠特定抗原的目的？2.如果要從小鼠脾臟中獲得更多產生特定抗體的B淋巴細胞，可以怎么做？3.為什么從小鼠脾中提取的B淋巴細胞有多種而不是一種？4.如果只考慮細胞間的兩兩融合，融合體系中有幾種細胞？為什么？5.第一次篩選的方法，選出雜交瘤細胞是一種還是多種，為什么？6.第二次篩選的方法，目的是要得到什么細胞？7.大規模的生產單克隆抗體的方法有幾種？注射到小鼠腹腔中有什么優點？誘導小鼠產生分分泌特定抗體的B淋巴細胞反復給小鼠注射特定抗原小鼠接觸過多種抗原，產生了多種B淋巴細胞5種細胞融合是隨機的，且融合率達不到100%選擇培養基；克隆化培養+抗體檢測；小鼠接觸過多種抗原，脾中提取的B細胞多種，誘導形成了多種雜交瘤細胞產生所需抗體的雜交瘤細胞融合的具有同種核的細胞、單克隆抗體給小鼠注射特定抗原脾中提取多種B淋巴細胞骨髓瘤細胞未融合親本細胞、雜交瘤細胞多種雜交瘤細胞產生所需抗體的雜交瘤細胞融合篩選1篩選2體外培養注射到小鼠腹腔內方法：方法：PEG、電融合、滅活病毒選擇培養基克隆化培養、抗體檢測從腹水中提取從培養液中提取優點：未融合的親本細胞和同種核融合的細胞都會死亡。原理：抗原抗體特異性結合操作簡單，不需要培養培養基，對環境要求低。（可進行多次）選擇培養基—雜交瘤細胞【第一次篩選】知識拓展全合成途徑（D途徑）：補救合成途徑（S途徑）：糖、氨基酸H、T核苷酸DNA酶B淋巴細胞骨髓瘤細胞合成DNAD途徑S途徑D途徑氨基蝶呤?A阻斷?A阻斷B、瘤、BB、瘤瘤、B瘤（雜交瘤細胞）克隆化培養、抗體檢測—產生所需抗體的雜交瘤細胞【第二次篩選】知識拓展脾B淋巴細胞骨髓瘤細胞誘導融合選擇培養基抗體檢測呈陽性細胞-產生所需抗體的雜交瘤細胞克隆化培養原理：抗原抗體特異性結合（可進行多次）病原體脾B淋巴細胞+抗體1抗體2抗體3抗體4抗體1抗體2抗體3抗體4分離血清產量低、純度低、特異性差準確識別抗原細微差異、與特定抗原特異性結合、可以大量制備。血清分離抗體：單克隆抗體：細胞融合選擇培養基克隆化培養+抗體檢測運載藥物抗體：特異性識別抗原，起到靶向運輸作用藥物：發揮治療作用，殺死靶細胞診斷試劑本節小結原理方法