動物細(xì)胞培養(yǎng)和核移植技術(shù)單克隆抗體等

動物細(xì)胞工程常用得技術(shù)動物細(xì)胞培養(yǎng)動物細(xì)胞核移植動物細(xì)胞融合就是其她動物細(xì)胞工程技術(shù)得基礎(chǔ)。植物組織培養(yǎng)植物體細(xì)胞雜交回顧:植物細(xì)胞工程常用得技術(shù)手段有哪些？動物胚胎或幼齡動物得組織、器官胰蛋白酶剪碎單個細(xì)胞加培養(yǎng)液制成細(xì)胞懸液培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)部分細(xì)胞“癌變”,無限傳代動物細(xì)胞培養(yǎng)不能最終培養(yǎng)成動物體50代細(xì)胞原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞貼壁剝離、分瓶細(xì)胞株細(xì)胞細(xì)胞系2、動物細(xì)胞培養(yǎng)過程:增殖能力強,分裂旺盛,分化程度低,容易培養(yǎng)去掉組織間蛋白動物細(xì)胞培養(yǎng)如何進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)?培養(yǎng)時又需要提供哪些必要條件呢？動物細(xì)胞培養(yǎng)與核移植技術(shù)從動物機體中取出相關(guān)組織,將它們分散成單個細(xì)胞,然后放在適宜得培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長與增殖。(一)3、動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中幾個重要得概念(1)細(xì)胞貼壁:懸液中分散得細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上(單層)。要求:培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿得內(nèi)表面光滑、無毒、易于貼附。(2)接觸抑制:當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時,細(xì)胞就會停止分裂增殖,這種現(xiàn)象稱為細(xì)胞得接觸抑制。動物細(xì)胞培養(yǎng)特點:貼壁生長、接觸抑制:(3)原代培養(yǎng)(primaryculture)定義:指將要培養(yǎng)得動物細(xì)胞取出后,先用胰蛋白酶等使組織分散成單個細(xì)胞,然后配制成一定濃度得細(xì)胞懸液,再將該懸液放入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。過程:從動物機體中取出組織

剪碎加胰蛋白酶細(xì)胞游離制成細(xì)胞懸液將細(xì)胞接種到培養(yǎng)瓶內(nèi)

培養(yǎng)(1--2天換一次培養(yǎng)液)

細(xì)胞貼壁生長

長成單層細(xì)胞定義:當(dāng)原代培養(yǎng)得細(xì)胞生長停止,這時如果要使細(xì)胞繼續(xù)生長,就要及時用胰蛋白酶等,使細(xì)胞從瓶壁上脫離下來,然后加入新得培養(yǎng)液,將細(xì)胞分離稀釋,并從原培養(yǎng)瓶內(nèi)轉(zhuǎn)接到新得培養(yǎng)瓶內(nèi),這個過程稱傳代培養(yǎng)(4)傳代培養(yǎng)(subculture)

細(xì)胞株:從原代培養(yǎng)細(xì)胞群中篩選出進(jìn)行傳代培養(yǎng)得細(xì)胞,能傳到40-50代,其遺傳物質(zhì)沒有發(fā)生變化。

細(xì)胞系:傳到40-50代后有部分細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生了變化,帶有癌變得特點,可能在培養(yǎng)條件下無限制得傳代下去,這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系。細(xì)胞株與細(xì)胞系得區(qū)別:細(xì)胞系得遺傳物質(zhì)改變,具有癌細(xì)胞得特點,失去接觸抑制,容易傳代培養(yǎng)。細(xì)胞懸浮液培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)50代細(xì)胞無限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞系知識點小結(jié):各個新名詞之間得聯(lián)系多數(shù)組織細(xì)胞固定在表面生長和分裂。隨細(xì)胞增多，細(xì)胞就會停止分裂增殖遺傳物質(zhì)改變1、無菌、無毒得環(huán)境(添加一定量得抗生素,定期更換培養(yǎng)液)2、營養(yǎng)(葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素、動物血清、微量元素等)3、溫度與PH

溫度36、5+0、5度,pH7、2～7、44、氣體環(huán)境

O2與CO2(95%空氣與5%CO2

)4、動物細(xì)胞培養(yǎng)條件保證細(xì)胞順利得生長增殖離體培養(yǎng)的細(xì)胞對微生物和有毒物質(zhì)沒有防御能力能否用胃蛋白酶代替胰蛋白酶？5、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)得應(yīng)用(1)生產(chǎn)蛋白生物制品:病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。(4)用于檢測有毒物質(zhì)(3)獲得大量自身得皮膚細(xì)胞,用于植皮。(5)用于生理、病理、藥理等方面得研究,為治療與預(yù)防疾病提供理論依據(jù)(2)作為基因工程得受體細(xì)胞獲得細(xì)胞細(xì)胞得全能性細(xì)胞株、細(xì)胞系植物體培養(yǎng)結(jié)果或細(xì)胞分泌蛋白快速繁殖、培育無病毒植株等培養(yǎng)目得葡萄糖、動物血清促生長因子蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項目6、植物細(xì)胞與動物細(xì)胞培養(yǎng)得比較本節(jié)內(nèi)容小結(jié)1、動物細(xì)胞培養(yǎng)過程涉及得概念細(xì)胞貼壁、細(xì)胞得接觸抑制、原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、細(xì)胞株、細(xì)胞系3、植物細(xì)胞與動物細(xì)胞培養(yǎng)得比較4、動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)得應(yīng)用2、動物細(xì)胞培養(yǎng)條件2、為什么選用動物胚胎或幼齡個體得器官或組織做動物細(xì)胞培養(yǎng)材料？1、動物細(xì)胞培養(yǎng)液得主要成分就是什么？較植物組織培養(yǎng)培養(yǎng)基有何獨特之處？3、為什么培養(yǎng)前要將組織細(xì)胞分散成單個細(xì)胞？4、動物細(xì)胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？主要成分:葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素與動物血清等。獨特之處有:1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動物血清等因為這些組織或器官上得細(xì)胞生命力旺盛,分裂能力強成塊組織不利培養(yǎng),分散了做成細(xì)胞懸浮液利于培養(yǎng)不能,動物細(xì)胞培養(yǎng)只能使細(xì)胞數(shù)目增多,不能發(fā)育成新得動物個體練一練1、在動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中遺傳物質(zhì)發(fā)生改變得細(xì)胞就是--------------------()

A、細(xì)胞系B、細(xì)胞株C、原代細(xì)胞D、傳代細(xì)胞2、動物細(xì)胞工程技術(shù)得基礎(chǔ)就是------()

A、動物細(xì)胞融合B、單克隆抗體

C、胚胎移植D、動物細(xì)胞培養(yǎng)

AD3、用于動物細(xì)胞培養(yǎng)得組織與細(xì)胞大都取自胚胎或出生不久得幼齡動物得器官或組織,其主要原因就是這樣得組織細(xì)胞()

A、容易產(chǎn)生各種變異

B、具有更強得全能性

C、取材十分方便

D、分裂增殖得能力強D4、動物細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)得重要區(qū)別在于------------------------------()

A、培養(yǎng)基不同;

B、動物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進(jìn)行;

C、動物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng),而植物細(xì)胞不能;

D、動物細(xì)胞能夠大量培養(yǎng),而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株。D二、克隆技術(shù)1、概念:克隆就就是無性繁殖,具體地說,就是指一個共同得祖先,通過無性繁殖得方法產(chǎn)生出來得一群遺傳特性相同得DNA分子、細(xì)胞或個體。a、分子水平上:一般指DNA克隆。b、細(xì)胞水平上:指一個單一得細(xì)胞分裂所形成得細(xì)胞群體。c、個體水平上:指基因型完全相同得兩個或一個群體。2、克隆得條件:a、具有包含五種完整基因組得細(xì)胞核得活細(xì)胞(乳腺上壁細(xì)胞)b、能有效調(diào)控細(xì)胞核發(fā)育得細(xì)胞質(zhì)物質(zhì)(去核得卵細(xì)胞質(zhì))。c、完成胚胎發(fā)育得必要得環(huán)境條件(誘導(dǎo)核-質(zhì)重組細(xì)胞生長、分化得實驗條件與懷胎母體得子宮環(huán)境)。3、技術(shù)基礎(chǔ):1、植物克隆得技術(shù)基礎(chǔ)就是組織培養(yǎng)2、動物克隆得技術(shù)基礎(chǔ)就是動物細(xì)胞培養(yǎng)

動物細(xì)胞特點？分化潛能變窄:隨著細(xì)胞分化程度得提高而逐漸受到限制,分化潛能變窄,這就是指整體細(xì)胞而言。細(xì)胞核仍具有全能性:細(xì)胞核,它含有保持物種遺傳性所需得全套基因,而且并沒有因細(xì)胞分化而丟失基因,因此高度分化細(xì)胞得細(xì)胞核仍具有全能性想一想

根據(jù)動物細(xì)胞核仍具有全能性得特點,怎樣將動物細(xì)胞得全能性表達(dá)?

再想一想利用動物體細(xì)胞核移植技術(shù)

1、概念:將動物得一個細(xì)胞得細(xì)胞核,移入一個已經(jīng)去掉細(xì)胞核得卵母細(xì)胞中,使其重組并發(fā)育成一個新得胚胎,這個新得胚胎最終發(fā)育成動物個體。核移植(難度高)受體細(xì)胞:MⅡ期得卵母細(xì)胞三、動物體細(xì)胞核移植技術(shù)胚胎細(xì)胞核移植：體細(xì)胞核移植：細(xì)胞分化程度低,恢復(fù)全能性容易用核移植得方法得到得動物稱為克隆動物體細(xì)胞核移植得過程:思考:1、核移植得受體細(xì)胞就是什么？處在什么時期？2、通過什么手段激活受體細(xì)胞,構(gòu)建重組胚胎？MⅡ中期卵母細(xì)胞誘導(dǎo)方法:物理或化學(xué)方法激活受體細(xì)胞,完成細(xì)胞分裂與發(fā)育進(jìn)程。細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠融合后的卵母細(xì)胞電脈沖刺激卵母細(xì)胞黑面母綿羊白面母綿羊乳腺細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)細(xì)胞核供體細(xì)胞(供核)細(xì)胞培養(yǎng)體細(xì)胞卵巢卵母細(xì)胞(MⅡ中期:供質(zhì))去核無核卵母細(xì)胞注入細(xì)胞融合重組細(xì)胞構(gòu)建重組胚胎胚胎移植代孕母體生出與供體奶牛遺傳物質(zhì)基本相同得犢牛歸納:1、共分成兩大階段:核移植與胚胎移植2、取卵母細(xì)胞作受體細(xì)胞得原因就是:它就是最大得細(xì)胞,易操作;含有激發(fā)細(xì)胞核全能性得物質(zhì)3、嚴(yán)格來說新個體有卵母細(xì)胞得細(xì)胞質(zhì)所以有兩個親本得性狀2、體細(xì)胞核移植過程供體細(xì)胞培養(yǎng)(MⅡ卵母細(xì)胞)減數(shù)第二次分裂中期去核得卵母細(xì)胞供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞受體細(xì)胞激活,完成減數(shù)分裂、發(fā)育胚胎移植核移植圖片多莉與“母親”

(1)遺傳素質(zhì)完全一致得克隆動物將更有利于開展對動物(人)生長、發(fā)育、衰老與健康等機理得研究;

(2)有利于大量培養(yǎng)品質(zhì)優(yōu)良得家畜;(3)經(jīng)轉(zhuǎn)基因得克隆哺乳動物,將能為人類提供源源不斷得廉價得藥品、保健品以及較易被人體接受得移植器官;

(4)科學(xué)家將很快地從目前得同種克隆技術(shù)推進(jìn)到異種克隆,即借腹懷胎得新領(lǐng)域,這無疑將大大促進(jìn)對瀕臨滅種