第2節(jié)

微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用第二課時(shí)

微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)010203通過對(duì)土壤中分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行分離和計(jì)數(shù)，理解并掌握微生物計(jì)數(shù)的方法。（科學(xué)探究）通過實(shí)例，理解各類微生物都能適應(yīng)其生活環(huán)境。（生命觀念）根據(jù)微生物的代謝類型，配制選擇培養(yǎng)基，總結(jié)分離微生物的過程和測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。（科學(xué)思維）溫故知新：酵母菌的純培養(yǎng)酵母菌的純培養(yǎng)2.接種和分離酵母菌1.制備培養(yǎng)基3.培養(yǎng)酵母菌①配制培養(yǎng)基（馬鈴薯、葡萄糖、瓊脂、水）②滅菌③倒平板（在酒精燈火焰附近操作）培養(yǎng)基：濕熱滅菌（高壓蒸汽滅菌鍋）培養(yǎng)皿：干熱滅菌（干熱滅菌鍋）用接種環(huán)在固體培養(yǎng)基上用平板劃線法接種平板倒置，放入28℃左右的恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)問題1：自然界中微生物數(shù)量繁多，種類龐雜，要想從中分離出需要的特定微生物并不容易，尤其當(dāng)要分離的微生物在混合菌群中不是優(yōu)勢(shì)種群時(shí)，僅通過一般的平板劃線法或稀釋涂布平板法很難實(shí)現(xiàn)。該怎么辦呢？選擇培養(yǎng)基應(yīng)運(yùn)而生。PCR是一種在體外DNA復(fù)制的技術(shù)，此項(xiàng)技術(shù)要求使用耐高溫（930C）的DNA聚合酶。（一）科學(xué)實(shí)例：尋找耐高溫的DNA聚合酶

黃石公園（視頻）1.篩選原因：水生棲熱菌能在70-80℃高溫條件下生存，而絕大多數(shù)微生物在此條件下不能生存。耐高溫的酶耐高溫生物體高溫環(huán)境（熱泉、火山口）尋找尋找2.篩選思路：一、選擇培養(yǎng)基文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定尋找耐高溫的DNA聚合酶（一）科學(xué)實(shí)例：3.啟示：尋找目的菌種時(shí)要根據(jù)它對(duì)生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中去尋找。耐寒微生物耐熱微生物石油分解菌問題2：這對(duì)在實(shí)驗(yàn)室中選擇培養(yǎng)特定的微生物有什么啟示？如何篩選？什么是選擇培養(yǎng)基？文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定問題2：這對(duì)在實(shí)驗(yàn)室中選擇培養(yǎng)特定的微生物有什么啟示？如何篩選？什么是選擇培養(yǎng)基？閱讀教材P16第2段，并思考以下問題：?jiǎn)栴}3：怎么證明一個(gè)選擇培養(yǎng)基具有選擇性呢？問題4：如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來，培養(yǎng)基的配方該如何設(shè)計(jì)？（二）實(shí)驗(yàn)室中微生物篩選的原理：

人為提供

的條件（包括

、

和

等），同時(shí)

。有利于目的菌生長(zhǎng)抑制或阻止其他微生物的生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)溫度pH（三）概念：

在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基稱為選擇培養(yǎng)基。（四）類型：在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)改變培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分改變微生物的培養(yǎng)條件文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定+氨芐青霉素具有抗氨芐青霉素能力的菌落沒有氨芐青霉素抗性的細(xì)菌在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)培養(yǎng)基+氨芐青霉素培養(yǎng)基沒有抗氨芐青霉素能力的菌落被淘汰怎樣選擇出抗氨芐青霉素能力的細(xì)菌?問題3：怎么證明一個(gè)選擇培養(yǎng)基具有選擇性呢？文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定

應(yīng)該設(shè)置基礎(chǔ)培養(yǎng)基（如牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）或完全培養(yǎng)基作為對(duì)照，若基礎(chǔ)培養(yǎng)基或完全培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的菌落數(shù)菌多于該選擇培養(yǎng)基，則該選擇培養(yǎng)基具有選擇性。基礎(chǔ)培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基

問題3：怎么證明一個(gè)選擇培養(yǎng)基具有選擇性呢？問題4：如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來，培養(yǎng)基的配方該如何設(shè)計(jì)？文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定不同類型選擇培養(yǎng)基的應(yīng)用不加碳源自養(yǎng)微生物不加氮源固氮微生物加入青霉素酵母菌和霉菌(青霉素能殺死細(xì)菌、放線菌)加高濃度食鹽金黃色葡萄球菌石油是唯一碳源能消除石油污染的微生物任務(wù)一：請(qǐng)同學(xué)們自主學(xué)習(xí)教材P16頁，小組合作思考討論完成問題。

1.如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來，培養(yǎng)基的配方該如何設(shè)計(jì)？2.該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基有哪些共同點(diǎn)和不同點(diǎn)？文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定選擇培養(yǎng)基配方的設(shè)計(jì)思考.討論尿素含氮量高，化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素施入土壤后，被某些細(xì)菌分解成NH3，NH3再轉(zhuǎn)化成NO3-、NH4+等才能被植物吸收。土壤中尿素分解菌之所以能將尿素分解，是因?yàn)樗鼈兡芎铣呻迕福耗蛩氐牧Ⅲw結(jié)構(gòu)問題4：如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來，培養(yǎng)基的配方該如何設(shè)計(jì)？CO(NH2)2+H2O2NH3+CO2

脲酶文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定選擇培養(yǎng)基配方的設(shè)計(jì)思考.討論問題1：如果讓你配制一種培養(yǎng)基，將土壤稀釋液中能分解尿素的細(xì)菌分離出來，培養(yǎng)基的配方該如何設(shè)計(jì)？

設(shè)計(jì)一種選擇培養(yǎng)基,用尿素作為唯一氮源,可以將分解尿素的細(xì)菌分離出來。問題2：該培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基有哪些共同點(diǎn)和不同點(diǎn)？這種培養(yǎng)基與普通培養(yǎng)基相比，只是用尿素作為唯一氮源，培養(yǎng)基的其他營(yíng)養(yǎng)成分基本相同。文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g瓊脂20.0g蒸餾水定容到1000ml培養(yǎng)基一KH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素1.0g瓊脂15.0g蒸餾水定容到1000ml培養(yǎng)基二1.從物理性質(zhì)來講，兩者屬于_____培養(yǎng)基，判斷依據(jù)是_______________；該類培養(yǎng)基的主要用途為_____________________。2.從目的用途上來講，

屬于選擇培養(yǎng)基，目的是為了獲得

。3.兩種培養(yǎng)基共有的培養(yǎng)基成分有：

。固體添加了凝固劑瓊脂分離、鑒定、計(jì)數(shù)、保存培養(yǎng)基二能分解尿素的微生物碳源、氮源、無機(jī)鹽、水課堂練習(xí)

問題3：僅通過選擇培養(yǎng)基可以知道1g土壤中有多少能分解尿素的細(xì)菌嗎？二、微生物的選擇培養(yǎng)1g土壤中有多少能分解尿素的細(xì)菌？（一）方法：分離：獲得分解尿素的細(xì)菌的純培養(yǎng)物計(jì)數(shù)：測(cè)定分解尿素的細(xì)菌的數(shù)量問題1：由于土壤細(xì)菌的數(shù)量龐大，怎么獲得要想得到特定微生物的純培養(yǎng)物呢？稀釋涂布平板法

是將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。1.概念：文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定任務(wù)二：請(qǐng)同學(xué)們自主學(xué)習(xí)教材P17-18頁，觀看稀釋涂布平板法操作視頻，小組合作思考討論完成問題。

1.培養(yǎng)時(shí)要將一個(gè)未接種的培養(yǎng)基和一個(gè)已接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)為什么？2.實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)有哪些？文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定2.步驟：（1）梯度稀釋菌液（2）涂布平板文山市第一中學(xué)微生物的選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基

細(xì)菌宜在酸堿度接近中性的潮濕土壤中生長(zhǎng)，絕大部分分布在距地表3~8cm的土壤層。鏟去表層土3cm左右，取樣，將樣品裝入事先準(zhǔn)備好的信封中。①土壤取樣

取土樣時(shí)用的鐵鏟和取樣袋在使用前都需要滅菌。操作完成后，一定要洗手。2.步驟：（1）梯度稀釋菌液文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定

將10g土樣加入盛有90mL無菌水的錐形瓶中，充分搖勻。取1mL上清液加入盛有9mL無菌水的試管中，依次等比稀釋。1×101mL1mL1mL1mL1mL1mL1×1021×1031×1041×1051×1061×1079mL無菌水90mL無菌水10g②樣品的稀釋2.步驟：（1）梯度稀釋菌液文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定①取0.1mL菌液滴加到培養(yǎng)基表面1×107移液槍②將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中③將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進(jìn)行涂布④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂布均勻2.步驟：（2）涂布平板文山市第一中學(xué)微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定選擇培養(yǎng)基21恒溫培養(yǎng)箱稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍空白對(duì)照待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，放入30-37℃的恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)1-2d。2.步驟：（3）菌落培養(yǎng)問題2：培養(yǎng)時(shí)要將一個(gè)未接種的培養(yǎng)基和一個(gè)已接種的培養(yǎng)基放在一起培養(yǎng)為什么？培養(yǎng)未接種的培養(yǎng)基的作用是對(duì)照。文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定3.注意事項(xiàng)：注意事項(xiàng)三注意事項(xiàng)四注意事項(xiàng)一注意事項(xiàng)二將涂布器從酒精中取出時(shí)，要讓多余的酒精在燒杯中滴盡，然后再放在火焰上灼燒；不要將過熱的涂布器放在盛有酒精的燒杯中，以免引燃酒精。過程中所有操作都應(yīng)在酒精燈火焰旁進(jìn)行10g土樣加入盛有90mL無菌水中后，已稀釋10倍，在計(jì)算時(shí)，不要忽略；由于使用的是選擇培養(yǎng)基，所以一般情況下，獲得的單菌落即目的菌，但因?yàn)橛行┪⑸锟梢岳媚康木拇x產(chǎn)物來生長(zhǎng)繁殖，所以還需要進(jìn)一步驗(yàn)證文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定主要方法稀釋涂布平板法平板劃線法主要步驟接種工具菌體獲取能否用于計(jì)數(shù)共同點(diǎn)稀釋涂布平板法和平板劃線法的比較系列梯度稀釋操作和涂布平板操作接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線涂布器接種環(huán)從適宜稀釋度的平板上的菌落中挑取菌體在具有顯著的菌落特征的區(qū)域挑取菌體可以計(jì)數(shù)，但是操作復(fù)雜，需涂布多個(gè)平板不能計(jì)數(shù)使培養(yǎng)基上形成由單個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖而來的子細(xì)胞群體——菌落文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定文山市第一中學(xué)微生物的數(shù)量測(cè)定選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)三、微生物的數(shù)量測(cè)定（一）統(tǒng)計(jì)菌體數(shù)目：1.稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法——間接計(jì)數(shù)法2.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法——直接計(jì)數(shù)法稀釋103倍稀釋104倍稀釋105倍空白對(duì)照血細(xì)胞/細(xì)菌計(jì)數(shù)板文山市第一中學(xué)微生物的數(shù)量測(cè)定選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)【任務(wù)三】閱讀課本18頁第2-4段，明確微生物的數(shù)量測(cè)定中的方法，并對(duì)每種方法進(jìn)行分析。1.間接計(jì)數(shù)法—稀釋涂布平板法（1）原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠

時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)

，來源于

中的一個(gè)

。通過計(jì)數(shù)平板上的

數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少

。樣品的稀釋度將直接影響平板上的菌落數(shù)目高菌落樣品稀釋液活菌菌落活菌文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基不同微生物在土壤中含量不同，分離不同的微生物采用不同的稀釋度，以保證獲得菌落數(shù)在30～300之間適于計(jì)數(shù)的平板。測(cè)細(xì)菌數(shù)：一般用104、105、106稀釋液。測(cè)放線菌：一般用103、104、105稀釋液。測(cè)真菌數(shù)：一般用102、103、104稀釋液。思考：在初次實(shí)驗(yàn)中，對(duì)于稀釋的范圍沒有把握，怎樣做才能保證從中選擇出菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)？選用稀釋范圍更大的稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)樣品稀釋涂布平板（補(bǔ)充）微生物的數(shù)量測(cè)定微生物的選擇培養(yǎng)1.稀釋涂布平板計(jì)數(shù)法——間接計(jì)數(shù)法（2）計(jì)數(shù)原則：選擇菌落數(shù)為30~300的平板計(jì)數(shù)。同一稀釋度下，應(yīng)至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)。恰當(dāng)?shù)南♂尪取⑼坎际欠窬鶆蚴浅晒y(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵。文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定缺點(diǎn)：因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，繁殖后形成的還是一個(gè)菌落。文山市第一中學(xué)微生物的數(shù)量測(cè)定選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)（3）.計(jì)算每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×MC代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(ml)，M代表稀釋倍數(shù)。

實(shí)例1：甲同學(xué)做此實(shí)驗(yàn)在稀釋倍數(shù)105獲得3個(gè)平板，菌落數(shù)分別是80、90、100，涂布平板時(shí)均使用0.1ml菌液，試計(jì)算每克土壤中可以分離尿素的細(xì)菌數(shù)目？（80+90+100）/30.1×105=9×107個(gè)文山市第一中學(xué)微生物的數(shù)量測(cè)定選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)課堂訓(xùn)練

2.某同學(xué)在稀釋倍數(shù)為106

的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均數(shù)為234，那么每g樣品中的菌落數(shù)是（涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1mL)()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.41.用稀釋涂布平板法測(cè)定同一土壤樣品中的細(xì)菌數(shù)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，其中正確的是()A.涂布了1個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B.涂布了2個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是215和260，取平均值238C.涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是13、234和254，取平均值167D.涂布了3個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為210、240和250，取平均值233文山市第一中學(xué)微生物的數(shù)量測(cè)定選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)2.直接計(jì)數(shù)—顯微鏡直接計(jì)數(shù)法①原理：利用細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積里樣品中微生物的數(shù)量。②缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌；個(gè)體小的細(xì)菌在顯微鏡下難以觀察；（“染色排除法”）①工具：血球計(jì)數(shù)板②方法：抽樣檢測(cè)法探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究.實(shí)踐實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（4）酵母菌計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)板正面方格網(wǎng)計(jì)數(shù)室

每塊計(jì)數(shù)板由H形凹槽分為2個(gè)同樣的計(jì)數(shù)區(qū)。每個(gè)計(jì)數(shù)區(qū)分為9個(gè)大方格。規(guī)格一：25×16型A1A2A3A4A5規(guī)格二：16×25型A1A3A2A4實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（4）酵母菌計(jì)數(shù)每個(gè)計(jì)數(shù)室共有400小格，總?cè)莘e為0.1mm3。A1A2A3A4A51mL=103mm3計(jì)數(shù)一個(gè)小方格內(nèi)酵母菌數(shù)量，再以此為依據(jù)估計(jì)培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)。1mL培養(yǎng)液中細(xì)胞個(gè)數(shù)：=小方格中細(xì)胞數(shù)量的平均值×400×104×稀釋倍數(shù)探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究.實(shí)踐每個(gè)計(jì)數(shù)室共有400小格，總?cè)莘e為0.1mm3。規(guī)格二（25×16）：1mL培養(yǎng)液中細(xì)胞個(gè)數(shù)＝中方格中酵母菌數(shù)量的平均值×25×104×稀釋倍數(shù)規(guī)格一（16×25）：1mL培養(yǎng)液中細(xì)胞個(gè)數(shù)＝中方格中酵母菌數(shù)量的平均值×16×104×稀釋倍數(shù)探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究.實(shí)踐16×25型計(jì)數(shù)板25×16型計(jì)數(shù)板實(shí)戰(zhàn)訓(xùn)練

1.用血球計(jì)數(shù)板對(duì)培養(yǎng)液中酵母菌進(jìn)行計(jì)數(shù)，若計(jì)數(shù)室為1mm×1mm×0.1mm方格，由400個(gè)小方格組成。若多次重復(fù)計(jì)數(shù)后，算得每個(gè)小方格中平均有5個(gè)酵母菌，則10mL該培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)有

個(gè)。2×108

解析：根據(jù)公式：5×400×10000×10＝2×108

實(shí)戰(zhàn)訓(xùn)練

2.若使用的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板(規(guī)格為1mm×1mm×0.1mm)每個(gè)計(jì)數(shù)室分為25個(gè)中方格，每個(gè)中方格又分為16個(gè)小方格，將樣液稀釋100倍后計(jì)數(shù)，發(fā)現(xiàn)計(jì)數(shù)室四個(gè)角及中央共5個(gè)中方格內(nèi)的酵母菌總數(shù)為20個(gè)，則培養(yǎng)液中酵母菌的密度為

個(gè)/mL。1×108解析：根據(jù)公式：（20÷5)×25×10000×100＝1×108探究.實(shí)驗(yàn)土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)（P18-19)一提出問題土壤中含有能分解尿素的細(xì)菌，我們?nèi)绾畏蛛x它們？每克土壤樣品究竟含有多少這樣的細(xì)菌？二作出假設(shè)三實(shí)驗(yàn)原理利用以“尿素作為唯一氮源”的選擇培養(yǎng)基，可以分離。絕大多數(shù)微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以尿素作唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，可以從土壤中分離出分解尿素的細(xì)菌。文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定文山市第一中學(xué)微生物的數(shù)量測(cè)定選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)任務(wù)四：請(qǐng)同學(xué)們自主學(xué)習(xí)教材P18-19頁，觀看土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離和計(jì)數(shù)視頻，小組合作思考討論完成問題。

1.結(jié)合對(duì)照組，分析培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出一些菌落。2.你是否獲得了某一稀釋度下菌落數(shù)為30～300的平板在這一稀釋度下，是否至少有2個(gè)平板的菌落數(shù)接近？3.你統(tǒng)計(jì)的每克土樣中能分解尿素的細(xì)菌的菌落數(shù)是多少？與其他同學(xué)統(tǒng)計(jì)的結(jié)果接近嗎？如果差異很大，可能是什么原因引起的？文山市第一中學(xué)微生物的數(shù)量測(cè)定選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)1.實(shí)驗(yàn)流程：樣品稀釋涂布平板微生物的培養(yǎng)與觀察菌落計(jì)數(shù)土壤取樣制備培養(yǎng)基1、實(shí)驗(yàn)流程：樣品稀釋涂布平板微生物的培養(yǎng)與觀察菌落計(jì)數(shù)土壤取樣制備培養(yǎng)基①要求：富含有機(jī)質(zhì)、酸堿度接近中性且潮濕的土壤②取樣土層：距地表3~8cm的土壤層以尿素為唯一氮源（選擇培養(yǎng)基）在酒精燈火焰旁稱取土壤10g，放入90mL無菌水的錐形瓶中，震蕩使土壤與水充分混合，將細(xì)菌分散，制成101倍土壤稀釋液。用1支1mL無菌吸管從中吸取1mL土壤懸液注入盛有9mL無菌水的試管中，吸取三次，充分混勻，制成102倍的土壤稀釋液。以此類推，制成103、104、105、106、107倍的土壤稀釋液。文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定一浸、二滴、三燒、四涂1、實(shí)驗(yàn)流程：樣品稀釋涂布平板微生物的培養(yǎng)與觀察菌落計(jì)數(shù)土壤取樣制備培養(yǎng)基圖中的1、2、3平板是選擇培養(yǎng)基，4平板為牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，以判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用；另外，還要有兩個(gè)對(duì)照，即不涂布稀釋液的選擇培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基以驗(yàn)證培養(yǎng)基中是否含有雜菌。文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定1、實(shí)驗(yàn)流程：樣品稀釋涂布平板微生物的培養(yǎng)與觀察菌落計(jì)數(shù)土壤取樣制備培養(yǎng)基培養(yǎng)條件：不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。

細(xì)菌一般在30～37℃的溫度下培養(yǎng)1～2d。觀察：每隔24h統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果。防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致菌落數(shù)目遺漏。結(jié)果：一般來說，在相同的培養(yǎng)條件下，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征，如形狀、大小和顏色等。注意事項(xiàng)：本實(shí)驗(yàn)使用的平板和試管較多，為了避免混淆，最好在使用前做好標(biāo)記。例如，在標(biāo)記培養(yǎng)皿時(shí)應(yīng)該注明組別、培養(yǎng)日期和平板上培養(yǎng)樣品的稀釋度等。選擇培養(yǎng)基文山市第一中學(xué)微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定1、實(shí)驗(yàn)流程：樣品稀釋涂布平板微生物的培養(yǎng)與觀察菌落計(jì)數(shù)土壤取樣制備培養(yǎng)基當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，同一稀釋度下至少計(jì)數(shù)3個(gè)平板，求出平均值，并根據(jù)所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。設(shè)計(jì)如下表格記錄并計(jì)數(shù)。稀釋度104105106123平均值123平均值123平均值每個(gè)平板的菌落數(shù)選擇培養(yǎng)基文山市第一中學(xué)微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定1、實(shí)驗(yàn)流程：樣品稀釋涂布平板微生物的培養(yǎng)與觀察菌落計(jì)數(shù)土壤取樣制備培養(yǎng)基當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，選取菌落數(shù)在30~300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，同一稀釋度下至少計(jì)數(shù)3個(gè)平板，求出平均值，并根據(jù)所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。設(shè)計(jì)如下表格記錄并計(jì)數(shù)。稀釋度菌落形狀菌落大小菌落顏色平均值104105106選擇培養(yǎng)基文山市第一中學(xué)微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定問題1:結(jié)合對(duì)照組，分析培養(yǎng)物中是否有雜菌污染以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出一些菌落。

如果沒有接種的培養(yǎng)基上沒有菌落生長(zhǎng)，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。如果接種后的完全培養(yǎng)基上的菌落數(shù)明顯多于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)，說明選擇培養(yǎng)基篩選出了一些尿素分解菌。問題2:你是否獲得了某一稀釋度下菌落數(shù)為30～300的平板？在這一稀釋度下，是否至少有2個(gè)平板的菌落數(shù)接近？

如果得到了兩個(gè)或多個(gè)菌落數(shù)為30~300的平板，說明稀釋度合適，操作比較成功，能夠進(jìn)行菌落的計(jì)數(shù)。2、特別注意：選擇培養(yǎng)基文山市第一中學(xué)微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定問題3:你統(tǒng)計(jì)的每克土樣中能分解尿素的細(xì)菌的菌落數(shù)是多少？與其他同學(xué)統(tǒng)計(jì)的結(jié)果接近嗎？如果差異很大，可能是什么原因引起的？

如果是用同一土樣進(jìn)行的操作，數(shù)據(jù)應(yīng)該比較接近。如果差異很大，就需要從操作是否規(guī)范、培養(yǎng)基配制是否合理等方面查找原因。問題4:得到的菌落一定是分解尿素的細(xì)菌嗎？不一定，還需要進(jìn)一步的鑒定文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定內(nèi)容現(xiàn)象結(jié)論有無雜菌污染的判斷對(duì)照的培養(yǎng)皿中無菌落生長(zhǎng)未被雜菌污染培養(yǎng)基中菌落數(shù)偏高被雜菌污染菌落形態(tài)多樣，菌落數(shù)偏高培養(yǎng)基中混入其他雜菌選擇培養(yǎng)基的篩選作用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目大于選擇培養(yǎng)基上的數(shù)目選擇培養(yǎng)基具有篩選作用樣品的稀釋操作得到3個(gè)或3個(gè)以上菌落數(shù)目在30~300的平板操作成功重復(fù)組的結(jié)果若選取同一土樣，統(tǒng)計(jì)結(jié)果應(yīng)接近3、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)：文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定拓展延伸：本活動(dòng)只是初步篩選了能分解尿素的細(xì)菌,對(duì)分離的菌種進(jìn)行鑒定還需要借助生物化學(xué)的方法。你可以查閱相關(guān)資料,進(jìn)一步設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)來鑒定自己分離的菌種。需要用“鑒別培養(yǎng)基”一、原理：脲酶催化尿素分解成氨→培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)→酚紅變紅→脲酶陽性CO(NH2)2+H2O2NH3+CO2

脲酶呈堿性，遇酚紅指示劑呈

色。紅在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果PH升高，指示劑將變紅，說明該細(xì)菌能夠分解尿素。文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定二、方法：可以觀察菌落周圍是否出現(xiàn)紅色環(huán)帶，紅色環(huán)帶直徑與菌落直徑比值越大，說明分解能力越強(qiáng)。液體培養(yǎng)基：可以直接看液體的變色情況。固體培養(yǎng)基：

在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品(不影響微生物正常生長(zhǎng))，使微生物的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中的特定指示劑或化學(xué)藥品發(fā)生反應(yīng)。從而達(dá)到鑒定的作用。伊紅和美藍(lán)培養(yǎng)基鑒別大腸桿菌剛果紅培養(yǎng)基鑒別纖維素分解菌文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定選擇培養(yǎng)基和鑒別培養(yǎng)基的比較比較項(xiàng)目選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基特殊成分控制某一條件（如唯一氮源）或加入某種物質(zhì)（如青霉素）加入某種指示劑或化學(xué)藥品目的抑制其他微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)目的微生物的生長(zhǎng)與微生物的代謝產(chǎn)物或培養(yǎng)基中的成分發(fā)生特定反應(yīng)用途培養(yǎng)、分離出特定微生物鑒別不同的微生物舉例培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素，抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)；用以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基來培養(yǎng)尿素分解菌可用伊紅—美藍(lán)堅(jiān)定飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌（若有，菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤）文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定

將一定體積的水用細(xì)菌過濾器過濾后，將濾膜放到伊紅-美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，大腸桿菌菌落呈現(xiàn)黑色，通過記算得出水樣中大腸桿菌的數(shù)量。測(cè)定飲水中大腸桿菌數(shù)量的方法：濾膜法到社會(huì)中去文山市第一中學(xué)選擇培養(yǎng)基微生物的選擇培養(yǎng)微生物的數(shù)量測(cè)定課堂小結(jié)微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)選擇培養(yǎng)基科學(xué)實(shí)例篩選原則選擇培養(yǎng)基的概念及舉例微生物的選擇培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基的作用微生物選擇培養(yǎng)獲取純培養(yǎng)物的方法-稀釋涂布平板法稀釋涂布平板法的操作過程微生物的數(shù)量測(cè)定間接計(jì)數(shù)法—稀釋涂布平板法直接計(jì)數(shù)—計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)培養(yǎng)基的制備實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)（1）土壤取樣（2）樣品的稀釋（3）稀釋涂布平板法接種（4）微生物的培養(yǎng)與觀察高考題1.(2023·山東卷)金黃色葡萄球菌是一種病原菌，它可耐受質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7.5%的NaCl溶液。金黃色葡萄球菌在添加適量血液的血平板上生長(zhǎng)時(shí)，可破壞菌落周圍的紅細(xì)胞，使其褪色。為檢測(cè)鮮牛奶中是否存在金黃色葡萄球菌，科研人員設(shè)計(jì)了如圖所示的流程。下列說法錯(cuò)誤的是（）A.振蕩培養(yǎng)時(shí)應(yīng)選用含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為7.5%NaCl溶液的鑒別培養(yǎng)基B.振蕩培養(yǎng)可使微生物與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)充分接觸，提高培養(yǎng)液中的氧氣含量C.若血平板中菌落周圍出現(xiàn)透明圈，則初步說明鮮牛奶中存在金黃色葡萄球菌D.為使檢測(cè)更嚴(yán)謹(jǐn)，應(yīng)設(shè)置加滅菌的鮮牛奶但其他操作均與圖示相同的對(duì)照組A選擇培養(yǎng)基2.(2023·河北卷)下列有關(guān)微生物培養(yǎng)或純化的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A.微生物在培養(yǎng)前要先對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌處理再接種B.培養(yǎng)液中溶氧量的變化會(huì)影響酵母菌的繁殖和代謝途徑C.分離自養(yǎng)型微生物的方法是用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)D.分離純化微生物的常用方法是平板劃線法和稀釋涂布平板法添加無機(jī)碳源C練習(xí)與應(yīng)用1.研究人員用無機(jī)鹽、瓊脂和石油配制的培養(yǎng)基從被石油污染的土壤中篩選出了一種石