北京大學1991年攻讀碩士學位研究生入學試題生物化學

一.名詞解釋

1.拼接體2.復制子3.反饋調節4.別構效應5.抗體酶

二.英譯漢

1.THF2.ddTPP3.ACTH4.Hbs5.tRNAm6.micRNA7.ACP8.NADPH9.AGo;10.Cotl/2

三.填空

1.NAD+和NADP+還原時在______增加一個吸收峰.

2.常用的DNA超螺旋結構的嵌合劑是

3.在癌變過程中同工酶譜發生______

4.哺乳動物的必須脂肪酸為和

5.某些蛋白質前體都具有它的肽,它們大都相當于______左右氨基酸的長度.殘基側鏈

一般是,位于肽鏈的末端.

6.糖蛋白中糖基與蛋白質肽鏈之間可通過酰糖昔鍵相結合,即和

7.DNA序列的末端終止法所用的工具酶是

8.E.ColiRNA聚合酶的亞基組成為，沒有______亞基的酶稱為核心酶，該亞基的功能為

9.線粒體DNA的復制為方式,大腸桿菌染色體的復制為方式，0X174環狀染色體

和噬菌體XDNA后期復制為方式,真核生物染色體DNA復制為方式

10.呼吸鏈電子傳遞速度受濃度控制的現象稱為

H.膽固醇合成的限速酶是,濃度升高其活性下降

12.喀咤環由和合成的

13.丙酮脫氫酶系統受和.______三種調節控制

14.神經遞質5-羥色胺是由衍生而成

15.乙酰輔酶A進入三竣酸循環,還是形成酮體，由細胞中濃度決定

16.生物固氮是微生物利用轉變成氨的作用

四.是非題

1,編碼區的翻譯效率彼此不同（）

2,酶的Kcat型抑制劑比Ks型抑制劑專一性更強（）

3,紫外線照射可使DNA互補雙鏈間形成T'T（）

4,一個氨基酸殘基就是一個肽單元（）

5,DNA復制需要RNA引物,RNA復制則不需要引物（）

6,蛋白質進化過程中構象是易變的（）

7,由于遺傳的密碼兼并性，一個氨基酸可以有幾種tRNA,但常只有一種氨酰-tRNA合成酶（）

8,蛋白質在熱力學上最穩定的構象是自由能最低的結構（）

9,當一種大腸桿菌突變型為DNA聚合酶III的3'-5'外切酶缺陷時,該突變型表現的特征為對紫外線

敏感（）

10,在酸性條件下,DNA分子上的喋吟不穩定,易被水解下來（）

11,嚴重糖尿病患者因其糖異生作用加強血酮癥（）

12,殺鼠藥氟乙酸的毒性是由于其抑制了順烏頭酸酶從而阻斷了三竣酸循環（）

13,無糖膳食中用含有奇數碳脂肪酸比含有偶數脂肪酸作為食物更好（）

14,高膽固醇血患者因服用B-谷固醇而引起血漿膽固醇水平升高,增加動脈硬化危險（）

15,若amytal和抗霉素A阻斷呼吸鏈的抑制百分數相同，amytal的毒性更大（）

五,分析與計算

1,當谷氨酸C3上標記C14,氨基標記15N,在肝臟中氧化降解，同位素將出現在下列代謝物的哪個原

子上，（1）,琥珀酸，（2）,天冬氨酸，（3）,精氨酸，（4）,尿素

2,今有以下四種蛋白質的混合物：(1)分子量為15,000,pI=10；(2),分子量為62,000,pI=4；(3),分

子量為28,000,pl=8；(4),分子量為9,000,pl=6；若不考慮其它因素,當(A)用CM-纖維素層析柱分

離時，(B)用SephadexG50凝膠層析柱分離時,試寫出這些蛋白的洗脫順序

3,在以下修飾堿基中,何者在形成雙鏈時氫鍵結合的性質不同于和它相關的普通堿基

(1)2-甲基腺嘿吟⑵5-甲基胞喀咤⑶5-羥甲基胞喀咤(4)1-甲基鳥喋吟

4,假定下面的DNA雙鏈分子是從右向左進行轉錄,寫出RNA轉錄產物的序列

5'——ATTCGCTTAAGCAA——3'

3'——TAAGCGAATTCGTT——5'

5,某酶制劑的比活力為42單位/mg蛋白質,每ml含12mg蛋白質，

(1)計算1ml反應液中含5u1酶制劑時的反應初速度

(2)若1ml反應液內含5tli酶制劑,在10分鐘內消耗底物多少?為保證測定酶的初速度,所需要的

最低底物濃度是多少？

6,有一酶分子使其變性后,用澳化氟降解,在降解產物種得到一個未知氨基酸順序的九肽,試根據以

下實驗結果,推斷出此九肽的氨基酸順序

(1)氨基酸分析表明，它含有Ala,Arg,Cys,Glu,Lys,Met,Pro,Phe2,

(2)用Edman法降解得到一個Pro的衍生物

(3)用胰蛋白酶水解得到一個游離Arg,一個二肽和一個六肽，此六肽在PH6.4時呈電中性狀態

(4)用胰凝乳蛋白酶降解得到一個二肽,一個三肽和一個四肽

A,二肽在PH6.4時呈負電荷

B,分析三肽發現里面含有硫

C,在PH6.4時分析四肽，靜電荷為+2,在280nm分析表明不含有芳香氨基酸

六.第一題非生化專業，第二題生化專業。

(一)1.如何判明DNA制劑的純度和是否為天然雙鏈分子

2.如果細菌環狀染色體的復制是雙向的，并且從固定的復制起點開始，每個復制叉以16um

/min的速度移動，細菌染色體長1280um,完成整個染色體復制所需的時間是多少？當細菌在營養

豐富的培養基中每20分鐘分裂一次，也就是說第一輪復制尚未完成就開始第二輪復制，此時染色

體有幾個復制叉？

(二)1.利用標記的16SrRNA和未標記的細菌DNA進行分子表明，在飽和時lOOugDNA能結合0.071ug

的16SrRNA(分子量為5.3x10s),該細菌Cell含有2.6x10,道兒頓DNA.試計算每個細菌基因組所含

16SrRNA基因的拷貝數.

2.用瓊脂糖凝膠電泳分離制備質粒，分出三條帶。請設計實驗，判斷何者是開環DNA,何者為線形

DNA,何者為閉環環DNA。

參考答案：

、

1.拼接體：也叫剪接體，由mRNA前體及多種其他組分如細胞核小分子RNA(SnRNA)和多種蛋白因

子組成。真核mRNA前體的剪接是在剪接體形成之后進行的。

2.復制子：也叫復制單位。從一個復制起點到一個復制終點所包括的DNA序列。

3.反饋調節：一種作用的結果或起因對這種作用的影響叫反饋，常見的反饋是作用結果對這一作用

的抑制一-負反饋。

4.別構效應：也叫變構效應。酶和蛋白質分子發揮生物活性時具有的一種構象變化，常見于寡聚酶

或蛋白質。由于一個或多個亞基受調節物作用構象改變，進而使其余亞基構象改變，別構效應是可

逆的。

5.抗體酶：具有酶活性的抗體。

1.THF四氫葉酸；2.ddTPP2',3'-雙脫氧核甘三磷酸；3.ACTH促腎上腺激素

4.Hbs鐮刀形血紅蛋白；5.tRNAm蛋氨酸tRNA；6.micRNA干擾mRNA的互補RNA

7.ACP脂酰載體蛋白；8.NADPH還原態尼克酰胺二核甘酸磷酸9.AGo)標準自由能變化；

10.Cotl/2表示復性一半時，DNA單鏈初始濃度與時間的乘積

--、

1.340nm；2.澳化乙咤；3.改變；4.亞油酸、亞麻酸；5.信號肽、20個、疏水性、N；

6.0-糖昔鍵，N-糖音鍵；7.Klenow；8.aBB'o,o,辨認起始點

9.D-環復制,0,滾環復制，雙向復制；10.ADP,呼吸控制；ILHMG-CoA還原酶，膽固醇

12.氨甲酰磷酸，天冬氨酸；13.產物抑制，核甘酸的反饋調節，可逆磷酸化的共價調節

14.色氨酸；15.草酰乙酸；16.其體內固氮酶系的作用將分子氮

四、

1.V；2.V；3.X；4.X；5.V；6.X；7.V；8.V；9.X；10.V

11.X；12.V；13.V；14.X；15.V

五、

1.15N出現在尿素中，14C出現在琥珀酸中。

2.CM-纖維素是陽離子交換層析樹脂，所以A的順序為2-4-3-1

當用SephadexG50凝膠時，為分子篩層析，分子量大的先下來，B的順序是2-3-1-4

3.(4)1-甲基鳥喋吟，鳥嘿吟的第一位引入甲基后，不能和胞嚏咤形成3個氫鍵了。

4.根據題意，轉錄模板是上面的那條鏈，所以RNA轉錄產物的序列是：

3'-UAAGCGAAUUCGUU-5,

5.(1)5)1含活力單位:5*10-3*42*12=2.52單位，初速度為2.52umol/(ml.min)

(2)10min消耗的底物是10*2.52=25.2umol/mb為保證測定酶的初速度，底物消耗要低于5%,

25.2*1O「7O.05=0.504,所以最低底物濃度為0.504mol/L.

6.(1)由CNBr降解，可知C末端是Met；(2)由Edman法可知N端是Pro；(3)由胰蛋白酶水解

得知C端三肽是Lys-Arg-Met；(4)由胰凝乳蛋白酶可知cC端含有Glu,含有S的氨基酸是Cys,

該四肽的順序是Tyr-Arg-Glu-Meto所以此肽的順序是：

Pro-Phe-Ala-Cys-Phe-Lys-Arg-Glu-Met

六、第一■組：

1.(1)可以測定該溶液在260nm和280nm處的光吸收，純DNA的0D260/0D280=l.8,

(2)可進行堿基含量分析，當為雙鏈時A=T,C=G

2.(1)完成復制所需的時間：1280/32=40min,(2)20/40=0.5,說明前一輪復制一半時，有開始新

一輪的復制，第二輪的起始會有4個復制叉，所以染色體上有6個復制叉。

第二組：

1.0.071/100=X/⑵6*109)X=0.1846*107

16SrRNA拷貝數=0.1846*107/(503*105)=3048

2.一般情況下超螺旋DNA遷移率快，線性DNA其次，開環DNA最慢。

§北京大學1992年攻讀碩士學位研究生入學試題生物化學

一.名詞解釋

1.ribozyme2.衰減子3.第二信使4.酮體5.鈉鉀離子泵

二.英譯漢

1.DHU2.GHS3.cccDNA4.NADP5.GH6.MSH7.cGMP8.LTR9.ATCase10.PRPP

三填空

1.DNA的合成方向,RNA的轉錄方向,蛋白質合成方向

2.hnRNA經過RNA拼接過程去掉留下

3.原核生物蛋白質合成的起始tRNA是，它攜帶的氨基酸是而真核生物蛋白質合

成的起始tRNA是,它攜帶的氨基酸是

4.將重組DNA引入受體細胞這一過程稱為

5.tRNA的二級結構呈______形狀,它的3'末端為,5'末端為

6.胰島素受體蛋白存在于

7.胰凝乳蛋白酶的親和標記試劑為,它作用于酶活性中心的

8.維持蛋白質三級結構最主要的作用是

9.高等動植物含有一個不飽和鍵的脂肪酸,其雙鍵位置一般在第碳原子之間

10性激素與靶細胞受體結合后,進入細胞核與作用從而調節基因表達

11.維生素D3的活性形式是

12.纖維素和淀粉分子結構的區別在于，纖維素的葡萄糖分子是以連接而成,而淀粉是以

連接而成..

13.在脂肪酸生物合成中,酰基的載體為在脂肪酸氧化中?；妮d體為

14.氨基酸代謝的一碳單位由供給,核甘酸生物合成中的一碳單位由供給.

15.糖酵解過程在細胞的部位進行,TCA循環在細胞的部位進行,氧化磷酸化在細

胞的部位進行.

四是非題

1.激素鳥二醇的原初作用在細胞核（）

2.在細胞培養物由供氧條件轉為厭氧條件時葡萄糖利用速度增加（）

3.氟化物引起缺氧是由于抑制底物磷酸化（）

4.細胞液中脂肪酸的合成是需要線粒體產生乙酸，而乙酸是由乙酰輔酶A將它帶出線粒體膜（）

5.所有蛋白質的克分子消光系數都是一樣的（）

6.促甲狀腺激素是由垂體前葉分泌的,含糖基的單鏈蛋白質（）

7.抑制劑對酶的抑制作用是酶變性失活的結果.（）

8.糖昔鍵對堿穩定,而易被酸水解.（）

9.限制性內切酶的生物學作用是分解外源DNA（）

10別構酶的動力學曲線特點是都為S型（）

H.DNA是遺傳物質,而RNA不是遺傳物質（）

12.雙螺旋DNA復制后,子代DNA不含親代成分（）

13.在蛋白質合成中,起始合成時起始tRNA結合核糖體的A位（）

14.每個原核細胞染色體上只有一個復制起點,而每個真核細胞染色體是有多個復制起點.

15原核生物轉錄啟動子有3個重要部位:-10區,-35區,SD序列（）

五.分析計算

1.含有一個九肽，分別用（1）胰蛋白酶（2）胰凝乳蛋白酶（3）竣肽酶（4）澳化氟處理，試標

出對肽鏈的作用部位LeuMetArgProAluLysTrySenTry

2.一個大腸桿菌中含有106個蛋白分子，假設每個蛋白分子，平均分子量為40000,并且所有分子都

處于a螺旋,試計算大腸桿菌中蛋白質肽鏈的長度.

3.lug純酶（分子量為92000）.在最適條件下催化反應速度為0.5umol/min,計算（1）酶的比活力（單

位/蛋白質）（2）轉換數

4.請分別指出（l）DNA復制（2）RNA復制（3）蛋白質合成三個過程的忠實性如何保持的

5.用純化的脂肪酸合成酶進行脂肪酸的合成（1）假設底物乙酰輔酶A的甲基為3H所標記,那么形成

的軟脂酸（16:0）中哪些H原子將被3H標記.（2）假設用底物為丙二酰輔酶A,其兩個H都被標記呢？

六.附加題

1.E.Coli的一種體外蛋白合成系統中，由多聚核甘酸AUGUUUUUUUUUUUU指導fMETPhePhePhe

Phe合成,在某種抗生素存在下，這個多聚物只能指導合成fMETPhe,試問1,這種抗生素抑制了多肽

合成的那一步.2,設有受抑制的寡肽或二肽，在合成終止時與什么tRNA相連？

2.假定有一只體重為250克的大白鼠,其呼吸強度為500vl02/g體重/小時，請計算24小時能產生

多少克ATP(ATP分子量為507)

參考答案

、

1.核酶：具有酶活性的RNA。

2.衰減子：大腸桿菌色氨酸操縱子中一段DNA序列，既是終止信號，也是調節信號，只有當缺少色

氨酸時，該操縱子中的結構基因才能通過衰減子而進行轉錄。

3.第二信使：激素和細胞膜受體結合，受體將激素信號通過細胞內的物質如cAMP、cGMP等傳遞到

細胞內部，信號逐漸放大，引起細胞內反應。這些傳遞激素信號的物質如cAMP、cGMP稱為第二信

使。

4.酮體：乙酰乙酸、8-羥基丁酸和丙酮3種物質的總稱，酮體過多會導致中毒。

5.鈉鉀離子泵：是跨膜轉運鈉鉀離子的膜蛋白，需要ATP,是四聚體蛋白質。

-?、

1.DHU二氫尿喀咤；2.GHS還原型谷胱甘肽；3.cccDNA共價閉合環狀DNA

4.NADP尼克酰胺二核甘酸磷酸；5.GH生長激素；6.MSH促黑素細胞激素

7.cGMP環鳥甘酸；8.LTR長末端重復序列

9.ATCase天冬氨酸轉氨甲酰酶10.PRPP1'焦磷酸-5'磷酸核糖

--、

1.5'-3'5'-3'N-C；2.內含子，外顯子；3.fMet,fMet,tRNAMet,Met

4.轉化/轉染；5.三葉草，CCA,多數為G；6.細胞質膜；

7.DFP(二異丙基氟磷酸)，Ser殘基；8.疏水作用力；9.9?10；10.染色體

11.1,25-二羥D3；12.0-1,4-糖昔鍵，a-1,4-糖昔鍵；13.ACP,CoA-SH；

14.S-腺昔蛋氨酸，四氫葉酸；15.細胞漿，線粒體，線粒體內膜，葉綠體內膜

四、

1.X；2.X；3.X；4,V；5.X；6.X；7.X；8.V；9.V；10.X；

11.X；12.X；13.X；14.V；15.X

五、

1.LeuMet--ArgProAlaLysTyrSerArg

澳化富胰蛋白酶胰蛋白酶胰凝乳蛋白酶竣肽酶B

2.此蛋白質殘基數為：4000/110=363.6,以螺旋存在時的長度為：363.6*0.15=54.54nm,106個蛋

白質的總長度為：54.54nm*106=5.5cm

3.已知此酶1ug催化反應速度0.5umol/分,活力單位是0.5U,比活力是0.5U/1ug,

0.5*103U/mg,轉換數是0.5/60=0.0083umol/秒。

4.(1)DNA復制的忠實性保持機制是：以母鏈為模板，通過堿基互補配對合成新的DNA,修復機制

有光修復、切除修復、重組修復等。

(2)RNA合成的忠實性保持機制是：以DNA的一條鏈為模板，按照堿基互補配對進行轉錄，順式作

用元件的作用，轉錄后加工中酶的作用。

(3)蛋白質合成的忠實性保持機制是：mRNA自身序列的穩定性(mG帽子、poly-A結構等)，密碼

子和反密碼子通過氫鍵配對，氨酰-tRNA合成酶的選擇性，副密碼子的作用，翻譯后運輸、分泌、

加工中信號肽、導肽及各種酶的作用。

5.(1)脂肪酸從左側開始，奇數位上的碳原子帶有3H.

(2)標記物為00C-C3H2-C0SCoA,合成的軟脂酸有14個3H,3H在奇數位上。

第一組

1.（1）抑制多肽合成移位這一步驟。

（2）和Phe-tRNA相連，在肽鏈合成終止前，肽鏈和最后一個加入的tRNA相連，當tRNA和肽鏈分

離后才能離開核糖體。

2.500*250*24*3/（22.4*106）=0.402mol,507*0.402=203.71

§北京大學1998年攻讀碩士學位研究生入學試題生物化學

一，填空題（應該是選擇題，但是原題沒有收錄選擇項，只有正確答案）。

1,用前三酮試劑確定氨基酸是靠它與下面（）功能集團起作用。

2,影響酶催化效率的因素是（）?

3,在適當條件下，鹽酸服變性球蛋白的可逆性，可證明（）。

4,蛋白質中形成肽鍵平面的原因是（）。

5,三個氨基酸（Asp,Leu,Lys）的混合物，經過一個sulphonotedpolysturene陽離子交換樹脂粒，

用PH5的緩沖液洗脫，洗脫液中氨基酸出現的順序是（）。

6,溶液A的PH為7.0,溶液B的PH為6.0的兩個溶液的體積相等，則其H+的含量（）。

7,0.01N醋酸的PH為3.4,0.01NHC1的PH是2,用0.01NNaOH分別去中和15mL的以上醋酸和

鹽酸，試問需用（）NaOH。

8,酶活性的國際單位（I.U.）定義為在30。C下，將底物轉化為產物，在（）速度時的酶量。

9,在pH5.0的經DEAE-纖維素柱純化酶，此酶的比活從2.2U/mg提高到303U/mg,表明（）

10,10-5毫克分子的乳酸脫氫酶，每秒催化10微克分子丙酮酸的生成，此酶的turnovernumber是

（）。

H,胰凝乳蛋白酶中電荷延遲系統是指（）。

12,在整體代謝的調節環節調節中，別構效應可調節（）。

13,A因子存在時，一個酶的初速度對底物濃度曲線為S形，而當A因子濃度增高時，此線左移，

說明A因子是（）。

14,一個酶的Km為3X10-5M,Vmax為轉化8000克分子底物/分/克分子酶，底物濃度為3X10-5M時，

初速度是（）

15,在一個2底物-2產物酶反應系統中，對其中一個底物的Km值是（）。

16,一氧化碳有毒是因為（）。

17,膠原蛋白的特性是（）。

18,a螺旋與B折疊的區別（）。

19,促進酶分子催化反應的機制是（）。

20,酶可以改變（）。

21,轉化丁二酸根為反丁二烯酸根所需要的酶是（）。

22,激素17雌二醇發揮效應的位置在（）o

23,3'-5'cAMP的性質是（）。

24,谷氨酸+丙酮酸=a酮戊二酸+丙氨酸，需要的輔酶為（）。

25,細胞液中脂肪酸的合成需要線粒體產生乙酸，乙酸是由（）帶出線粒體膜。

26,氨對哺乳類細胞有害是因為（）o

27,U第一位上N原子來源是（）。

28,嘿吟生物合成關鍵步驟是（）o

29,當一個蛋白質樣品不純時，要測定它的性質，可用的方法有（）。

30,在同一細胞中，RNA和DNA雜交性質是（）。

31,DNA的Maxam-Gilbert化學法序列分析對底物的要求是（）。

32,單鏈DNA分子溶液形成雙鏈的復性過程是（）級反應。

33,真核細胞中的RNA聚合酶III負責（）的合成。

34,DNA和RNA的差別在于（）。

35,一個操縱子的啟動區產生一個降低的突變后會（）。

36,一個B珠蛋白mRNA的cDNA克隆可以在大腸桿菌中正確的進行肽的生物合成，而染色體基因的

克隆不能，這是因為（）。

37,分析了一個細胞中的蛋白質發現其lie少于正常的情況，這是因為有好多Ue為Vai所代替，

這可能發生了（）突變。

38,大腸桿菌核糖體的性質（）。

39,許多細胞含有一種酶，可以使DNA上少數C甲基化，產生5'-甲基-C,這種甲基化部位成為CG

轉變成AG的突變熱點，這是因為（）。

40,限制性內切酶的性質（）。

41,DNA生物合成的過程（）。

42,如由5'-脫氧尿喀咤所引起的突變使一種喀咤為另一種喀咤所替換，這種轉變叫做（）o

43,假如一個mRNA樣品，其G占29%,貝ijC為（）。

44,在大腸桿菌中合成蛋白啟始過程（）反應是必需的。

45,遺傳密碼的兼并性是指（）。

二，填空

1,蛋白質的最低自由能構型經常為殘基之間的共價交連而加強。

2,非極性環境中，例如膜的內部，蛋白質可以折疊成側鏈向外側鏈彼此相互作

用。

3,糖原異生受抑制，被激活。

4,由于調控酶而加速脂肪合成。

5,維生素B12是,它是酶的輔基，其作用是。

6,尿素循環中的調控酶是,存在于中，是此酶的正調節物。

7,由于酶的遺傳缺陷使_______在尿中積累，加FeC13使尿變成橄欖色。

8,由于酶的遺傳缺陷使在尿中積累,見氧氣變成黑色。9,膳食中抑制

酶從而影響膽固醇酯的合成。

三，問題

1,一個激素多肽鏈有29個氨基酸,順序為Glu,Vai,Lys,Asn,Cys,Phe,Arg,Trp,Asp,Leu,

Gly,Ser,Leu,Glu,Ala,Thr,Cys,Arg,His,Met,Asp,Gin,Cys,Tyr,Pro,Gly,Glu,Glu,Lys,

a,若沒有二硫鍵存在，胰蛋白酶水解可有幾個肽。b,在pH7.5時激素凈電荷是多少，若PKa值已知。

c,提出一個設計方案證明上述激素有二硫鍵。

2,為什么SDS電泳中小分子遷移得最快？

3,如何解釋酶活性與PH的變化關系，假如其最大活性在pH=4或pH=ll時，酶活性可能涉及那些

側鏈？

4,寫出下列生化反應式，并注明催化的酶及輔酶。

a,hydrolysisf,reductionofadoublebond

b,Oxidativedecarboxylation,g,isomerigation

c,phosphorolysish,dehydration

d,nonoxidativedecarboxy1ationi,condensation

e,thiolysisj,phosphorylation

5,胃液大約pH2而分泌H+到胃中，分泌細胞內為pH7,假定H+梯度沒有膜電勢影響，計算形成梯度

的AG（RT=620卡/mol）。若ATP水解使H+分泌，計算每個ATP水解分泌的H+數目，若ATP水解為

-7.3千卡/克分子，細胞內ATP濃度為10-3M,ADP為10-5M和磷酸為10-3M.

6.T1核糖核酸酶水解一個純的tRNA,得到一個寡聚核昔酸，再用蛇毒二脂酶水解此寡聚核昔酸，

產生pA,pC,pU和U,其比例是1：2：2：1,僅靠此以及tRNA分子3'端核甘酸序列的知識，請寫出

此寡聚核昔酸序列。

7,在設計測定酶活性實驗時，希望測得的最初速度對底物濃度的小量波動并不敏感，S/Km應該大

于多少才能使底物濃度有10%差別時，所測得的初速度的誤差小于1%?（假定符合米氏公式）

8,你克隆了一個有機體的cDNA基因，并標記此cDNA作為探針。此基因在基因組中只含有一個，

并且基因上無插入序列，也無EcoRI位點。如用此探針去與EcoRI切割的基因組DNAsouthern轉

移膜雜交。那么你最可能找到幾條放射性條帶？如果你把此機體基因組DNA的一個BamHI片段克隆,

并能與你原有的cDNA探針雜交?，F在你用這個標記的BamHI片段去與剛才的southern轉移膜雜

交，你得到了幾條放射性條帶。請用圖示說明EcoRI和BamHI位點與此基因末端的可能相互關系。

參考答案

一、1.氨基2.溫度、pH、底物濃度、酶濃度；3.蛋白質的空間結構是靠次級鍵維持的；

4.肽鍵的偏雙鍵性質；5.Asp>Leu>Lys；6.氫離子濃度為10-7和10-6；

7.1分鐘轉化1微摩爾底物所需的酶量。8.初速度；9.酶的純度提高了137.7倍；

10.10/0.01=1000微摩爾/秒；11.Aspl02-His57-Serl9512.反應的方向和速度；

13.激活劑；14.4000克分子底物/分/克分子酶；

15.遠遠小于其底物濃度時，這一雙底物反應可以看做單底物反應；

16.一氧化碳可以使細胞色素c和血紅蛋白中的二價鐵氧化為三價鐵

17.耐水解；18.主鏈的彎曲不同；19.降低活化能；20.反應速度，但不改變平衡點；

21.差向異構酶；22.細胞核中的DNA分子；23.第二信使；24.磷酸毗哆醛；25.檸檬酸；

26.中樞神經系統中毒，機理是頭部氨和a-酮戊二酸結合生成谷氨酸，a-酮戊二酸減少，三竣酸

循環減弱，ATP減少，引起腦功能障礙。

27.天冬氨酸；28.第一步反應和次黃口票吟之后的分支反應；29.抗原-抗體親和反應；

30.DNA的轉錄過程；31.需要大量的高純度的末端標記的DNA樣品；32.一級反應；

33.5SrRNA、tRNA和多數小分子RNA組成；34.DNA中的核糖變為脫氧核糖，T變成U；

35.導致該操縱子內結構基因的轉錄速度下降；

36.染色體DNA分子遠遠大于一個珠蛋白基因，表達載體無法攜帶大的DNA片段；

37.He密碼子的一個堿基發生突變，使lie密碼子變成Vai的密碼子；38.70S

39.DNA分子中甲基化C在DNA復制時被誤當作T,結果新合成鏈同一位置的G錯誤變成A；

40.對自身DNA的標記和限制外來DNA的作用。41.DNA的合成過程就是復制過程；

42.替換；43.29%；44.第一個進入肽鏈的蛋氨酸甲基化；45.密碼子的第三位具有擺動性。

-*、

1.半胱氨酸；2.a-螺旋或6-片層，前者更為普遍，疏水側鏈朝外，親水側鏈相互作用。

3.ATP,檸檬酸；4.胰島素，脂肪合成酶；5.鉆氨素，甲基丙二酸單酰CoA基團變位；

6.氨基甲酰磷酸合成酶，肝線粒體，乙酰谷氨酸；7.苯丙氨酸4-單加氧酶，苯丙酮酸；

8.尿黑酸氧化酶，尿黑酸；9.膽固醇，3-羥-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶

--、

1.①3個片段，胰蛋白酶水解精氨酸、賴氨酸竣基參與的肽鍵。

②7個酸性氨基酸，4個堿性氨基酸，全分子靜電荷為3-。

③對角線電泳。

2.小分子進入分子篩膠粒內部，SDS電泳時移動速度取決于分子的大小，分子越小移動的速度越快。

3.酶活性和pH的關系在于：首先影響酶活性中心氨基酸殘基的R基團的解離狀態；其次影響酶的

空間構象。在PH4時酶活性最大，有可能酶的活性中心包含天冬氨酸和谷氨酸；在pHH時酶活性

最大，有可能呢此酶的活性中心包含精氨酸、賴氨酸。

4.寫出結構式

a,hydrolysisf,reductionofadoublebond水解反應，比如降解一■個雙鍵

b,Oxidativedecarboxylation,g,isomerigation氧化脫竣，

c,phosphorolysish,dehydration磷酸水解

d,nonoxidativedecarboxylationi,condensation非氧化脫竣

e,thiolysisj,phosphorylation硫解作用

5.

AG=2.303*RT*logl0-2/10-7=2.303*620*5=7130卡/mol,7300/7130=lmol

6.T1核糖核酸酶切割RNA后，產生T-磷酸尿喀咤為末端的單核甘酸或寡核甘酸；

蛇毒磷酸二酯酶切割DNA/RNA,產生5'-單核甘酸

根據題意，所有tRNA3'末端堿基序列是3'-ACC,整體序列為3'-ACCUUU-5,

7.S/Km應該大于50.

8.對于基因組中只有一個基因，且無插入序列和EcoRI位點，此探針與EcoRI切割的基因組DNA進

行Southern轉膜雜交，可能找到1條放射性條帶。

當用標記的BamHI作為探針與剛才的EcoRI切割的基因組DNA片段進行Southern轉膜雜交，由于

此探針和原有的cDNA雜交，說明BamHI片段探針的切點在這一基因序列之內，仍然可以得到1條

放射性條帶。

§北京大學1999年攻讀碩士學位研究生入學試題生物化學

一.名詞解釋

米氏常數(Km)磷酸戊糖途徑調節子酶輔助因子cori循環與巴斯德效應滾動環復制

—.結構式

TPCK；尼克酰胺；GC配對；IP3

三.填空

1,蔗糖是否為還原糖。

2,糖背鍵的兩種類型________和o

3,DNA的一條鏈序列為GTCAATG,那么另一條鏈的序列為。

4,常數表征酶的催化效率。

5,P因子的催化活性是和o

6,常見的遺傳缺陷病有,,,；常見的放射性標記的同位素

，，，o

7,DNA復制過程中動物是以為能源，E.Coli以為能源。

8,生物體中產能最多的生化反應過程是=

9,發現TCA循環，發現化學滲透學說。

10,真核生物rRNA拼接過程中左端的拼接點順序為——右端為切除——結構。

11,生長激素是由_______產生的。

12,E.ColiDNAPolI經酶切，得到大小片段，其中大片段具有酶活性和酶活

性，小片段具有酶活性。

13,必需脂肪酸有和-

四.回答

1，作動力學曲線區分酶的可逆性抑制與不可逆抑制？

2,比較ATP與ppi在磷酸鍵及生物學功能方面的異同。

3,真核生物至少需要31種tRNA才能識別61種密碼子，而線粒體中tRNA只有22種，為什么？

4,闡明衰減子對操縱子的調控。

5,糖酵解和糖異生過程中涉及的不可逆反應和限速步驟。

五.計算

3,DNA半保留復制。15NDNA在14N培養基上培養一代后，14NDNA與14N-15NDNA雜交分子之比是

多少？

4,正常DNA的超螺旋密度為-0.05,在無拓撲異構酶條件下當復制到超螺旋密度為0.07時，由于

正超螺旋的阻力而不能繼續復制，求此時的復制百分數。

5,2ADP===ATP+AMP,已知[ADP][AMP][ATP]求：1,該反應的能荷。2,Keq(各濃度為平衡態濃

度)。

6,L=T+W,若a=-0,05,則DNA可以復制的百分比。

參考答案：

、

1.米氏常數：即Km,是酶的特征常數，當反應速度達到最大反應速度一半時底物的濃度。

2.磷酸戊糖途徑：糖分解代謝途徑之一，6-磷酸葡萄糖首先脫氫、脫竣轉變為5-磷酸核糖，經過一

系列分子重排，產生不同的磷酸單糖，進入糖酵解。

3.調節子：受一種調節蛋白控制的幾個操縱子構成的調節系統。

4.酶的輔助因子：酶分子中非蛋白質組成成分，包括維生素和無機離子等。

5.cori循環與巴斯德效應：在耗氧的同時葡萄糖消耗減少，乳酸堆積終止的現象稱為巴斯德效應。

肌肉厭氧分解產生的乳酸進入血液，經肝臟轉變為丙酮酸參與糖異生后再變為葡萄糖，葡萄糖再次

經過血液送回到肌肉的過程。

6.滾動環復制：復制時首先形成共價閉環雙鏈，然后正鏈切開，產生游離的3'-羥基和5'-磷酸

末端，5,-磷酸末端細胞膜結合固定，DNA聚合酶以環狀負鏈為模板，從正鏈的3,-羥基末端加入

脫氧核甘酸，使新生鏈延長，通過滾動合成新的正鏈。

二、TPCK：尼克酰胺：維生素pp；GC配對：G和C形成3個氫鍵；IP3：肌醇三磷酸

三、1.不是還原糖；2.N-糖昔鍵，0-糖昔鍵；3.3'-CAGTTAC-5'；4.米氏常數；

5.終止轉錄因子，NTPase活性；6.血友病，苯丙尿酮癥，白化病，糖尿病，3H,32P,32S,1311,14C；

7.三磷酸核昔,三磷酸核昔；8.氧化磷酸化;9.Krebs,Mitchell；10.GGAGGG,CUCUCU,內含子；

11.垂體前葉；12.聚合酶，3,-5,外切核酸酶，5,-3,外切核酸酶；

13.亞油酸，亞麻酸

四、

2.ATP和ppi的比較：ATP含有3個磷酸酯鍵，ppi有一個，ATP末端的2個磷酸酯鍵水解放出較多

的能量，生物需要能量時ATP水解，ppi為無機物，不具有生物功能。

3.(1)線粒體DNA編碼的蛋白質數量少于核基因，大部分線粒體蛋白質是由核基因編碼的。

(2)線粒體的遺傳密碼不同于細胞核。

4.衰減子：大腸桿菌色氨酸操縱子中一段DNA序列，既是終止信號，也是調節信號，只有當缺少

色氨酸時，該操縱子中的結構基因才能通過衰減子而進行轉錄。

色氨酸操縱子mRNA的前導區編碼一個14肽，前導區的RNA以1、2和3、4配對的形式出現，轉錄

停止在終止信號區，。當環境中缺少色氨酸，前導肽不能形成，但有其他氨基酸時，Trp-tRNA不能

形成，前導肽翻譯到色氨酸密碼子時候停止，前導區的2、3配對，終止信號不能形成，轉錄繼續。

當色氨酸存在或者過量時，前導肽正常合成，3、4配對，使得核糖體在區段1、2之間結合，轉錄

終止。

5.糖酵解不可逆有3個步驟：(1)丙酮酸一磷酸烯醇式丙酮酸；

(2)1,6-二磷酸果糖——6-磷酸果糖；(3)6-磷酸葡萄糖一一葡萄糖

五、

3.14N和14N-15N的比值為0：2

4.復制百分數=(0.07+0.05)/0.02=0.024=2.4%

§北師大2000年攻讀碩士學位研究生入學試題生物化學

一.名詞解釋(2/20)

1.亞基；2.酶的必須基團；3.修飾核昔；4.酵解；5.氧化磷酸化

6.DNA的半不連續復制；7.聚合酶鏈式反應；8.核酸雜交；9.分子伴侶；10.增強子

二.填空（1/20）

1.穩定蛋白質膠體狀態的因素是蛋白質分子上的及.

2.氫鍵有兩個主要特征__________和.

3.兩條相當伸展的肽鏈或同一條肽鏈的兩個伸展的片斷之間形成氫鍵的二級結構稱為.

4.使酶具有高催化效應的因素有,,和.

5.tRNA的分子3'端的堿基序列是.

6.酵母DNA按摩爾計含有32.8%的T,則A為,G為和C為.

7.真核細胞核小體的組成是和

8.核酸變性后可發生_________效應.

9.破壞a-螺旋結構的氨基酸是

10.與mRNA密碼子ACG相對應的tRNA的反密碼子是

11.內含子是指

12.有機體的代謝和代謝是密切聯系在一起的

13.ATP在細胞的產能和煦能過程中起著重要的作用

14.電子傳遞鏈在原核細胞存在于______上,在真核細胞存在于內膜上

15.磷酸果糖激酶是酵解過程最關鍵的酶

16.TCA循環是生物體內糖，脂,蛋白質代謝的

17.生物體內卵磷脂合成的兩種不同途徑是和

18.在靈長類動物中,喋吟分解代謝的最終產物是

19.脫氧核甘酸的生物合成是在___________的基礎上還原生成的

20.在真核生物中DNA復制的主要酶是

21.酶的磷酸化和脫磷酸化作用是共價修飾調節酶活性的一種重要方式.

22.操縱子包括,和.

23.所有原核生物的終止子在終止點之前均有一個,其產生的RNA可形成.

24.在轉錄過程中RNA聚合酶全酶的a-因子負責,核心酶負責.

25.DNA拓撲異構酶是與有關的酶

三.問答題（40分）

1,用Imol酸水解五肽,得兩個谷氨酸，一個賴氨酸；用胰蛋白酶裂解成兩個碎片,在Ph=7時電泳,

碎片之一向陽極,另一個向陰極；碎片之一用DNP水解得DNP-谷氨酸；原五肽用胰蛋白酶裂解產生

兩個二肽和一個游離的谷氨酸,寫出五肽順序（5分）

2.簡述如何用酶的競爭性抑制劑的理論來尋找或合成控制代謝的藥物（5分）

3.什么是遺傳學中心法則?為什么說阮病毒的發現是對此法則提出了挑戰？（5分）

4.在動物體內脂肪酸能轉變成糖嗎?為什么？（4分）

5.簡述原核生物與真核生物蛋白質合成的區別（6分）

6.簡述真核生物的基因表達調控（6分）

7.ImolC6=C714碳不飽和單烯酸徹底氧化分解生成C02和H20共產生多少molATP?（5分）

8.大腸桿菌僅在有充足的丙氨酸提供能量的情況下能存活嗎?為什么？

參考答案：

、

1.具有四級結構的蛋白質中的每一個具有三級結構的多肽鏈。

2.酶活性所必須的氨基酸殘基的基團。

3.除了5種正常的核昔酸之外，有些核昔分子發生甲基化、環上原子取代后形成的核普。

4.糖無氧代謝途徑，葡萄糖變成丙酮酸，并釋放能量合成ATP。

5.是生物儲存能量的方式之一，伴隨呼吸鏈上的電子傳遞給氧并生成水，合成ATP。

6.DNA復制時，前導鏈的合成是連續的，后隨鏈的合成是先合成岡崎片段，然后在連接酶的作用下

連接成完整的DNA鏈。

7.以單鏈DNA為模板，在Taq聚合酶作用下，在引物后快速合成DNA過程。

8.分為DNA-DNA、DNA-RNA二種，不同來源的核酸單鏈通過堿基互補形成雙鏈的過程。

9.蛋白質折疊過程中協助蛋白質折疊成正確構象的蛋白質或酶。

10.增強子首先發現于真核生物DNA中促進DNA轉錄的局部序列，屬于基因轉錄的順式元件。

-?、

1.靜電荷、水化層；2.方向性，飽和性；3.0-片層；4.底物和酶的靠近和定向，酶使底物發生形

變，共價催化，酸堿催化;5.3'-ACC-5'；6.32.8%,38.6%,38.6%；

7.DNA,組蛋白；8.增色效應；9.甘、脯氨酸；10.CGA；ll.mRNA翻譯后要除去部分在DNA中對應的

序列；12.分解代謝，合成代謝；13.中介作用；14.胞漿，線粒體，葉綠體；

15.調節酶；16.樞紐；17.從頭合成，節約利用途徑；18.尿酸；19.二核甘酸；

20.DNA聚合酶a；21.高等動物；22.調節基因，結構基因，調節元件；

23.回紋結構，發夾結構；24.識別啟動子，合成RNA；25.DNA復制時雙鏈解開

--、

1.賴-賴-谷-精-谷

2.酶的競爭性抑制是抑制劑和底物相似，或者與酶誘導底物形變的結構相似，增大酶的Km。

應用這個原理人們發現磺胺藥，磺胺藥和維生素BH相似。

3.中心法則：DNA自我復制，轉錄成RNA,RNA指導翻譯蛋白質合成。阮病毒的出現挑戰了這個原則,

因為阮病毒是蛋白質發生傳染，將正常的蛋白質轉變為阮病毒。

4.動物體內脂肪酸不能轉變為糖，動物體內不存在乙醛酸循環。正常情況下，乙酰CoA進入三竣酸

循環產生二氧化碳和水。

5.

原核生物真核生物

核糖體70S,轉錄和翻譯同時進行80S,轉錄和翻譯分開

底物20種氨基酸20種氨基酸

搬運tRNAtRNA

模板和起始密碼mRNA,AUG,mRNA,AUG

SD-序列無SD-序列，掃描尋找AUG

能量ATP,GTPATP,GTP

起始氨基酸甲酰蛋氨酸蛋氨酸

輔助因子少多

后加工有信號肽有信號肽，多種修飾

6.（1）轉錄前水平；（2）轉錄水平；（3）轉錄后水平；（4）翻譯水平；（5）翻譯后加工、運輸和

分泌等

7.經過6次B氧化，產生7分子乙酰輔酶A,能量為：7*12+6*4-1*1.5-2=104.5

8.能存活，因為丙氨酸脫氨生成丙酮酸，丙酮酸經過三較酸循環產生能量，丙酮酸可以經過轉化變

成其他的酮酸，和氨結合后又可以變成其他的氨基酸，供給機體進行代謝。

§北師大2001年攻讀碩士學位研究生入學試題生物化學

一.名詞解釋（20分）

1.蛋白質前體；2.分子??；3.核糖體；4.酶的催化基團；5.核酶

6.順式作用元件；7.增強子；8.受體；9.分子篩層析；10.PCR

二.填空(30分)

1.血紅蛋白與氧結合是通過效應實現的.由組織產生的C02擴散到細胞,從而影響Hb和02

的親合力,這稱為效應

2.賴氨酸帶三個可解離基團,它們Pk分別為2.18,8.95,10.53,其等電點為

3.糖肽連接的鍵是鍵,而脂質與蛋白質以鍵結合而成.

4.測定蛋白質中二硫鍵位置的經典方法是.

5.破壞a-螺旋結構的氨基酸是和

6.蛋白質二級結構和三級結構之間還存在_____和兩種組合體

7.DNA變性后,子外吸收能力,黏度

8.tRNA的反密碼子為UGC,它識別的密碼子為

9.染色體中DNA的構型主要是______型

10.競爭性抑制劑使Vmax,Km.

11.生物氧化主要是通過代謝物反應實現的，生物氧化產生的水是通過

形成的

12.磷酸戊糖途徑的生理意義是和

13.糖原合成的關鍵酶是糖原分解的關鍵酶是.

14.一分子脂肪酸活化后需經轉運才能由胞漿內進入線粒體內氧化,線粒體內的乙酰CoA

需經才能將其帶出線粒體參與脂肪酸的合成

15.催化IMP轉變為AMP的酶有和

16.DNA復制，引發前體加構成

17.氨酰Trna合成酶既能識別又能識別

三.問答題(50分)

1.某九肽組成為兩個Gly,兩個Phe,Tyr,Met,Asp,Arg和Pro,經胰凝乳蛋白酶水解得五肽和四肽，

四肽組成為Phe,Tyr,Gly和Pro.此九肽的CNBr處理產物經陽離子交換樹脂層析并洗脫得一組成為

Arg,Phe和Gly的三肽.此九肽經胰蛋白酶水解得Phe,如用FDNB反應后在水解測得DNP-Tyr.請寫出

此九肽順序及解析過程(6分)

2.簡述血紅蛋白的結構及其結構與功能的關系(6分)

3.簡述酶活性的的調節方式有那些？(6)

4.簡述tRNA的結構特征及其作用與作用機制(6)

5